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Kapa biosystems/Library Preparation for Illumina/KK8710/24 adapters x 40 µl each
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Kapa biosystems/Library Preparation for Illumina/KK8710/24 adapters x 40 µl each
品牌 / 
kapabiosystems
货号 / 
KK8710
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Description:

KAPASingle-IndexedAdapterKit,SetA+B(1.5µM)

LibraryPreparationforIllumina

It’scomplex,butwehaveitcovered.

KAPADNALibraryPreparationKitsforIllumina®sequencingplatformscontainevolvedandoptimallyformulatedenzymesthatenablethehighestoverallcoveragefromtheleastamountoftotalsequencing.

KitsareoptimizedtoachievesignificantlyhigherlibraryyieldsandcontainKAPAHiFiforhigh-fidelity,high-efficiencyandlow-biaslibraryamplification.Thisensuresthehighestlibraryandsequencedataquality,particularlyfromlow-inputanddifficultsamplessuchasFFPEandChIPDNA.

NEW!KAPADual-IndexedAdapterKitsarenowavailable.FormoreinformationonKAPAAdapterKits,scrolldowntotheOrderingsection,ordownloadtheKAPAAdapterandBeadCalculator.

DownloadourKAPA AdapterandBeadCalculator

 

ForResearchUseOnly.Notforuseindiagnosticprocedures.

ProductHighlights

Achievegreatermolecularcomplexity

  • Higheryieldsofadapter-ligatedlibrarytranslatestohighermolecularcomplexity
  • Fewercyclesofamplificationareneeded,whichresultsinlowerPCRduplicationrates
  • PCR-freeworkflowspossIBLefrominputs≥100ng*

Reduceamplificationbiasandimprovecoverage

  • KAPAHiFireducesPCRbias*
  • ImprovescoverageuniformityofGC-andAT-richregions,promoters,lowcomplexityandotherchallengingregions*

Createhigh-qualitylibrariesfromchallengingsamples

  • High-qualitywholeexomesequencingfromlibrariespreparedusingaslittleas10nghumangenomicDNA*
  • Highsuccessrateswith250ngFFPEorless*
  • Routinelibraryconstructionfrom≥100pgChIPDNA*
KAPA Library Quantification methods (96- and 384-well) format are available for the Sciclone NGS and NGSx workstation (PerkinElmer) and other instruments used in high-throughput NGS sample preparation pipelines.

Automatewithpre-validatedscripts

 

*Dataonfile.

Applications:

Applications
  • WholeGenomeSequencing
  • ChIPSequencing
  • WholeExomeSequencing
  • AmpliconSequencing
  • TargetedSequencing(Capture)
  • MethylSequencing

KitSpecificationsandContents/Storage:

KitSpecificationsandContents/Storage

Kitscanbestoredforupto18months at-20˚C.

Kitsincludereagentsforendrepair,A-tailing,ligationandlibraryamplification.PCR-freeversions(withoutlibraryamplificationreagent)arealsoavailable.“With-bead”kitsincludePEG/NaClsolutionforSPRIbeadcleanups.
All96-librarykitsareautomationfriendly.

