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| 선택 | Cat.No. | 제품명 | 가격(VAT별도) | 수량 |
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제품특징
□ 농도 10~50 U/㎕
□ 형상
| 20 mM | Tris-HCl (pH7.5) |
| 50 mM | NaCl |
| 5 mM | 2-Mercaptoethanol |
| 0.1 mM | EDTA |
| 50% | Glycerol |
□ 보존 -20℃
□ 첨부 Buffer 조성(10×)
| 500 mM | Tris-HCl (pH7.5) |
| 100 mM | MgCl2 |
| 100 mM | DTT |
| 10 mM | ATP |
| 0.1% | BSA [별첨]* |
* BSA가 침전할 우려가 있으므로 동결·융해는 가능한 한 피해 주십시오.
□ 기원
Escherichia coli B infected with T4 am N82
□ 제품설명
본 효소는 ATP를 AMP와 PPi로 분해하여 그 에너지로 5’-P말단의 oligonucleotide와 3’-OH 말단의 oligonuceotide를 결합시키는 효소이다.최소기질은 NpNpNOH(3’-OH oligomer, 수용체), pNp(5’, 3’DP monomer 공여체)이다. 라이게이션 효율은 수용체, 공여체 각각의 염기에 영향을 받으며, 일반적으로 수용체에는 purine을, 공여체는 pyrimidine을 포함하는 것이 효율이 좋다. DNA는 RNA보다 상당히 효율이 떨어지고, 구조적으로 3’말단에 가까운 P 말단을 갖는 RNA도 효율이 좋지 않으며, 3’- uridine oligomer 또한 수용체로써 부적당하다. 3’수용체의 경우는 BAP처리에 의하여 효율을 높일 수 있다.5’, 3’DP monomer 공여체로써는 C > U > A > G의 순으로 높은 효율을 가지고 있다.
□ 활성의 정의
Oligo(A)n을 기질로 하여 5℃, 10분동안 1 pmol의 [5’-32P]pCp를 산불용성 침전물로 사용하는 것을 효소활성 1 U로 한다(RNA 3’말단 표식반응).
□ 활성측정용 반응액 조성
| 50 mM | HEPES-NaOH Buffer (pH7.5) |
| 20 mM | MgCl2 |
| 3.3 mM | DTT |
| 6 μM | ATP |
| 0.001% | BSA |
| 10% | DMSO |
| 1.2 μM | 3’- OH RNA |
| 2.4 μM | [5’-32P]pCp |
□ 순도
- 100 U의 본 효소와 1 ㎍의 λDNA-Hind III 분해물을 37℃, 24시간 반응해도 DNA의 전기영동 패턴에 변화가 없다.- 100 U의 본 효소와 1 ㎍의 16S와 23S rRNA를 37℃, 24시간 반응하여도 RNA의 전기영동 패턴에 변화가 없다.- 20 U의 본 효소와 6 ㎍의 λDNA-Hind III 분해물 또는 6 ㎍의 λDNA-Pst I 분해물을 37℃, 24시간 반응하여도 각 DNA는 T4 DNA
ligase에 의해 90%이상 연결되고, 그중 100%가 각각 Hind III 또는 Pst I에 의해 재절단된다.
□ 사용상의 주의
- 4℃ 이하 보존에서 약 1년간 안정하다.- 분자간 라이게이션의 최적반응 온도는 5~15℃로, 그 이상 높아지면 억제된다.- PEG 공존하에서 반응은 촉진되나, 반응특이성에는 변화가 없다.- 연결반응의 효율을 높이기 위해서는 효소농도는 높고 ATP 농도는 기질농도를 고려하여 가능한 낮게 하는 것이 좋다.- 10× 첨부 버퍼에 0.1% BSA를 직접 첨가하면 다량의 백색침전이 생기므로 반응액을 조제할 때는 다음의 순서로 시약을 첨가한다. dH2O → 10× 첨부 버퍼 → 0.1% BSA → 기질 RNA 또는 DNA
□ 용도
- 단일가닥 RNA와 단일가닥 DNA의 3’-OH 말단의 표식- 단일가닥 oligo RNA, 단일가닥 DNA의 합성- 완전한 길이의 cDNA 합성
□ 참고
Yeast tRNAphe를 기질로 하였을 때, 상기 반응액 중에 50 U의 본 효소를 5℃, 16시간 처리하면 80% 이상 tRNAphe의 3’말단이 표식된다.
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碳酸氢钠溶液是一种co2缓冲液,当瓶内二氧化碳量减少时,碳酸氢钠溶液释放co2,反之吸收co2.因此它能保持瓶内二氧化碳量大致不变.
求采纳为满意回答。
1、 缓冲溶液对反应物的测定没有干扰
2、缓冲组分的浓度为1:1
3、有足够的缓冲容量
4、缓冲溶液的PH应在所需范围内
5、组成缓冲溶液的弱碱PKB和弱酸PKA应接近或等于所需的POH值或PH值(PH+POH=14)
配制
只要知道缓冲对的PH值,和要配制的缓冲液的pH值(及要求的缓冲液总浓度),就能按公式计算[盐]和[酸]的量。这个算法涉及对数换算,较麻烦,前人为减少后人的计算麻烦,已为我们总结出pH值与缓冲液对离子用量的关系并列出了表格。只要我们知道要配制的缓冲液的pH,经查表便可计算出所用缓冲剂的比例和用量。例如配制500nmpH5.8浓度为0.1M磷酸缓冲液。
经查表知pH5.8浓度为0.2M Na2HPO48.0毫升,而0.2M Na2HPO492.0毫升。依此可推论出配制100ml0.1M的磷酸缓冲液需要0.1M Na2HPO48.0毫升,而0.1M Na2HPO4需要92.0毫升。
计算好后,按计算结果准确称好固态化学成分,放于烧杯中,加少量蒸馏水溶解,转移入50ml容量瓶,加蒸馏水至刻度,摇匀,就能得到所需的缓冲液。
各种缓冲溶液的配制,均按表格按比例混合,某些试剂,必须标定配成准确浓度才能进行,如醋酸、氢氧化钠等。另外,所有缓冲溶剂的配制计量都能从以上的算式准确获得。

