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SYSY/DMNP-EDTA - 510 016/5 mg/510 016
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SYSY/DMNP-EDTA - 510 016/5 mg/510 016
品牌 / 
SYSY
货号 / 
510016
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Cat. No.: 510 016
Amount: 5 mg
Price:355.00€
Cat.No.510016

5 mg DMNP-EDTA dihydrate as powder.HPLC analysisStore at -20°C. Protect material from light always.

Name

1-(4,5-dimethoxy-2-nitrophenyl)-1,2-diaminoethane-N,N,N",N"-tetraacetic acid.

Molecularformula

C18H23N3O12 + H2O. chemical structure

Molecularweight

509.42

DocumentsMSDS
Remarks

When reconstituted with H2O, the hardly soluble free acid is obtained. Choose the appropriate base for neutralization to obtain the salt suitable for your application

Data sheet510_016.pdf

References for DMNP-EDTA - 510016

Differentially poised vesicles underlie fast and slow components of release at single synapses.BlanchardK, ZorrilladeSanMartínJ, MartyA, LlanoI, TrigoFFThe Journal of general physiology (2020) 1525: . 510016 ; tested species: rat
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大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液,少数与脂类结合的蛋白质则溶于乙醇、丙酮、丁醇等有机溶剂中,因些,可采用不同溶剂提取分离和纯化蛋白质及酶。(一)水溶液提取法稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂,通常用量是原材料体积的1-5倍 查看更多>
菌种保存方法微生物具有容易变异的特性,因此,在保藏过程中,必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态,才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。   低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素,所以,菌种保藏方法虽多,但都是根据这三个因素而设计的。 查看更多>
HP-RPC的选择首先要看蛋白质的分子量,20kDa左右的一般用C4或C8,再小一点的可以用C18,太大的蛋白并不适于反相分离。C18通用性最好,但是有时候保留过强可能会导致收率较低。如果目的蛋白不是很针对,可以考虑通用性最强的C18柱。一般来说,4.6mm的内径比较常见,250mm长的柱子比150mm的柱子分离度要 查看更多>
Joseph SambrookPeter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne, AustraliaDavid W. RussellUniversity of Texas Southwestern Medical Center, Dall 查看更多>
