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Signagen/Ad-U6-shRNA(Scramble)-RFP/SL100952/200 µL (Std Pack)
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Signagen/Ad-U6-shRNA(Scramble)-RFP/SL100952/200 µL (Std Pack)
品牌 / 
Signagen
货号 / 
SL100952-200µL
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Pre-made Adenovirus, Ad-U6-shRNA(Scramble)-CMV-RFP from SignaGen

Product Category: Human Adenovirus Type5 (dE1/E3);  Ad-U6-shRNA(Scramble)-RFP; Ad-U6-shRNA(Scramble)-CMV-RFP

Description:

Recombinant type 5 adenovirus with E1/E3 deletion and
scramble shRNA under the control U6 promoter. RFP expression driven under a CMV promoter as reporter. This product used in the gene knockdown experiments as a control in cultured cells and animal experiments.

Titer: 1x1010 ~ 1x1011 PFU/mL

Storage Buffer: DMEM with 2% BSA & 2.5% Glycerol

User Manual:


Shuttle Vector Map:
Ad-U6-shRNA(Scramble)-RFP; Ad-U6-shRNA(Scramble)-CMV-RFP; Pre-made Adenovirus
 

 

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慢病毒专用转染试剂LentiFit™是由汉恒生物科技(上海)有限公司代理或销售的hanbio品牌的试剂,产品来源于上海。汉恒生物科技(上海)有限公司是中国最权威的慢病毒专用转染试剂LentiFit™试剂销售服务商之一,在上海等地方销售慢病毒专用转染试剂LentiFit™试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业慢病毒专用转染试剂LentiFit™仪器产品及图片,以便挑选到性价比高,合适的慢病毒专用转染试剂LentiFit™产品 查看更多>
1、pcDNA3.1+-gD的线性化: pcDNA3.1+使用说明书推荐了以下几个酶作为线性化酶(BglⅡ MfeⅡ Bst1107Ⅰ Eam1105Ⅰ PvuⅠ ScaⅠ SspⅠ),通过DNAMAN分析gD序列发现其带有MfeⅡ酶切位点。2、转染前一天,在60mm的dish中接种8×105个细胞,加入5ml培养基 查看更多>
Purpose and BackgroundsCHO lec 3.2.8.1 cellsCHO Lec 3.2.8.1 cells have four independent mutations in the N- and O- glycosylation pathways (Stanley, 1989). N-li 查看更多>
转染试剂选择与介绍在选择转染方法时,需考虑您希望输送的运载物(DNA、RNA或蛋白质)以及您希望转染的细胞类型。您可通过下表选择Life Technologies™的各类阳离子脂质体转染试剂和Neon®转染系统.我们提供了各种DNA、siRNA、寡核苷酸和RNA输送选择,让您可以对自己的结果更加自信. 卓越的输送效果—可转染多种类型的细胞 无毒性作用—您之所以能看到结果,是因为核酸存在,而不是因为试剂 需要的优化工作更少—针对大多数... 查看更多>
很多实验室的研究生都要自己清洗试验用品并进行高压灭菌,这里有一份高压锅注意事项,希望对大家有用。啊?不能上传附件,那么就拷在这里吧。使用HVE-50高压蒸汽灭菌器时请先阅读此说明WARNING一.不能使用此高压蒸汽灭菌器消毒任何有破坏性材料和含碱金属成份的物质。消毒这些物品将会导致爆炸 查看更多>
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Polyplus-transfection转染试剂特约代理商 查看更多>
纤维样细胞特效转染试剂-GenoFect是由北京吉利奥生物科技发展有限公司代理或销售的GENOBIO品牌的试剂,产品来源于北京。北京吉利奥生物科技发展有限公司是中国最权威的纤维样细胞特效转染试剂-GenoFect试剂销售服务商之一,在北京等地方销售纤维样细胞特效转染试剂-GenoFect试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业纤维样细胞特效转染试剂-GenoFect仪器产品及图片,以便挑选到性价比高,合适的纤维样细胞特效转染试剂-GenoFect产品 查看更多>
细胞转染是指将外源基因如DNA,RNA等导入细胞内的技术。随着分子生物学的发展,转染已经成为研究和控制细胞基因功能、实现基因调控的常规工具。市场上各种转染试剂琳琅满目,各有千秋,然而没有任何一种转染试剂可以能够适用于所有细胞种类、满足所有实验需求和目的,成分控认为转染试剂的成分及作用机理对转染效果及细胞生理作用影响显著,是转染试剂选择的重要依据,选试剂时要留意成分哦。严格来讲,转染的方法可以基于化学法、物理法(电穿孔、显微注射等)以及病... 查看更多>
相关专题 脂质体介导是目前条件下最方便的转染方法之一,适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中,其转染率高,优于磷酸钙法,比它高5~100倍,能把DNA和RNA转染到各种细胞。 用LR进行转染时,首先需优化转染条件,应找出该批LR对转染某一特定细胞适合的用量、作用时间等,对每批LR都要做:第一,先要固定一个DNA的量和DNA/LR混合物与细 ... 查看更多>
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腺相关病毒(AAV)是一种人细小病毒,目前因为能作为一种基因治疗载体而受到广泛关注。构建重组AAV(rAAV)涉及到用一个目的基因替换病毒基因组的大部分,然后将这个重组基因组包装到一个有感染性的病毒颗粒里。目前大多数生成rAAV的实验方案需要共转染一个载体质粒和一个表达病毒复制和结构基因的包装质粒到腺病毒(Ad)感染的培养细胞中。此方法的局限性包括(1) Ad辅助病毒污染rAAV,(2)rAAV的低产出,(3)生成有复制能力的AAV。在此我们描述了新的辅助质粒(pH3和pH5),排除了Ad共转染的需求。辅助质粒表达AAV的rep和cap基因和Ad E2A、VAI和E4基因。当辅助质粒在没有Ad感染的情况下共转染到人293细胞中,rAAV载体产量超过了pAAV/Ad包装质粒的80倍。另外,有复制能力的AAV在rAAV制备过程中少于0.00125%。此系统的主要优点是(1)无需感染性的腺病毒(2)只使用两个质粒就提高了转染效率和载体的产出。我们相信该双质粒转染系统因其简便性和高产出而使AAV载体系统能被更广泛地使用。该系统尤其将对多rAAV载体的临床前分析有用。

