纯化蛋白后去咪唑透析液如何配制？
2017-08-22
问题描述：
各位大神，本人小白一枚，最近做镍柱纯化His标签蛋白，做到透析一步，不知道透析液该怎么配，在此请教大家！
我纯化蛋白时用的缓冲液是50mMNaH2PO4，300mMNaCl，pH8.0，洗脱缓冲液在这基础上加咪唑；
现在纯化后想透析掉咪唑，透析液是直接用结合缓冲液，还是PBS缓冲液，或是Tris-Hcl缓冲液？我考虑用结合缓冲液和PBS缓冲液是因为离子成分相近（都有NaH2PO4和NaCl），盐离子环境的变化不大，但是结合缓冲液的盐离子浓度是不是高了？PBS缓冲液pH一般是7.4，pH从8.0到7.4的变化会影响蛋白质稳定性吗？我看也有好些人用Tris-Hcl缓冲液，我也不知道该怎么选择了，各位大神能否给些建议？谢谢啦！
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合肥周三
用户
用什么缓冲液，取决于你的蛋白用途。一般用1xPBS即可。
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奉天靖难
用户这个透析的方法应该不太好用，咪唑分子量68.0773，蛋白质分子量128-150左右，透析需要选择合适分子量的透析袋，否则多次换液亦不能去除咪唑。建议利用咪唑与蛋白之间的分子量相差近一倍的关系，可以使用分子筛，可以完全去除咪唑残留。
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