抗体作为生物学上的一个有用工具已经超过一个世纪。 1 9 世 纪 7 0 年 代 , Emil vonBehring 和 Shibasaburo Kitasato⑴最先阐述了免疫球蛋白,从那时起,抗体在研究和商业应用方面的使用取得了前所未有的进展。抗体最初是作为治疗病毒性疾病的天然抗血清来使用的。现今,高度工程化的治疗性抗体已被用于治疗多种危及生命的疾病。这一章将介绍纯化抗体的几种方法,尤其是单克隆抗体的纯化,纯化后的单克隆抗体具有多种用途。本章还将介绍抗体纯化前后的鉴定学方法。本章中,我们实验室产生的数 查看更多>
在生化制备中,沉淀主要用于浓缩目的,或用于除去留在液相或沉淀在固相中的非必要成分。在生化制备中常用的有以下几种沉淀方法和沉淀剂:  1.盐析法 多用于各种蛋白质和酶的分离纯化。  2.有机溶剂沉淀法 多用于生物小分子、多糖及核酸产品的分离纯化,有时也用于蛋白质沉淀。  3. 查看更多>
一般认为,在几乎所有的后生动物(metazoans), 尤其是脊椎动物中,都普遍存在选择性剪接,这就为从单基因产生多种功能性多肤提供了一'条经济的途径。根据 EST(expressedsequencedtag,表达序列标签)序列定位和对合成的mRNA (resultant mRNA) 家族进行图谱分析的结果,估计约有 35% 的人类基因能产生多种不同的剪接产物。 查看更多>
蛋白质和多肽是由 20 种氨基酸按照一定的顺序通过肽键连接成一长链。再通过链内、链间的离子键、疏水作用等多种作用力进行折叠卷曲形成一定构象而产生其特异性的活性作用。蛋白质的一级结构即氨基酸的排列顺序,决定了蛋白质的高级结构及功能。因此。测定蛋白质的一级结构是进行蛋白质结构与功能研究中不可缺少的部分。随着研究方法和手段的更新,蛋白质一级结构的分析向提高灵敏度、缩短周期的方向发展。 查看更多>
浅述蛋白质分离纯化的新技术 摘 要: 本文主要介绍了浊点萃取法、置换色谱法、亲和层析法、亲和色谱法、凝胶电泳、双水相萃取等蛋白质的最新分离纯化技术,综和近年来国内外的一些研究结果,结合实际应用的例子,分析了各种分离纯化方法的优点,同时指出其不足之处。文章最后展望了蛋白质分 查看更多>
2021-08-31
疏水作用层析(hydrophobic interaction chromatography, H I C )是蛋白质纯化技术中一个非常有价值的工具。 H I C 用于蛋白质纯化的规模很广泛—分析及制备规模均可。H I C 可用于去除溶液中存在的多种杂质,包括不需要的产品相关杂质。尤其 是 ,H i c 于去除产品巾的聚 合 讽 ,目 其 与 轉 财 特 性 不 H 般 可以有效去除。本章中,我 们 将 介 绍 H IC 基 顧 论 及 如 何 从 水 紐 巾 纯 化 蛋 白 质 。在理论背景前 提 下 , 查看更多>
抗体作为生物学上的一个有用工具已经超过一个世纪。 1 9 世 纪 7 0 年 代 , Emil vonBehring 和 Shibasaburo Kitasato⑴最先阐述了免疫球蛋白,从那时起,抗体在研究和商业应用方面的使用取得了前所未有的进展。抗体最初是作为治疗病毒性疾病的天然抗血清来使用的。现今,高度工程化的治疗性抗体已被用于治疗多种危及生命的疾病。这一章将介绍纯化抗体的几种方法,尤其是单克隆抗体的纯化,纯化后的单克隆抗体具有多种用途。本章还将介绍抗体纯化前后的鉴定学方法。本章中,我们实验室产生的数 查看更多>
2018-12-26
Purification of PCR Products in Preparation for CloningJoseph SambrookPeter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne, AustraliaDavid W. Russe 查看更多>
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师哥师姐们好,请问有谁用过chemicon公司的CpGenomemodificationkit试剂盒的货号(S7820),这个试剂盒是甲基化和纯化一步完成的吗?我现在实验需要用到DNA甲基化试剂盒,但是我现在不知道它的的具体用法,知道的师哥师姐们可以给我说一下的它的用法吗?谢谢!
我的二抗加显影液在机器里曝光10s的结果,这是不是说明右边这个效价不高了啊

