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我的步骤:
1、16-22天小鼠颈椎脱臼法处死后,75%酒精浸泡30秒消毒,睾丸取出后置预冷PBS,40分钟(路上所需时间)后开始处理。
2、剔除白膜,剪碎睾丸。0.25%胰酶(含edta)1.5ml/个睾丸37°C消化30-50分钟,等体积DMEM/F12含10%FBS终止消化,1000r/MIN离心5分钟,弃上液。
3、加0.1%胶原酶消化30分钟,过200目网筛,1000r/MIN离心5分钟,弃上液。
4、DMEM/F12含10%FBS5ml重悬后转如培养瓶,入孵育箱37°C5%CO2培养。
请教各位,我到底是哪里有问题,是胰酶消化的时间长了吗?
我做的临床试验,就想简单检测PBMC细胞的凋亡,上流式检测,有啥检测效果好的步骤推荐一下,谢谢
想用二步酶消法来分离毛乳头细胞,一个毛囊大概有多少个毛乳头细胞?处于生长期的毛囊在显微镜下有什么特点?先谢谢大神们指点
请大神前辈指点指点,已经研三了,实验很不顺利,再这样都要延期的节奏了。请问最近急性分离出来的大鼠心肌细胞很不耐钙,做膜片钳封接不上可能是什么原因造成的?谢谢了!
最近在做黄体化颗粒细胞分离培养,但是注射器吸取大卵泡液或者从下颗粒细胞离心时就会凝固成果冻状,大家有碰到过这样的事情么?已经好几次了,一直是这样,大家给支个招吧
经过无数次的大鼠肝脏插针灌注,忍受过实验结果不理想的打击和折磨,今天终于成功了,特分享些相关图片以鼓励还在奋战中的网友们。
各位师兄师姐:
我近期负责的课题,需要进行人类血液淋巴细胞和DC细胞的分离和培养,但我在方面懂的不多,想求助这方面的大神们。后续我需要做RT-qPCR,western-blot、免疫荧光等实验,我应该去多少ml全血比较好?全血怎么保存?怎么进行分离?后续怎么培养和保存?
谢谢!
前辈们好,近期老板布置任务需要分离小鼠肝脏细胞,查了好多文献,都没有写胶原酶的cat#,只写sigma订购,想请教下,是否有人做过,可以提供下货号和使用方法吗?十分感谢。另外,文中还提到digitonin,如果有一起用到的话麻烦帮我查看下,谢谢。