用lip3000转染HAC15细胞,目的把质粒转入细胞,现阶段把带EGFP的质粒转进去就难,荧光显微镜下荧光很少,可以数清,按照lip3000说明书转染的(剂量有适当调整),求转染高手指点方法!!


细胞转染可以:(1)真核细胞可以掺入外源DNA而获得新的遗传标志;(2)应用于转基因动植物;(3)应用于生物制药、基因治疗、RNA干扰。脂质体介导法实验原理上图所示是脂质体介导转染的示意图,它显示了外源质粒进入细胞的一般过程。外源基因进入细胞主要有四种方法:电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入;磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞;病毒法是利用包装了外源基因的病毒感染细胞的方法使得其进入细胞。但是由于电击法和磷酸钙法的实验条件控制较严、难度较大;病毒法的前期准备较复杂、而且可能对于细胞有较大影响;所以现在对于很多普通细胞系,一般的瞬时转染方法多采用脂质体法。利用脂质体转染法最重要的就是防止其毒性,因此脂质体与质粒的比例,细胞密度以及转染的时间长短和培养基中血清的含量都是影响转染效率的重要问题,通过实验摸索的合适转染条件对于效率的提高有巨大的作用。上图是本次实验采用的脂质体中阳离子组分的结构的示意图。本次实验采用的脂质体是promega公司的TransFast脂质体试剂,它是一种阳离子脂质体和中性脂质体的混合物,是对于本次实验中采用的293T细胞优化的转染试剂。
BV2细胞用什么方法做转染123
风雨gHY22A2021-07-21
BV2细胞用什么方法做转染
悬浮细胞的转染方法:(以下内容转自生物帮资讯)
DXY721认为:
悬浮细胞和贴壁细胞在转染过程中差别不大,主要差别在于转染后的筛选,当然如果你做的是瞬时转染就不存在筛选的问题了。
其实转染的过程很简单,问题是能不能转的进去的,转染率能有多少,转进去是否可以稳定表达目的蛋白等等。
我们也是用脂质体做悬浮细胞的转染,说明书上都有具体的操作过程,将脂质体和目的基因按比例混合,然后加到细胞悬液里就OK了,说的简单,实际上还是有一些细节要注意的,比如脂质体和目的基因混合的比例,转染的细胞数,细胞的代数,细胞的状态,有的还要求在转染的前一天传代一次,不过不要怕,这些在脂质体说明书上都有明确的说明,按照说明书做就可以了。
jinghuanlv认为:
悬浮细胞和贴壁细胞转染还是有很大不同的。
脂质体转染的原理基于电荷吸引原理,先形成脂质体-DNA复合物,散布在细胞周围,然后通过细胞的内吞作用,将目的基因导入细胞内,而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞高出很多倍,所以,脂质体转染时悬浮细胞的转染效率要明显低于贴壁细胞。
我们实验室转染悬浮细胞是用的电穿孔法,目前为止,悬浮细胞转染的最好方法还是电转,我们实验室用的电转仪是Bio-Rad的,使用条件是电压250V,电容975uF,效果不错,不妨一用。

