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Kapa biosystems/KAPA Library Amplification Kits/KK2702/250 x 50 µL reactions
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Kapa biosystems/KAPA Library Amplification Kits/KK2702/250 x 50 µL reactions
品牌 / 
kapabiosystems
货号 / 
KK2702
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4000-520-616

Description:

Real-timePCRlibraryamplification,withfluorescentstandards

KAPALibraryAmplificationKits

ThegoldstandardforNGSlibraryamplification.

KAPALibraryAmplificationKitscontainKAPAHiFiDNAPolymerase,anovelenzymeengineeredforultra-highfidelityandrobustnessusingKapa’sdirectedevolutiontechnologyplatform.

KAPAHiFihasbecometheenzymeofchoiceforNGSlibraryamplificationduetoitsABIlitytoamplifycomplexDNApopulationswithhighfidelity,highefficiency,decreasedPCRduplicationratesandverylowbias.*ThisresultsinlowerduplicationratesandimprovedcoverageofGC-andATrichregions,promoters,lowcomplexityandotherchallengingregionsinallNGSlibraryconstructionworkflowsrequiringlibraryamplification.

Inadditiontothestandardlibraryamplificationformulation,KAPAHiFiisavailableinauniquereal-timeformulation,forapplicationsthatdemandprecisecontroloverlibraryamplification.Auracil-tolerantvariant,KAPAHiFiUracil+isalsoavailableforthehigh-efficiency,high-fidelity,low-biasamplificationoflibrariesconstructedfrombisulfite-treatedDNA.

KAPALibraryAmplificationKitsforIllumina® platformsnowalsoincludeanoptimallyformulatedLibraryAmplificationPrimerMix.

*Dataonfile.

ForResearchUseOnly.Notforuseindiagnosticprocedures.

ProductHighlights

Achievethelowestamplificationbiasandduplicationrates

  • Loweramplificationbiasresultinimprovedrepresentationofalllibraryfragmentsandsequenceregions
  • High-efficiencyamplificationleadstofeweramplificationcyclesandlowerPCRduplicates
  • Lessadditionalnext-generationorSangersequencingneededtocompletegenomes
The first exons of many genes have a high GC content, and are therefore difficult to amplify. Regions of these exons are therefore typically underrepresented in whole exome sequence data. Pre-capture amplification with the evolved, low-bias KAPA HiFi DNA Polymerase results in significantly improved coverage of GC- and AT-rich regions, and other sequence elements that are difficult to amplify. Data courtesy of The Broad Institute. Data on file.

ImprovecoverageofGC-andAT-richregions

  • LoweramplificationbiasimprovescoverageuniformityofGC-andAT-richregions,promoters,lowcomplexityandotherchallengingregions
  • ImprovedoverallcoverageandcoverageuniformityobservedonbothIllumina andIonTorrent™ sequencingplatforms
Real-time, high fidelity amplification of multiple libraries with the KAPA Real-Time Library Amplification Kit. Twenty libraries, spanning a ~64-fold concentration range (equivalent to 6 cycles), were simultaneously amplified and terminated after 14 cycles. Fourteen of the twenty libraries fall within the targeted amplification range (the fluorescence range defined by the Real-Time Amplification Standards 1¬–3). The remaining six libraries could either be used as is, noting that they may be outside the optimal concentration range, or they could be re-amplified individually or in high- or low-concentration groups. Data on file.

Exerciseprecisecontroloverlibraryamplification

  • KAPAReal-TimeAmplificationKitsallowforlibraryamplificationtobeobservedinrealtime
  • Terminateamplificationattheoptimalpointforindividualsamples
  • Optimizelibraryamplificationparametersforhigherthroughputworkflows
Error rates of Taq DNA polymerase and polymerases typically used in NGS library amplification. The error rates of proofreading DNA polymerases such as Q5 (New England Biolabs), Phusion (Thermo Scientific) and the evolved KAPA HiFi DNA Polymerase is 50 – 100 times lower than that of Taq. The error rate of KAPA HiFi was confirmed by deep sequencing on the 454 platform, and is 1 error per 3.54 x 106 nucleotides incorporated. Data on file.

AmplifyNGSlibrarieswithindustry-leADIngfidelity

  • KAPAHiFiwasengineeredusingdirectedevolutiontohaveenhancedproofreading(3′-5′exonuclease)activity
  • Industry-leadingfidelityconfirmedby454sequencing

Applications:

Applications
  • AmplificationofIllumina libraries(DNAandRNAsequencing)
  • Real-timeamplificationoflibrariespreparedfromlowinput,ChIPDNAandotherprecioussamples
  • Pre-andpost-captureamplificationintargetedcaptureworkflows

KitSpecificationsandContents/Storage:

KitSpecificationsandContents/Storage

Kitscanbestoredforupto12months at-20˚C.