Components

Specifications

Spec
Description
CompatiblePlatform
IlluminaHiSeq,MiSeq,NextSeqandGAIIx
LibraryType
DNA
StartingMaterial
FragmentedDNAorPCRamplicons
InputAmount
100pg–5µg
SequencingApplications
WholeGenomeSequencingWholeExomeSequencingTargetedSequencing(custompanels)ChIP-SeqAmpliconSequencingMethyl-Seq
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2018-12-26
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1.1.常量肉汤稀释法1.1.1.抗菌药物贮存液制备 抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。抗菌药物直接购自厂商或相关机构。所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。例如:需配制100 ml浓度为1280μg/ml的抗生素贮存液 查看更多>
差异显示法[原理]:该实验方法是针对从特定细胞或组织类型的mRNA池来源的样品用PCR技术对其中许多的cDNA基因一起进行扩增和显示的实验方法。该实验方法倚赖两套不同类型的合成寡核苷酸引物:一套锚定反义引物与一套随机正义引物。锚定反义引物是与mRNA的poly(A)尾及3’-非翻译区的连接处相复性结合 查看更多>
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CDNA文库筛选 实验方法 123
小柒pfum2021-07-22
1 核酸杂交
用,靠.规模析文库克隆.
1)同源探针:至少含所需cDNA克隆部确切序列.用于部克隆离cDNA文库全克隆.
2)部同源探针:探针序列与所要筛选cDNA克隆序列相关相同.用于克隆家族基.
3)总cDNA探针:
通反转录酶均匀掺入放射性核苷酸或通总或级离poly(A)+mRNA进行末端标记获cDNA探针.
cDNA扣除探针:
第种mRNA制备cDNA探 针, 连续与20倍量第二种mRNA杂交;
收未杂交cDNA探针, 再与100倍量第种mRNA杂交, 使原mRNA些特异序列高度富集.
* 主要用于探测cDNA文库与调节水平所差别mRNA克隆.
5)合寡核苷酸探针
2 特异性免疫检测
cDNA表达文库,目基表达产 物能与特异性抗体发免疫反应,通酶加检测
3 cDNA克隆同胞检测
cDNA文库若干组含10-100克隆易于处理亚cDNA文库,每组亚cDNA文库进行检测,鉴定阳性库再断其更细库进行检测,直获阳性单克隆.
4 cDNA克隆确证
cDNA克隆含编码某特定蛋白质完整氨基酸序列放读框.
第四节 目基离
外源基:
插入载体内特定片段基.
目基:
些已或者准备要离,改造,扩增或表达特定基或DNA片段.图" class="ikqb_img_alink">
第一次建CDNA文库,用的是Clontech的PCRcDNAsynthesisKit,通过LDPCR获得cDNA二链后割胶分级回收连接PMD-18T载体,最后PCR检测,得到的片段大部分集中在500bp左右,只有少量的大于1kb,请各位大虾帮忙看看是不是因为T载体不适合做cDNA文库还是因为质粒cDNA文库的容量问题,还是其它什么原因?多多赐教,不胜感激!
基因组dna文库和cdna文库的区别 123
流泪的魔术师2017-12-07
一、 DNA文库和cDNA文库的概念
将某种生物的基因组DNA切割成一定大小的片段,并与合适的载体重组后导入宿主细胞进行克隆。这些存在于所有重组体内的基因组DNA片段的集合,即基因组文库,它包含了该生物的所有基因。
以mRNA为模板,经反转录酶催化,在体外反转录成cDNA,与适当的载体(常用噬菌体或质粒载体)连接后转化受体菌,则每个细菌含有一段cDNA,并能繁殖扩增,这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。
二、 DNA文库和cDNA文库的构建原理
DNA文库:用限制性内切酶切割细胞的整个基因组DNA,可以得到大量的基因组DNA片段,然后将这些DNA片段与载体连接,再转化到细菌中去,让宿主菌长成克隆。这样,一个克隆内的每个细胞的载体上都包含有特定的基因组DNA片段,整个克隆群体就包含基因组的全部基因片段总和称为基因组文库。
cDNA文库:以mRNA为模板,经反转录酶催化,在体外反转录成cDNA,与适当的载体常用噬菌体或质粒载体连接后转化受体菌,则每个细菌含有一段cDNA,并能繁殖扩增,这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。
三、DNA文库和cDNA文库的用途
基因组含有的基因在特定的组织细胞中只有一部分表达,而且处在不同环境条件、不同分化时期的细胞其基因表达的种类和强度也不尽相同,所以cDNA文库具有组织细胞特异性。cDNA文库显然比基因组DNA文库小得多,能够比较容易从中筛选克隆得到细胞特异表达的基因。但对真核细胞来说,从基因组DNA文库获得的基因与从cDNA文库获得的不同。DNA文库所含的是带有内含子和外显子的基因组基因,而从cDNA文库中获得的是已经过剪接、去除了内含子的cDNA展开
要工作了,接着一个老师用smart方法构建的CDNA文库做,单位的要求是一年之内发一篇SCI,不知cDNA文库都可以继续哪些工作,有哪些应用?
我大概了解的一下,cDNA文库可以用来做酵母双杂交,也可以做基因功能研究,有没有具体的课件或者文章可以了解呢?
请教一下:建立CDNA文库目前方法很多,试剂盒的种类也非常繁杂。我想用固相法来建立文库,即利用磁珠的吸附特性合成。但不清楚这样的操作是否容易控制反应条件?另外,这样作出的库容量是否能达到较高?磁珠的应用对库容的影响到底大不大?不知哪位高手做过这方面的实验,烦告知!不胜感激!
cDNA克隆mRNA原材料,经体外反转录合互补DNA(cDNA),再与载体DNA连接引入寄主细胞.每cDNA反映种mRNA结构,cDNA克隆布反映mRNA布.特点:
①些物,RNA病毒没DNA,能用cDNA克隆;
②cDNA克隆易筛选,cDNA库包含非结构基克隆,且每cDNA克隆含mRNA信息;
③cDNA能细菌表达.cDNA仅代表某发育阶段表达遗传信息,基文库才包含物完整遗传信息.
最近用Clontech的Smart技术,构建了肾组织的CDNA文库,库容量还行,3*106cfu,随机挑选了74个克隆进行测序,结果发现,其中有28个mtDNA转录产物,咨询了公司后,也不知道什么原因,理论上存在mtRNA也是可以理解的,但是为什么会有如此高的比例,真是百思不得其解,公司让在cDNA合成前,去掉mtRNA,怎么去得了啊,这到底怎么造成了?
正常 因为mRNA的翻译效率不同啊 而且对mRNA的检测更加灵敏 当然也就是更加不准确 WB也是各种不准 反正肯定效率不同啦


