试述再生细胞类型、分布及特点。 _答案_百度高考
货号: | EGF2100 |
数量: | 大量 |
保存条件: | 4度 |
供应商: | Enogene |
规格: | 0.5ml/1.0ml/1.5ml |
- 产品介绍
EnoGene新推出的EnoGeneFec™转染试剂以最高的转染效率、使用方便、细胞毒性小、生物可降解为设计宗旨,EnoGene的新型配方克服了常见的阳离子或脂质体转染试剂带来的细胞毒性作用,更适合做长效和瞬时转染。使用这种新的转染试剂操作方便,可用于转染质粒、线性双链DNA、反义寡核苷酸及RNAi等,在实际使用中获得了非常理想的效果。
EnoGeneFec™2100是针对悬浮细胞设计的转染试剂,可用于体外转染质粒、线性双链DNA、反义寡核苷酸及RNAi等。对常用的悬浮细胞转染效率可达70%以上。
EnoGeneFec™2100可以形成微小的(平均大小约100-400nm)单层脂质体,靠静电作用结合到DNA的磷酸骨架上以及带负电的细胞膜表面,并与寡核苷酸等能形成稳定的较小的纳米胶体颗粒,通过细胞"内吞作用"进入细胞,能吸收溶酶体的H+,在复合体中形成酸性环境使核酸酶失活,保护DNA免受核酸酶的降解。进入细胞后,复合体囊泡肿胀破裂,将DNA释放到细胞质中,实现基因转染。。
EnoGeneFec™2100与其他转染试剂相比无论在转染效果和实验操作上都有明显的优势,主要表现为:
●转染效率很高,对大多数悬浮细胞使用效果综合评价明显高于其它常用转染试剂
●细胞毒性低,需要转染较大剂量的DNA时,毒性明显低于其它常用转染试剂
●操作简单,以最短的时间完成转染,转染试剂-DNA复合物的形成时间只需20min
组分 | EnoGeneFec™2100TransfectionReagent |
EGF2100-500 | 0.5ml |
EGF2100-1000 | 1ml |
EGF2100-1500 | 1.5ml |
- 试剂盒组分
- 操作步骤(以6孔板为例)
培养板 | 表面积 (cm2/孔or皿) | 可容纳培养基体积 (ml/孔or皿) | DNA(或其他核苷酸类成分)用量(µg) | EnoGeneFec™2100 用量 |
96孔 | 0.3 | 0.1-0.2 | 0.2μg溶于20μl培养基 | 0.4-1.0μl溶于20μl培养基 |
24孔 | 2 | 0.5 | (0.2-)1μg溶于25μl培养基 | 2-5μl溶于25μl培养基 |
12孔 | 4 | 1.0 | (0.5-)2.0μg溶于100μl培养基 | 4-10μl溶于100μl培养基 |
6孔 | 10 | 2.0 | (1.0-)5.0μg溶于100μl培养基 | 10-25μl溶于100μl培养基 |
35mm | 10 | 2.0 | (1.0-)5.0μg溶于100μl培养基 | 10-25μl溶于100μl培养基 |
60mm | 20 | 5ml | (3.0-)10.0μg溶于500μl培养基 | 20-50μl溶于500μl培养基 |
10-cm | 60 | 10ml | (8.0-)20.0μg溶于1.5ml培养基 | 40-100μl溶于800μl培养基 |
2.转染复合物的制备:
溶液A:将5µg质粒DNA(或其他核苷酸类成分)加入到100μl无血清、无抗生素的培养基,在1.5ml无菌EP管中混匀后,室温放置5分钟。
溶液B:EnoGeneFec™2100在使用前请震荡混匀。将10-20µlEnoGeneFec™2100加入到100μl无血清、无抗生素的培养基中,在1.5ml无菌EP管中混匀,室温放置5分钟。
将溶液A加入到溶液B中,轻轻混匀,室温放置20分钟,获得约200μl转染复合物(注:该转染复合物在室温下5小时内是稳定的)。
3.将上述的200μl转染复合物滴加到第一步接种了0.8ml无血清、无抗生素的培养基(含3-5×105个细胞)的培养孔中,轻轻混匀。
4.于5-8小时后,培养孔中加入0.1ml血清(可含抗生素),37℃孵育转染细胞18-24小时
5.收集细胞用于分析。如要建立稳定转染,于转染24小时后将细胞按1:10传代至新鲜培养基中(根据细胞培养条件,可含血清及抗生素),传代次日可以换用选择培养基。
- 注意事项
使用高纯度的质粒DNA也是转染试验中的关键因素。为了保证试验的结果,建议对提取的质粒DNA的量和纯度进行检测。DNA含量(μg/mL)=50×(260nm的读数)×稀释倍数,另外通过检测质粒DNA在260nm和280nm的OD值的比值(OD260/OD280)估计核酸的纯度,OD260/OD280=1.8说明DNA样本纯度较高。
2.转染细胞的要求
细胞的传代次数是影响转染效果的重要因素,推荐使用在50代以内的细胞进行转染试验。要求在转染前24小时对细胞再次传代。
3.血清的影响。
在EnoGeneFec™2100和DNA形成转染复合物的过程中不能添加血清。
- EnoGeneFec2100的用量
五、储存
EnoGeneFec™2100以1μg/μl浓度液体形式提供,保存在4℃。常温运输。
保存期:一年
温馨提示:不可用于临床治疗。
免责声明 本文仅代表作者个人观点,与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实,对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺,请读者仅作参考,并请自行核实相关内容。
版权声明 未经蚂蚁淘授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的,应该授权范围内使用,并注明“来源:蚂蚁淘”。违反上述声明者,本网将追究其相关法律责任。
发布于 : 2018-07-16
阅读(114)
▍
相关分类
▍
相关文章
交通流分配3_图文_
list16 世界买家名单16_
polygon函数用法_zhouqian88423的专栏_polygon …
东营二手别克君威 2015款 1.6T 自动 领先技术型 (国Ⅴ) 第一车网
互联网+_艾瑞网 iResearch
Zyagen Laboratories 中国代理 现货_中国实验室采购网
每天一位女科学家超话—新浪微博超话社区
สมาคมนักวางแผนการเงินไทย Thai ...
洁净室人员行为规范洁净室的清洁及消毒下载_PPT模板 爱问共享...
—高质量DNA获取方法之月桂酸钠法 徐大彬
多聚HRP标记二抗—高性价比ImmunoReagents(IMR)品牌二 ...
Evidence for two interaction regions for phosphatidylinositol...