IgM代表的是近期感染病毒或者病原体的一个指标,表明在两周左右的时间内感染了病原体,所以检测IgM可以准确判断是否是新发感染病原体。2、开发何种形式的诊断用试剂盒,你说的方法都是ELISA方法,该方法中包括了检测抗体或者检测抗原等技术方法。具体如何来决定,还看你想从哪方面是想检测抗原还是想检测抗体,还有就是技术路线是否可行,包括单抗制备,抗原表达及纯化等等,可能也应该考虑成本等因素,只有综合考虑上述因素,才能确定用那种方法来研制诊断用试剂盒。
补充一点的是有些病毒在人群中的感染是很普遍的,比如HCMV.对于这些病毒IgM的检测结果可以推测是否为近期感染.但这一类病毒其检测的临床意义经常是当其再激活感染时.比如:HCMV感染后就在末梢单个核细胞中潜伏起来,对于正常人而言是不致病的,但当出现HIV感染或应用免疫抑制剂时会出现激活感染而且经常导致严重疾患.对于这种再激活感染虽然也有IgM的升高,但是却在现在ELISA技术的检测限以下,因此是检测不到的,这时就必须进行针对其抗原的检测。
顺手采纳答案

一抗的英语是 resistance No.1,二抗resistance No.2.

想通过亲和层析来纯化抗血小板特异性抗体(抗GPIIb/IIIa抗体和抗GPIbα抗体),能否做到呢?谢谢!