KitsincludeKAPAHiFiHotStartReadyMix(2X),aconvenientPCRmastermixcontainingKAPAHiFiHotStartDNAPolymerase,KAPAdNTPs,reactionbuffer,andMgCl2atafinalconcentrationof2.5mM.Kitswithprimersarealsoavailable.

Kitsforreal-timelibraryamplificationincludeareal-timeversionoftheKAPAHiFiHotStartReadyMix,aswellasfluorescentstandardstomonitorlibraryamplification.

Components

LAK_Component Chart

Specifications

Spec
Description
CompatIBLePlatform
IlluminaHiSeq,MiSeq,NextSeq,andGAIIx
LibraryType
DNA,RNA,andbisulfite-treatedDNA
StartingMaterial
AnyNGSlibrarythatrequiresamplification
SequencingApplications
WholeGenomeSequencingWholeExomeSequencingTargetedSequencing(custompanels)RNA-SeqChIP-SeqAmpliconSequencing
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2018-12-26
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1.1.常量肉汤稀释法1.1.1.抗菌药物贮存液制备 抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。抗菌药物直接购自厂商或相关机构。所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。例如:需配制100 ml浓度为1280μg/ml的抗生素贮存液 查看更多>
差异显示法[原理]:该实验方法是针对从特定细胞或组织类型的mRNA池来源的样品用PCR技术对其中许多的cDNA基因一起进行扩增和显示的实验方法。该实验方法倚赖两套不同类型的合成寡核苷酸引物:一套锚定反义引物与一套随机正义引物。锚定反义引物是与mRNA的poly(A)尾及3’-非翻译区的连接处相复性结合 查看更多>
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CDNA文库筛选 实验方法 123
小柒pfum2021-07-22
1 核酸杂交
用,靠.规模析文库克隆.
1)同源探针:至少含所需cDNA克隆部确切序列.用于部克隆离cDNA文库全克隆.
2)部同源探针:探针序列与所要筛选cDNA克隆序列相关相同.用于克隆家族基.
3)总cDNA探针:
通反转录酶均匀掺入放射性核苷酸或通总或级离poly(A)+mRNA进行末端标记获cDNA探针.
cDNA扣除探针:
第种mRNA制备cDNA探 针, 连续与20倍量第二种mRNA杂交;
收未杂交cDNA探针, 再与100倍量第种mRNA杂交, 使原mRNA些特异序列高度富集.
* 主要用于探测cDNA文库与调节水平所差别mRNA克隆.
5)合寡核苷酸探针
2 特异性免疫检测
cDNA表达文库,目基表达产 物能与特异性抗体发免疫反应,通酶加检测
3 cDNA克隆同胞检测
cDNA文库若干组含10-100克隆易于处理亚cDNA文库,每组亚cDNA文库进行检测,鉴定阳性库再断其更细库进行检测,直获阳性单克隆.
4 cDNA克隆确证
cDNA克隆含编码某特定蛋白质完整氨基酸序列放读框.
第四节 目基离
外源基:
插入载体内特定片段基.
目基:
些已或者准备要离,改造,扩增或表达特定基或DNA片段.图" class="ikqb_img_alink">
第一次建CDNA文库,用的是Clontech的PCRcDNAsynthesisKit,通过LDPCR获得cDNA二链后割胶分级回收连接PMD-18T载体,最后PCR检测,得到的片段大部分集中在500bp左右,只有少量的大于1kb,请各位大虾帮忙看看是不是因为T载体不适合做cDNA文库还是因为质粒cDNA文库的容量问题,还是其它什么原因?多多赐教,不胜感激!
基因组dna文库和cdna文库的区别 123
流泪的魔术师2017-12-07
一、 DNA文库和cDNA文库的概念
将某种生物的基因组DNA切割成一定大小的片段,并与合适的载体重组后导入宿主细胞进行克隆。这些存在于所有重组体内的基因组DNA片段的集合,即基因组文库,它包含了该生物的所有基因。
以mRNA为模板,经反转录酶催化,在体外反转录成cDNA,与适当的载体(常用噬菌体或质粒载体)连接后转化受体菌,则每个细菌含有一段cDNA,并能繁殖扩增,这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。
二、 DNA文库和cDNA文库的构建原理
DNA文库:用限制性内切酶切割细胞的整个基因组DNA,可以得到大量的基因组DNA片段,然后将这些DNA片段与载体连接,再转化到细菌中去,让宿主菌长成克隆。这样,一个克隆内的每个细胞的载体上都包含有特定的基因组DNA片段,整个克隆群体就包含基因组的全部基因片段总和称为基因组文库。
cDNA文库:以mRNA为模板,经反转录酶催化,在体外反转录成cDNA,与适当的载体常用噬菌体或质粒载体连接后转化受体菌,则每个细菌含有一段cDNA,并能繁殖扩增,这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。
三、DNA文库和cDNA文库的用途
基因组含有的基因在特定的组织细胞中只有一部分表达,而且处在不同环境条件、不同分化时期的细胞其基因表达的种类和强度也不尽相同,所以cDNA文库具有组织细胞特异性。cDNA文库显然比基因组DNA文库小得多,能够比较容易从中筛选克隆得到细胞特异表达的基因。但对真核细胞来说,从基因组DNA文库获得的基因与从cDNA文库获得的不同。DNA文库所含的是带有内含子和外显子的基因组基因,而从cDNA文库中获得的是已经过剪接、去除了内含子的cDNA展开
要工作了,接着一个老师用smart方法构建的CDNA文库做,单位的要求是一年之内发一篇SCI,不知cDNA文库都可以继续哪些工作,有哪些应用?
我大概了解的一下,cDNA文库可以用来做酵母双杂交,也可以做基因功能研究,有没有具体的课件或者文章可以了解呢?
请教一下:建立CDNA文库目前方法很多,试剂盒的种类也非常繁杂。我想用固相法来建立文库,即利用磁珠的吸附特性合成。但不清楚这样的操作是否容易控制反应条件?另外,这样作出的库容量是否能达到较高?磁珠的应用对库容的影响到底大不大?不知哪位高手做过这方面的实验,烦告知!不胜感激!
cDNA克隆mRNA原材料,经体外反转录合互补DNA(cDNA),再与载体DNA连接引入寄主细胞.每cDNA反映种mRNA结构,cDNA克隆布反映mRNA布.特点:
①些物,RNA病毒没DNA,能用cDNA克隆;
②cDNA克隆易筛选,cDNA库包含非结构基克隆,且每cDNA克隆含mRNA信息;
③cDNA能细菌表达.cDNA仅代表某发育阶段表达遗传信息,基文库才包含物完整遗传信息.
最近用Clontech的Smart技术,构建了肾组织的CDNA文库,库容量还行,3*106cfu,随机挑选了74个克隆进行测序,结果发现,其中有28个mtDNA转录产物,咨询了公司后,也不知道什么原因,理论上存在mtRNA也是可以理解的,但是为什么会有如此高的比例,真是百思不得其解,公司让在cDNA合成前,去掉mtRNA,怎么去得了啊,这到底怎么造成了?
正常 因为mRNA的翻译效率不同啊 而且对mRNA的检测更加灵敏 当然也就是更加不准确 WB也是各种不准 反正肯定效率不同啦