各位大侠帮帮忙
指点一些关于全长CDNA文库构建的知识

看了一些论文和文章还是挺迷惑的,希望有人指点一下各个步骤有什么要注意的,难点是什么

cDNA文库构建过程中,由总RNA反转录得cDNA和走mRNA路线得cDNA有什么影响吗?
哪个公司的试剂盒比较好?
(我做的是苔藓植物)
对于真核生物来说,cDNA文库里面获取的基因缺了内含子和非编码区等。
cDNA是DNA转录成RNA再逆转录获得的,而在转录时,原DNA上的内含子和非编码区都会被加工切掉,只剩下原DNA编码区上的外显子对应的RNA片段,再逆转录的话,得到的cDNA就跟原DNA不同了。
所以要基因组测序,提供cDNA文库是不够的
基因组文库的类型有()_123
风生Ohg32起2017-12-07
cDNA文库
以mRNA为模板,经反转录酶催化,在体外反转录成cDNA,与适当的载体常用噬菌体或质粒载体连接后转化受体菌,则每个细菌含有一段cDNA,并能繁殖扩增,这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。基因组含有的基因在特定的组织细胞中只有一部分表达,而且处在不同环境条件、不同分化时期的细胞其基因表达的种类和强度也不尽相同,所以cDNA文库具有组织细胞特异性。cDNA文库显然比基因组DNA文库小得多,能够比较容易从中筛选克隆得到细胞特异表达的基因。但对真核细胞来说,从基因组DNA文库获得的基因与从cDNA文库获得的不同,基因组。DNA文库所含的是带有内含子和外显子的基因组基因,而从cDNA文库中获得的是已经过剪接、去除了内含子的cDNA

基因组文库
用限制性内切酶切割细胞的整个基因组DNA,可以得到大量的基因组DNA片段,然后将这些DNA片段与载体连接,再转化到细菌中去,让宿主菌长成克隆。这样,一个克隆内的每个细胞的载体上都包含有特定的基因组DNA片段,整个克隆群体就包含基因组的全部基因片段总和称为基因组文库。
将某种生物的基因组DNA切割成一定大小的片段,并与合适的载体重组后导入宿主细胞进行克隆。这些存在于所有重组体内的基因组DNA片段的集合,即基因组文库,它包含了该生物的所有基因。展开
附件里是我反转录的CDNA片段,过柱后,基本上去除了500bp以下的小片段。我用的是BDclontechCo的libraryconstructKit,我不是很清楚该选择哪几个管子的cDNA去装载体比较好?
DNAmark是TakaraCo的DL2000(2000,1000,750,500,200,100)。
谢谢各位用过此kit的战友指点!