Agrisera代理(抗体、试剂)这个品牌谁了解?质量如何?国内有没有官方代理呢?agrisera代理(抗体、试剂)这个品牌谁了解?质量如何?国内有没有官方代理呢?
elisa抗原包被和抗体包被的区别
(一)包被用抗原

用于包被固相载体的抗原按其来源不同可分为天然抗原、重组抗原和合成多肽抗原三大类。天然抗原可取自动物组织、微生物培养物等,须经提取纯化才能作包被用。如HBsAg可以从携带者的血清中提取,一般的细菌和病毒抗原可以从其培养物中提取,蛋白成份抗原可从富含此抗原的材料中提取等(例如AFP从脐带血或胎肝中提取)。重组抗原是抗原基因在质粒体中表达的蛋白质抗原,多以大肠杆菌或酵母菌为质粒体。重组抗原的优点是除工程菌成份外,其他杂质少,而且无传染性,但纯化技术难度较大。以大肠杆菌为质粒体的重组抗原如不能充分除大肠杆菌成份,用于ELISA试剂盒,在反应中可出现假阳性,因不少受检者受大肠杆菌感染而在血清中存在抗大肠杆菌抗体。重组抗原的另一特点是能用基因工程制备某些无法从天然材料中分离的抗原物质。例如丙型肝炎病毒(HCV)尚不能培养成功,而且丙肝病人血清中HCV抗原含量极微。目前检测抗HCVELISA中所用包被抗原大多为根据HCV的基因克隆表达而制备的重组抗原。在传染病诊断中,不少重组抗原如HBsAg、HBeAg和HIV抗原等均在ELISA中取得应用。合成多肽抗原是根据蛋白质抗原分子的某一抗原决定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。多肽抗原一般只含有一个抗原决定簇,纯度高,特异性也高,但由于分子量太小,往往难于直接吸附于固相上。多肽抗原的包被一般需先使其与无关蛋白质如牛血清白蛋白质(BSA)等偶联,借助于偶联物与固相载体的吸附,间接地结合到固相载体表面。应用多肽抗原的另一注意点为他仅能检测与其相应的抗体。一种蛋白质抗原往往含有多个不同的能引起抗体产生的决定簇,因此在受检血清中的其他抗体就不能与该多肽抗原发生反应。另外,某些微生物发生变异时往往发生抗原结构变化,在这种情况下,用个别多肽抗原进行包被可引起其他抗体的漏检。
(二)ELISA试剂盒包被用抗体
包被固相载体的抗体应具有高亲和力和高特异性,可取材于抗血清或含单克隆抗体的腹水或培养液。如免疫用抗原中含有杂质(即便是极微量的),在抗血清中将出现杂抗体,必须除去(可用吸收法)后才能用于ELISA,以保证试验的特异性。抗血清不能直接用于包被,应先提取IgG,通常采用硫酸铵盐析和Sephadex凝胶过滤法。一般经硫酸铵盐析粗提的IgG已可用于包被,高度纯化的IgG性质不稳定。如需用高亲和力的抗体包被以提高试验的敏感性,则可采用亲和层析法以除去抗血清中含量较多的非特异性IgG。腹水中单抗的浓度较高,特异性亦较强,因此不需要作吸收和亲和层析处理,一般可将腹水作适当稀释后直接包被,必要时也可用纯化的IgG。应用单抗包被时应注意,一种单抗仅针对一种抗原决定簇,在某些情况下,用多种单抗混合包被,可取得更好的效果。展开
请问大家,我的体外转录的RNA想纯化后用于细胞转染。如果该RNA不用试剂盒纯化,只用trzol等纯化行吗?效率高吗?你的具体方法步骤是什麽?望有经验的朋友指导。谢谢:)
医院测抗体一般是用ELISA方法.灵敏度很高的. 在其他地方,还有血凝抑制试验,琼脂扩散试验,抗体蛋白纯化定量,抗体活性检测等. 根据要求不同,选择不同的方法,现在医院最常用.使用方便的就是ELISA试剂盒. 原理是:在反应板上包上抗原,然后加入检测样品液(血清,组织液等,需要处理一下),如果检测样品中有抗体,就可以与抗原结合,再加入酶标记的抗抗体,就可以和样品中抗体结合,加入显色剂,显色后,检测,通过吸光度的多少,确定抗体的含量.
DNA纯化试剂盒与质粒DNA提取试剂盒这2者之间有区别吗?
我的实验是这样的,先纯化质粒,然后做酶切,再纯化DNA。
最后一步其实也可以用切胶回收试剂盒,我怕做不好,所以想选用DNA纯化试剂盒,但不知跟质粒DNA提取试剂盒是否有区别,因为说明书上说可以用Invitrogen的K210001.我搜索看了一席啊,觉得那个是提取质粒的小提啊。所以产生这个疑问,请大侠告知DNA纯化试剂盒与质粒DNA提取试剂盒这两者之间有区别吗?
用哪个公司的DNA纯化试剂盒比较好。谢谢啦!
工作液根据需要稀释在5%奶粉里,再加入少量叠氮化钠(大约0.01% w/v),4度保存。Alisa_lin(站内联系TA)分装,-20度保存。不要反复冻融,没有用过粉末的二抗,按说明书呗石头2011(站内联系TA)液体的一抗没加甘油的话尽量不要放在负二十,因为用的时候反复冻融不好。粉末状的二抗负二十就行了sayaya(站内联系TA)液体的一抗直接放-80度贮藏,可保存5年以上;
液体的一抗加50%甘油,-20度也不会冻结,可保存3-5年;
经常使用时取出一小份,4度可使用半年之久;
粉末状的二抗直接-20或-80度贮藏就行了。
最全的ELISA试剂盒说明书在这里(通用版)

