| Molecular Weight: | 247.34 |
| Formula: | C14H21N3O |
| Purity: | ≥98% |
| CAS#: | 146986-50-7 |
| Solubility: | DMSO up to 100 mM |
| Chemical Name: | (1R,4r)-4-((R)-1-aminoethyl)-N-(pyridin-4-yl)cyclohexanecarboxamide |
| Storage: | Powder:4oC 1 year. DMSO:4oC3 month;-20oC 1 year. |
Biological Activity:
Y-27632 is a widely used, selective inhibitor of the Rho-associated protein kinase p160ROCK with a Ki value at ~ 0.14 µM. In many studies, it was shown and used to enhance the survival and cloning efficiency of many primary cell types after single cell dissociation without affecting their self-renewal properties, including hESC/iPSCs, neural stem cells, intestinal stem cells, and mammary epithelial cells.
How to Use:
- In vitro: Y-27632 is typically used at 10 μM concentration in cell culture.
- In vivo: In several hypertension rat models, Y-27632 was orally dosed at 30 mg/kg to significantly decrease blood pressure.
Reference:
- 1. Uehata M, et al. Calcium sensitization of smooth muscle mediated by a Rho-associated protein kinase in hypertension.(1997) Nature. 389(6654):990-4.
- 2. Ishizaki T. et al. Pharmacological properties of Y-27632, a specific inhibitor of rho-associated kinases. (2000) Mol Pharmacol 57, 976-983.
- 3. Koyanagi et al. Inhibition of the Rho/ROCK pathway reduces apoptosis during transplantation of embryonic stem cell-derived neural precursors. (2008) J. Neurosci Res 86: 270-280.
- 4. Watanabe et al. A ROCK inhibitor permits survival of dissociated human embryonic stem cells. (2007) Nat Biotech 25: 681-686.
Y-27632_spec.pdf
Y-27632_MSDS.pdf
Products are for research use only. Not for human use.
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、
Cell-Based ELISA
的优点:
Cell-Based ELISA
(基于细胞的
ELISA
)是一种全新的
ELISA
技术,有两个最突出的优点:
1.1
不需要抽提蛋白、包被微孔板:细胞直接在微孔板里培养,待检测的时候,将细胞固定在微孔板上并
进行通透处理即可。这样就避免了抽提蛋白时,由于客观和主观上引起样品的损失而导致实验结果在一定
程度上偏离了实际情况。
同时不用包被微孔板,
简化了实验流程,
有助于提高效率。
科研人员在一个
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孔
酶联板上,便能检测目标细胞蛋白经刺激或抑制作用后的表现。由于省去抽提蛋白和裂解细胞的步骤,样
本的损失也能降到最低,比起其他普通的
ELISA
测定方法,这项全新的
ELISA
技术能更快速、更方便
地一次检测大量的细胞内蛋白。
1.2
可同时检测两种不同蛋白:
封闭后加入两种抗不同蛋白且来源于不同宿主的一抗,
然后再加入不同的
二抗,加入两种荧光底物,检测两个波长。同时检测两种蛋白的好处是显而易见的,可以减少工作量,此
外还可以满足一些特殊的实验需要,例如,需要测定某个蛋白的磷酸化比例,就需要测定磷酸化蛋白的数
量和总蛋白的数量,这两个测定在同一次实验进行,有助于消除实验误差,得到更为精确的实验结果。
2
、
Cell-Based ELISA
的两种技术:
某些公司发展了双通道
Cell-Based ELISA
技术;
双通道与单通道
Cell-based ELISA
比较:
双通道
cell-based ELISA
,顾名思义,即一次可以同时检测两种目的蛋白,
R&D Systems
提供的
Cell-based ELISA
就是双通道
cell-based ELISA
,原理略:(需要荧光检测方式和相应仪器);
单通道
cell-based ELISA
,即一次只能检测一种目的蛋白,他和普通
ELISA
的主要区别在于样品处理过
程
3
、
cell-based ELISA
的应用:
该产品,最多发展起来的是用于检测磷酸化和非磷酸化蛋白的相对含量;
4
、有
cell-based ELISA
产品的公司:目前,多家
elisa
产品提供
商均
提供
cell
based
elisa
试剂盒,
如
Rnd
systems
,
raybiotech
,
ebioscience
,
millipore
等公司;
5
、如何自己进行
cell based elisa
实验?
事实上,根据单通道的
cell based elisa
原理,可以自己建立
cell based elisa
实验系统;
细胞加入培养板中;
加入刺激物或者抑制剂进行培养;
对细胞进行固定或者封闭;
加入第一抗体;
加入
HRP
结合的二抗(二抗的选择,同
western blot
);
加入底物进行显色;
Vanderbilt-Ingram癌症中心的主任HalMoses博士和他的实验室研究人员,于1985年辨识出TGF-b,这种物质具有生长刺激物和生长抑制的作用。从那段时间之后,TGF-b在直肠、乳房和其他癌症中所扮演的角色便获得研究人员的广泛研究。
如今Vanderbilt-Ingram癌症中心的一组研究人员,发现了TGF-b矛盾的生物学作用之线索。他们的研究结果将发表于2003年12月的NationalAcademyofScience网络版,网址为www.pnas.org,这篇研究将于2003年12月稍后发表于纸本中。
TGF-b通常会抑制细胞生长,但是,很多实质性肿瘤会过度表现TGF-b,而使细胞不完全被抑制,事实上,有时候它们因为TGF-b的讯息使肿瘤细胞的生长比正常细胞更快。
TGF-b使用多种标记途径将它的指令送达细胞核心,已知大约有至少四条途径以上。研究人员去除一种特殊蛋白质组成的TGF-b标记:Rho-ROCK。细胞便不再受到抑制,而再度开始生长。
[信息来源:中国科技信息网站]
该试剂盒是一种时间分辨的荧光共振能量转移免疫分析,该反应是一个竞争免疫反应,即铕标的cAMP示踪复合物与体系中的cAMP竞争结合标有Alexa Fluor 647染料的cAMP抗体。铕标cAMP示踪复合物是通过Biotin标记的cAMP与铕标的抗生物素蛋白链菌素(streptavidin)与抗体的复合物紧密结合产生的。
当抗体结合到示踪剂上时,340nm的激发光激发铕标分子,导致能量转移到Alexa Fluor 647染料上,结果产生665nm的发射光。荧光的强度与样品中的cAMP含量成反比。
本试剂盒用于检测在GPCR激动剂刺激下活细胞或者细胞膜制备品产生的cAMP。对于偶联Gαs的受体,激动剂刺激导致665nm的荧光强度降低,而拮抗剂则可以逆转这一效应;对于偶联Gαi的受体,在激动剂刺激的同时用forskolin刺激cAMP产生,那么激动剂则抑制forskolin诱导的cAMP的生成,因此对照只给forskolin的细胞组可以通过665nm荧光强度的增加反应激动剂的效应。
该试剂盒的灵敏度很高,室温下反应在20h内是稳定的。本试剂盒适用于在384孔板中进行24μl的微量分析。
抑制剂刺激细胞后,需要用PBS清洗后再做后续实验吗
RMgX + RX = R-R + MgX2.
这个反应需要的能量比生成格氏试剂的高,
因此降低反应温度是第一个选择。
其次, 增加镁得摩尔比, 让 RX与镁有更多机会反应, 而不是与RMgX。
第三, 降低RX的浓度, 即用更多的溶剂, 因为溶剂和格氏试剂有很显著的溶剂络合。
第四, 缓慢滴加RX., 即降低RX.在反应体系的浓度。
第五, 增加搅拌速率, 即, 让RX.与镁有更好的接触。