本人为新手,希望大家能够直到一下细胞转染效率的问题。现在已知的信息如下:

质粒上面包含了萤光虫荧光素酶基因和海参荧光素酶基因,请问我通过什么方法可以测得转染效率?

如果不能测得转染效率,请问怎么优化转染条件呢?

可能有多种原因:目标蛋白对细胞有毒性,导致细胞死亡;转染试剂以及DNA用量信息需要优化,否则对细胞具有伤害;细胞贴壁转染之后没有正常换液。建议: 考虑对目标蛋白进行截短构建、尝试其他细胞系统; 摸索转染试剂以及DNA用量信息,如果转染试剂毒性太大,可以考虑尝试义翘转染试剂sinofection; 对转染后的细胞进行换液处理,如果细胞状态感觉不够理想,可以考虑添加一些血清来帮助细胞恢复健康。以上所有分析、建议的前提是,细胞培养、无菌操作等等都没有问题。祝顺利,加油~
高效率转染RAW 264.7细胞方法 123
生气的小菊花2016-07-19

本人研究生

请教做过DNA 脂质体法转染细胞的高手
DXY721认为:
悬浮细胞和贴壁细胞在转染过程中差别不大,主要差别在于转染后的筛选,当然如果你做的是瞬时转染就不存在筛选的问题了。
其实转染的过程很简单,问题是能不能转的进去的,转染率能有多少,转进去是否可以稳定表达目的蛋白等等。
我们也是用脂质体做悬浮细胞的转染,说明书上都有具体的操作过程,将脂质体和目的基因按比例混合,然后加到细胞悬液里就OK了,说的简单,实际上还是有一些细节要注意的,比如脂质体和目的基因混合的比例,转染的细胞数,细胞的代数,细胞的状态,有的还要求在转染的前一天传代一次,不过不要怕,这些在脂质体说明书上都有明确的说明,按照说明书做就可以了。
jinghuanlv认为:
悬浮细胞和贴壁细胞转染还是有很大不同的。
脂质体转染的原理基于电荷吸引原理,先形成脂质体-DNA复合物,散布在细胞周围,然后通过细胞的内吞作用,将目的基因导入细胞内,而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞高出很多倍,所以,脂质体转染时悬浮细胞的转染效率要明显低于贴壁细胞。
我们实验室转染悬浮细胞是用的电穿孔法,目前为止,悬浮细胞转染的最好方法还是电转,我们实验室用的电转仪是Bio-Rad的,使用条件是电压250V,电容975uF,效果不错,不妨一用。
看了一篇文献说,某某干预对SV40转染的人成纤维细胞有细胞毒性。不明白他想说明什么。#细胞生物学#
质粒转染细胞后多久能提RNA做PCR
实验室一直都是用日常型质粒抽提试剂盒,转染细胞没问题。
我觉得只要是注意以下2点就可以了:
1,注意大肠杆菌(Escherichia coli)本身的污染,收集菌体沉淀时防止菌液散落,经常用75%的乙醇擦拭手套。
2,最后洗脱时最好使用无内毒素的水,我们是用注射用水的。
无论是小提还是大提我们都是用的日常型的,并没有刻意用转染级的,因为转染量大,去内毒素的操作太麻烦,损失太大。
可以考虑在以下角度进行转染实验的优化:
细胞状态与密度;转染试剂的类型、用量;DNA的品质、用量;转染复合物的品质、作用细胞的时间长度。
个人经验,BHK、CHO是很常用的转染用细胞,而且跟抗体非特异性反应也不高。一般来说,大多数可传代细胞的转染效率都是可以的,还要考虑所用转染剂的类型。

不建议你用MDCK细胞,非常难转染。