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有做过T细胞分选的吗？T细胞表面标志CD3，CD4，CD8大家都是用什么抗体标记的呢？

请问各位战友，用CFDA标记活细胞的具体方法是怎样的呢？一般在实验前多长时间标记呢？谢谢了……

准备做干细胞标记体内示踪,，看细胞具体在什么位置，有腺病毒GFP可以标记，想做个双标，不知道可以用GFP和Brdu不？如果可以，那么我做免疫荧光可以看到同一个细胞两种光都有吗？

（1）人和鼠细胞膜表面的抗原属于构成膜结构的起受体作用的蛋白质，为使人、鼠细胞膜融合在一起，必须除去细胞膜表面起识别作用的糖蛋白．（2）融合细胞表面的两类荧光染料分布的动态变化，可以证实关于细胞膜结构“模型”的膜质分子能运动观点

临床免疫学检验什么是细胞表面标志?作用是什么?

急求！请教各位站友，我准备标记成纤维细胞，移植体内后2月再切片观察，请问可以用什么标记？同时还要测移植后存活的细胞数量，万分感谢！

本人新开展实验，想把荧光标记到细胞上，观察损伤后细胞到损伤部位的转移情况，但目前刚接触实验不明白。
有几个疑问
1：荧光标记到细胞是标记到细胞表面还是细胞质内？
2：荧光应该随着细胞的分化和增殖逐渐消失？是不是分化增殖越快，荧光消失速度越快？
3：有哪些容易操作，成本便宜的荧光物质？
谢谢各位战友

目前标记干细胞的MRI 对比剂主要有两类： 一类是以Gd3+对比剂即所谓顺磁性对比剂，主要产生T1 正性对比效应，目前有关的应用报道不多，主要是因为在目前MRI 场强下Gd3+的量需要达到相当程度，这在技术上尚有难度。
　　当然也有几项研究成功地应用Gd3+复合物通过胞饮作用或细胞内吞作用进入细胞内而后行MRI 的报道。Modo 等应用右旋糖酐聚合物连接的Gd-DTPA 与若丹明颗粒(gadolinium rhodamine dextran,GRID )可同时提供MRI 和荧光组织显像，将之标记永生化小鼠神经干细胞MHP36 细胞后移植至脑缺血大鼠的海马后进行4.7 T MR 离体成像， 证实MRI 能可靠分辨移植细胞以及示踪细胞迁移。
　　另一类是通过葡聚糖生物高分子包裹Fe3O4 晶体形成核壳式结构的超顺磁性氧化铁(superpara-magnetic iron oxide，SPIO) 纳米材料对比剂， 主要产生较强的T2 负性对比效应。其特点是粒径小、穿透力强且弛豫率约为同样 564 国际医学放射学杂志International Journal of Medical Radiology 2009 Nov; 32(6) 条件下Gd3+的7～10 倍，在很低浓度(nmol)时即可在 MRI 上形成对比且具有生物可降解性，能被细胞代谢后进入正常血浆铁池与红细胞血红蛋白结合或用于其他代谢过程。
　　以上特点使氧化铁类对比剂更受关注，是目前较理想的磁共振示踪剂。近年来，间充质干细胞(mesenchymal stem cells， MSCs)磁标记后MRI 示踪已成功应用于中枢神经系统和心脏等器官。Jendelova 等[21]将SPIO 和BrdU 双重标记的MSCs 经对侧脑半球局部移植入大鼠脑皮质损伤模型， 术后28 d 常规1.5 T MRI 显示MSCs 从注射点向对侧脑损伤区域迁移，脑损伤区域内见特异性低信号分布持续至术后50 d。
　　切片BrdU 免疫组化分析显示移植的MSCs 分化为神经元细胞，术后大鼠的神经功能改善，因此认为损伤组织可产生丰富的化学因子促使移植的MSCs 进行靶向迁移性修复。Kraitchman 等[22]利用Feridex 标记MSCs 经导管注入犬心肌梗死模型周边区域， 术后持续8 周，1.5 T MRI 明确观察到移植部位发出一条低信号线指向心肌梗死区域，心肌梗死面积逐渐减小。活体MRI 示踪磁标记MSCs 在骨关节领域也显示出重要的应用前景。
　　Mayer-Kuckuk 等应用与荧光基团结合的氧化铁粒子标记7F2 细胞和MC3T3-E1#4 细胞， 从股骨干骨骺端注射30 μL 含1×105 个磁标记细胞的磷酸盐缓冲液(PBS)至小鼠股骨髓腔，7 T MR 活体成像显示骨髓腔内见特异性低信号持续至术后第9 天，此后髓腔内信号增高，提示移植MSCs 在股骨髓腔内部分丢失。
　　居等应用磁性氧化铁纳米粒子和多聚赖氨酸(Poly-L-Lysine, PLL) 的偶联物 Fe2O3-PLL , 有效地标记了人脐血间充质干细胞,成功地进行了磁共振标记细胞成像， 且对细胞的活力、凋亡等生物学特性无明显影响。
　　国内一些研究者进行的实验室结合前期间充质干细胞的磁标记工作，正在进行肝干细胞、神经干细胞的磁探针标记， 评价其对细胞活力增殖与凋亡代谢分化的影响，评价MRI 不同序列上不同浓度标记细胞的信号特点，并将标记后的肝干细胞进行正常及肝衰大鼠体内移植，神经干细胞标记后进行正常及大脑半球缺血大鼠体内移植，用MRI 动态示踪移植细胞分析移植细胞的生存状态，总结MRI 示踪干细胞的理论依据、技术方法及影像学表现特征，达到活体下追踪干细胞存活迁移的目的[24-27]。虽然MRI 示踪干细胞已经显示出了良好的应用前景，但磁标记会随着细胞分裂而稀释，在监测移植后干细胞的分化方面尚存在不足[28]，有待进一步改进。
　　综上所述，有关干细胞标记和活体示踪方面的研究虽然取得了重要进展，但尚有许多问题需要解决，目前应用的各种标记示踪方法都有自己的优缺点， 但是随着科技的发展以及相关实验的不断深入，各种标记示踪方法目前存在的问题必定能够得到解决，其中尤其以MRI 活体示踪磁标记干细胞技术值得期待。利用无创伤性影像学技术活体示踪干细胞的研究将会取得重大突破。