各位大侠帮帮忙
指点一些关于全长CDNA文库构建的知识

看了一些论文和文章还是挺迷惑的,希望有人指点一下各个步骤有什么要注意的,难点是什么

cDNA文库构建过程中,由总RNA反转录得cDNA和走mRNA路线得cDNA有什么影响吗?
哪个公司的试剂盒比较好?
(我做的是苔藓植物)
对于真核生物来说,cDNA文库里面获取的基因缺了内含子和非编码区等。
cDNA是DNA转录成RNA再逆转录获得的,而在转录时,原DNA上的内含子和非编码区都会被加工切掉,只剩下原DNA编码区上的外显子对应的RNA片段,再逆转录的话,得到的cDNA就跟原DNA不同了。
所以要基因组测序,提供cDNA文库是不够的
基因组文库的类型有()_123
风生Ohg32起2017-12-07
cDNA文库
以mRNA为模板,经反转录酶催化,在体外反转录成cDNA,与适当的载体常用噬菌体或质粒载体连接后转化受体菌,则每个细菌含有一段cDNA,并能繁殖扩增,这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。基因组含有的基因在特定的组织细胞中只有一部分表达,而且处在不同环境条件、不同分化时期的细胞其基因表达的种类和强度也不尽相同,所以cDNA文库具有组织细胞特异性。cDNA文库显然比基因组DNA文库小得多,能够比较容易从中筛选克隆得到细胞特异表达的基因。但对真核细胞来说,从基因组DNA文库获得的基因与从cDNA文库获得的不同,基因组。DNA文库所含的是带有内含子和外显子的基因组基因,而从cDNA文库中获得的是已经过剪接、去除了内含子的cDNA

基因组文库
用限制性内切酶切割细胞的整个基因组DNA,可以得到大量的基因组DNA片段,然后将这些DNA片段与载体连接,再转化到细菌中去,让宿主菌长成克隆。这样,一个克隆内的每个细胞的载体上都包含有特定的基因组DNA片段,整个克隆群体就包含基因组的全部基因片段总和称为基因组文库。
将某种生物的基因组DNA切割成一定大小的片段,并与合适的载体重组后导入宿主细胞进行克隆。这些存在于所有重组体内的基因组DNA片段的集合,即基因组文库,它包含了该生物的所有基因。展开
附件里是我反转录的CDNA片段,过柱后,基本上去除了500bp以下的小片段。我用的是BDclontechCo的libraryconstructKit,我不是很清楚该选择哪几个管子的cDNA去装载体比较好?
DNAmark是TakaraCo的DL2000(2000,1000,750,500,200,100)。
谢谢各位用过此kit的战友指点!