规格:96T 48T
用途:科研实验(仅供实验室研究使用)
保存:2-8℃。
有效期:6个月

结合物的制备
1. 戊二醛交联法
戊二醛是一种双功能团试剂,它可以使酶与蛋白质的氨基通过它而联结。碱性磷酸一般用此法进行标记。交联方法一步法、两步法两种。在一步法中戊二醛直接加入酶与抗体的混合物中,反应后即得酶标记抗体。
ELISA中常用的酶一般都用此法交联。它具有操作简便、有效和重复性好等优点。缺点是交联反应是随机的,酶与抗体交联时分子间的比例不严格,结合物的大小也不均一,酶与酶,抗体与抗体之间也有可能交联,影响效果。在两步法中,先将酶与戊二醛作用,透析除去多余的戊二醛后,再与抗体作用而形成酶标抗体。也可先将抗体与戊二醛作用,再与酶联结。两步法的产物中绝大部分的酶与蛋白质是以1:1的比例结合的,较一步法的酶结合物更有助于本底的改善以提高敏感度,但其偶联的有效率较一步法低。
2. 过碘酸盐氧化法:本法只适用于含糖量较高的酶。辣根过氧化物酶的标记常用此法。反应时,过碘酸钠将HRP分子表面的多糖氧化为醛基很活泼,可与蛋白质上的氨基形成Schiff氏碱而结合。酶标记物按克分子比例联结,其最佳比例为:酶/抗体=1-2/1。此法简便有效,一般认为是HRP最可取的标记方法,但也有人认为所有试剂较为强烈,各批实验结果不易重演。
按以上方法制备的酶结合物一般都混有未结合物的酶和抗体。理论上,结合物中混有的游离酶一般不影响ELISA中最后的酶活性测定,因经过彻底洗涤,游离酶可被除去,并不影响最终的显色。但游离的抗体则不同,它会与酶标抗体竞争相应的固相抗原,从而减少了结合到固相上的酶标抗体的量。因此制备的酶结合物应予纯化,去除游离的酶和抗体后用于检测,效果更好。纯化的方法很多,分离大分子化合物的方法均可应用。硫酸铵盐析法最为简便,但效果并不理想,因为此法只能去除留在上清中的游离酶,但相当数量的游离抗体仍与酶结合物一起沉淀而不能分开。用离子交换层析或分子筛分离更为可取,高效液相层析法可将制备的结合物清晰地分成三个部分:游离酶、游离抗体和纯结合物而取得最佳的分离效果,但费用较贵。
结合物制得后,在用作ELISA试剂前尚需确定其适当的工作浓度。使用过浓的结合物,既不经济,又可使本底增高;结合物的浓度过低,则又影响检测的敏感性。所以必须对结合物的浓度予以选择。最适的工作浓度就是指结合物稀释至这一浓度时,能维护一个低的本底,并获得测定的最佳灵敏度,达到最合适的测定条件和测定费用的节省。就酶标抗体本身而言,它的有效工作浓度是指与其相应抗原包被的载体作试验时,能得到阳性反应的最高稀释度。例如某一HRP:抗人IgG制剂标明的工作浓度为1:5000,表示该制剂经1:5000稀释后,在与人IgG包被的固相作ELISA试验时,将发生阳性反应。但在用于具体的ELISA检测中,酶标抗体的最适工作浓度受到固相载体的性质、包被抗原或抗体的纯度以及整个检测系统如标本、反应温度和时间等的影响,因此必须在实际测定条件下进行"滴配"选择能达到高敏感度的最大稀释度作为试剂盒中的工作浓度。
结合物的保存
酶标抗体中的酶和抗体均为生物活性物质,保存不当,极易失活。高浓度的结合物较为稳定,冰冻干燥后可在普通冰箱中保存一年左右,但冻干过程中引起活力的减低,而且使用时需经复溶,颇为不便。结合物溶液中加入等体积的甘油可在低温冰箱或普通冰箱的冰格中较长时间保存。早期的ELISA试剂盒中的结合物一般均按以上两种形式供应,配以稀释液(见3.2.5)临用时按标明的稀释度稀释成工作液。现在较先进的ELISA试剂盒均已用合适的缓冲液配成工作液,使用时不需再行稀释,在4-8℃保存期可达6个月。由于蛋白质浓度较低,结合物易失活,需加入蛋白保护剂。另外再加入抗生素(例如庆大霉素)和防腐剂(HRP结合物加硫柳泵,AP结合物可加叠氮钠),以防止细菌生长。
结合物的稀释液
用于稀释高浓度的结合物以配成工作液。为避免结合物在反应中直接吸附在固相载体上,在稀释缓冲液中常加入高浓度的无关蛋白质(例如1%牛血清白蛋白),通过竞争以抑制结合物的吸附。一般还加入具有抑制蛋白质吸附于塑料表面的非离子型表面活性剂,如吐温20,0.05%的浓度较为适宜。在间接测定抗体时,血清标本需稀释后进行测定,也可应用这种稀释液。
试剂盒组成

标本要求
1. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2. 加样
分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
操作程序总结:

计算
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

注意事项
1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。
洗涤液
在板式ELISA中,常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水。
酶反应终止液
常用的HRP反应终止液为硫酸,其浓度按加量及比色液的最终体积而异,在板式ELISA中一般采用2mol/L。
阳性对照品和阴性对照品
阳性对照品和阴性对照品是检验试验有效性的控制品,同时也作为判断结果的对照,因此对照品,特别是阳性对照品的基本组成应尽量与检测标本的组成相一致。以人血清为标本的测定,对照品最好也为人血清,因为正常人血清在各种ELISA模式中可产生不同程度的本底。由于大量正常人血甭较难得到,国外试剂盒中的对照品多以复钙人血浆为原料,即在血浆中加入钙离子,使其中的纤维蛋白质凝固,除去凝块后所得的液体,其组成与血清相似。阴性对照品须先行检测,确定其中不含待测物质。例如HBsAg检测的阴性对照品中不可含HBsAg,最好抗HBs也是阴性。阳性对照品多以含蛋白保护剂的缓冲液为基质,其中加入一定量的待检物质,此量最好在试剂说明书中标明。加入的量应与试剂的敏感度相称,在测定中得到的吸光值与受检标本吸光值比较,可对标本中受检物质的量有一个粗略的估计。国外检测HBsAg的ELISA试剂盒检测敏感度约为0.5ng/ml,阳性对照品中含量约为10ng/ml。在对照品中一般加入抗生素和防腐剂,以利保存。
包被用抗体
包被固相载体的抗体应具有高亲和力和高特异性,可取材于抗血清或含单克隆抗体的腹水或培养液。如免疫用抗原中含有杂质(即便是极微量的),在抗血清中将出现杂抗体,必须除去(可用吸收法)后才能用于ELISA,以保证试验的特异性。抗血清不能直接用于包被,应先提取IgG,通常采用硫酸铵盐析和Sephadex凝胶过滤法。一般经硫酸铵盐析粗提的IgG已可用于包被,高度纯化的IgG性质不稳定。如需用高亲和力的抗体包被以提高试验的敏感性,则可采用亲和层析法以除去抗血清中含量较多的非特异性IgG。腹水中单抗的浓度较高,特异性亦较强,因此不需要作吸收和亲和层析处理,一般可将腹水作适当稀释后直接包被,必要时也可用纯化的IgG。应用单抗包被时应注意,一种单抗仅针对一种抗原决定簇,在某些情况下,用多种单抗混合包被,可取得更好的效果。
包被的条件
包被用抗原或抗体的浓度,包被的温度和时间,包被液的pH等应根据试验的特点和材料的性质而选定。抗体和蛋白质抗原一般采用pH9.6的碳酸盐缓冲液作为稀释液,也有用pH7.2的磷酸盐缓冲液及pH7~8的Tris-HCL缓冲液作为稀释液的。通常在ELISA板孔中加入包被液后,在4-8℃冰箱中放置过夜,37℃中保温2小时被认为具有同等的包被效果。包被的最适当浓度随载体和包被物的性质可有很大的变化,每批材料需通过实验与酶结合物的浓度协调选定。一般蛋白质的包被浓度为100ng/ml-20ug/ml。
包被的方式
将抗原或抗体固定在过程称为包被。换言之,包被即是抗原或抗体结合到固相载体表面的过程。蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的,靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用于。这种物理吸附是非特异性的,受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响。载体对不同蛋白质的吸附能力是不相同的,大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团,故更易吸附到固相载体表面。 IgG对聚苯乙烯等固相具有较强的吸附力,其联结多发生在Fc段上,抗体结合点暴露于外,因此抗体的包被一般均采用直接吸附法。蛋白质抗原大多也可采用与抗体相似的方法包被。当抗原决定簇存在于或邻近于疏水区域时,抗原与固相载体的直接吸附可使抗原决定簇不能充分暴露,在这种情况下,直接包被效果不佳,可以采用间接的捕获包被法,即先将针对该抗原的特异抗体作预包被,其后通过抗原抗体反应使抗原固相化。此间接结合在固相上的抗原远离载体表面,其抗原决定簇也得以充分暴露。间接包被的抗原经固相抗体的亲和层析作用,包被在固相上的抗原纯度大大提高,因此含杂质较多的抗原也可采用捕获包被法,试验的特异性、敏感性均由此得以改善,重复性亦佳。间接包被的另一优点是抗原用量少,仅为直接包被的1/10乃至于/100。不易吸附在聚苯乙烯载体上的非蛋白质抗原可采用特殊的包被方式。例如,在检测抗DNA抗体时,需用DNA作为包被抗原,而普遍的固相载体一般不能直接与核酸结合。可将聚苯乙烯板先经紫外线照射,以增加其吸附性能。固相载体先用碱性蛋白质,如聚赖氨酸、鱼精蛋白等作预包被,也可提高核酸的结合力。也可用亲和素生物素系统作间接包被,即用亲和素先包被载体,然后加入生物素化的DNA,这种包被方法均匀、牢固,已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。
脂类物质无法与固相载体结合,可将其在有机溶剂中溶解后加入ELISA板孔中,开盖置冰箱过夜或冷风吹干,待酒精挥发后,让脂质自然干固在固相表面。抗心磷脂抗体的ELISA试剂一般采用这种包被方式。
洗板方法:
1. 手工洗板方法:吸去或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分钟,根据需要,重复此过程数次。
2. 自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。待检样本:体液、血清、血浆、细胞培养上清液、尿液、组织匀浆、心房水标本等