CD11B: 单核细胞，巨噬细胞，中性粒细胞，NK细胞等
CD11C：树突细胞，单核细胞，巨噬细胞，中性粒细胞

请问用BrdU标记干细胞，进行体内实验时，会不会由于细胞破坏染料逸出而被其它细胞所吞噬，出现其它细胞被标记的现象，让我们误认为干细胞分化了。GFP应该不存在这个问题，GFP是否可以随细胞增殖而传给下一代细胞呢？
请指教，谢谢！！

（1）死/活细胞染色法 ： 使用选择性死/活细胞染色的特殊染料如不易穿透活细胞膜的台盼兰、苯胺黑及用于活细胞着色的中性红、健那绿、亚甲蓝、甲苯胺蓝等，通过染色区分死活细胞并计数来间接判断细胞膜通透性的改变情况。该方法简单，方便，价廉；但灵敏度和精确性差。
（2）荧光标记法 ： 使用二乙酸荧光素（FDP）、碘化丙啶（PI）或异硫氰酸荧光素钠标记的荧光染料与细胞共孵育，用流式细胞仪检测荧光染色阳性细胞的比率。此法其实是（1）法的“荧光”版，但其在灵敏性和准确性方面明显要优于后者。
（3）硝酸镧(La)示踪法： 在正常的生物组织中镧微粒可沉积于细胞间隙，但不能穿过具有1~ 2nm 微小间隙的细胞膜性结构(包括细胞膜和细胞器膜)，也不能穿过细胞间的紧密连接。在膜性结构通透性增高时， 镧微粒则可进入细胞、细胞器和紧密连接内， 并在电镜下显示， 镧盐标记技术被认为是一种有效的监测细胞膜通透性变化的标记技术。
（4）LDH释放法： 在正常情况下，细胞内大分子物质LDH 是不能通过细胞膜的， 但在细胞膜受损伤而通透性增加时，可通过受损的细胞膜释放出来。LDH 能较好地反映细胞膜损伤程度。类似的还有检测细胞外K+的漏出率等。

图片来源：EYEOFSCIENCE如果想要向世人展示自己与众不同，你可能会买一辆丰田普锐斯或纹一个贾斯汀·比伯的纹身。但实际上，细胞是更好的方式，因为它能通过多种方式展现你的与众不同。近日，研究者发现了一个全新的机理，可以据此标记人体内的各种细胞，并确保这些细胞间不会相互转化。
科学家早在数十年前就已经发现了基础基因密码的存在，即细胞通过转化一串DNA碱基使之成为一个蛋白质的氨基酸。但10多年来，科学家一直在尝试**组蛋白密码——这是一组更加复杂的密码，内嵌在有机体的基因组中。组蛋白是一种DNA环绕在染色体上的蛋白质，通过化学手段调整组蛋白可以调节基因的活动。例如，细胞可以通过将3组甲基原子团附着在一种名为H3的组蛋白的特定位置上，从而关闭基因功能。
但是，若将3组甲基原子团附着在H3的其他位置上，则会产生完全不同的效果，科学家将这种转化称为H3K4me3。细胞通常只会将H3K4me3标记附着在基因组中很短的一段上，但研究者注意到，H3K4me3有时会极大地延展开，进而影响到更多的组蛋白。
为了弄清这些携带H3K4me3标记的组蛋白是否蕴涵某些组蛋白密码，美国斯坦福大学分子遗传学家AnneBrunet和同事追踪研究了20多种细胞类型。他们发现，在不同细胞中，延展后的H3K4me3标记会指向不同位置。研究者可以只依据H3K4me3标记在染色体上的位置辨别细胞的类别，例如肌肉细胞或者肾脏细胞。此外，他们还注意到，H3K4me3标记所指向的通常是对细胞的功能或特性十分关键的基因。
研究者进一步表示，H3K4me3标记之所以能够将各种细胞区别开，实际上是通过一种名为RNA干扰（RNAi）的手段干扰神经前体细胞的运转，而后者可以转化成任意形式的脑细胞。研究者发现RNAi会损害细胞复制和产生神经元的能力，但如果不给基因注入H3K4me3标记或只注入很短片段的H3K4me3标记，则神经前体细胞仍可以正常分解。换句话说，延展后的H3K4me3标记能够长期保持细胞特性。研究者将这一结果在线发表于近日的《细胞》杂志。Brunet指出，找到H3K4me3标记很容易，因此可以很快将之应用于实践，例如癌症诊断。（来源：中国科学报段歆涔）

图片来源：EYEOFSCIENCE如果想要向世人展示自己与众不同，你可能会买一辆丰田普锐斯或纹一个贾斯汀·比伯的纹身。但实际上，细胞是更好的方式，因为它能通过多种方式展现你的与众不同。近日，研究者发现了一个全新的机理，可以据此标记人体内的各种细胞，并确保这些细胞间不会相互转化。
科学家早在数十年前就已经发现了基础基因密码的存在，即细胞通过转化一串DNA碱基使之成为一个蛋白质的氨基酸。但10多年来，科学家一直在尝试**组蛋白密码——这是一组更加复杂的密码，内嵌在有机体的基因组中。组蛋白是一种DNA环绕在染色体上的蛋白质，通过化学手段调整组蛋白可以调节基因的活动。例如，细胞可以通过将3组甲基原子团附着在一种名为H3的组蛋白的特定位置上，从而关闭基因功能。
但是，若将3组甲基原子团附着在H3的其他位置上，则会产生完全不同的效果，科学家将这种转化称为H3K4me3。细胞通常只会将H3K4me3标记附着在基因组中很短的一段上，但研究者注意到，H3K4me3有时会极大地延展开，进而影响到更多的组蛋白。
为了弄清这些携带H3K4me3标记的组蛋白是否蕴涵某些组蛋白密码，美国斯坦福大学分子遗传学家AnneBrunet和同事追踪研究了20多种细胞类型。他们发现，在不同细胞中，延展后的H3K4me3标记会指向不同位置。研究者可以只依据H3K4me3标记在染色体上的位置辨别细胞的类别，例如肌肉细胞或者肾脏细胞。此外，他们还注意到，H3K4me3标记所指向的通常是对细胞的功能或特性十分关键的基因。
研究者进一步表示，H3K4me3标记之所以能够将各种细胞区别开，实际上是通过一种名为RNA干扰（RNAi）的手段干扰神经前体细胞的运转，而后者可以转化成任意形式的脑细胞。研究者发现RNAi会损害细胞复制和产生神经元的能力，但如果不给基因注入H3K4me3标记或只注入很短片段的H3K4me3标记，则神经前体细胞仍可以正常分解。换句话说，延展后的H3K4me3标记能够长期保持细胞特性。研究者将这一结果在线发表于近日的《细胞》杂志。Brunet指出，找到H3K4me3标记很容易，因此可以很快将之应用于实践，例如癌症诊断。（来源：中国科学报段歆涔）