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Kapa biosystems/KAPA Library Amplification Kits/KK2702/250 x 50 µL reactions
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Kapa biosystems/KAPA Library Amplification Kits/KK2702/250 x 50 µL reactions
品牌 / 
kapabiosystems
货号 / 
KK2702
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Description:

Real-timePCRlibraryamplification,withfluorescentstandards

KAPALibraryAmplificationKits

ThegoldstandardforNGSlibraryamplification.

KAPALibraryAmplificationKitscontainKAPAHiFiDNAPolymerase,anovelenzymeengineeredforultra-highfidelityandrobustnessusingKapa’sdirectedevolutiontechnologyplatform.

KAPAHiFihasbecometheenzymeofchoiceforNGSlibraryamplificationduetoitsABIlitytoamplifycomplexDNApopulationswithhighfidelity,highefficiency,decreasedPCRduplicationratesandverylowbias.*ThisresultsinlowerduplicationratesandimprovedcoverageofGC-andATrichregions,promoters,lowcomplexityandotherchallengingregionsinallNGSlibraryconstructionworkflowsrequiringlibraryamplification.

Inadditiontothestandardlibraryamplificationformulation,KAPAHiFiisavailableinauniquereal-timeformulation,forapplicationsthatdemandprecisecontroloverlibraryamplification.Auracil-tolerantvariant,KAPAHiFiUracil+isalsoavailableforthehigh-efficiency,high-fidelity,low-biasamplificationoflibrariesconstructedfrombisulfite-treatedDNA.

KAPALibraryAmplificationKitsforIllumina® platformsnowalsoincludeanoptimallyformulatedLibraryAmplificationPrimerMix.

*Dataonfile.

ForResearchUseOnly.Notforuseindiagnosticprocedures.

ProductHighlights

Achievethelowestamplificationbiasandduplicationrates

  • Loweramplificationbiasresultinimprovedrepresentationofalllibraryfragmentsandsequenceregions
  • High-efficiencyamplificationleadstofeweramplificationcyclesandlowerPCRduplicates
  • Lessadditionalnext-generationorSangersequencingneededtocompletegenomes
The first exons of many genes have a high GC content, and are therefore difficult to amplify. Regions of these exons are therefore typically underrepresented in whole exome sequence data. Pre-capture amplification with the evolved, low-bias KAPA HiFi DNA Polymerase results in significantly improved coverage of GC- and AT-rich regions, and other sequence elements that are difficult to amplify. Data courtesy of The Broad Institute. Data on file.

ImprovecoverageofGC-andAT-richregions

  • LoweramplificationbiasimprovescoverageuniformityofGC-andAT-richregions,promoters,lowcomplexityandotherchallengingregions
  • ImprovedoverallcoverageandcoverageuniformityobservedonbothIllumina andIonTorrent™ sequencingplatforms
Real-time, high fidelity amplification of multiple libraries with the KAPA Real-Time Library Amplification Kit. Twenty libraries, spanning a ~64-fold concentration range (equivalent to 6 cycles), were simultaneously amplified and terminated after 14 cycles. Fourteen of the twenty libraries fall within the targeted amplification range (the fluorescence range defined by the Real-Time Amplification Standards 1¬–3). The remaining six libraries could either be used as is, noting that they may be outside the optimal concentration range, or they could be re-amplified individually or in high- or low-concentration groups. Data on file.

Exerciseprecisecontroloverlibraryamplification

  • KAPAReal-TimeAmplificationKitsallowforlibraryamplificationtobeobservedinrealtime
  • Terminateamplificationattheoptimalpointforindividualsamples
  • Optimizelibraryamplificationparametersforhigherthroughputworkflows
Error rates of Taq DNA polymerase and polymerases typically used in NGS library amplification. The error rates of proofreading DNA polymerases such as Q5 (New England Biolabs), Phusion (Thermo Scientific) and the evolved KAPA HiFi DNA Polymerase is 50 – 100 times lower than that of Taq. The error rate of KAPA HiFi was confirmed by deep sequencing on the 454 platform, and is 1 error per 3.54 x 106 nucleotides incorporated. Data on file.

AmplifyNGSlibrarieswithindustry-leADIngfidelity

  • KAPAHiFiwasengineeredusingdirectedevolutiontohaveenhancedproofreading(3′-5′exonuclease)activity
  • Industry-leadingfidelityconfirmedby454sequencing

Applications:

Applications
  • AmplificationofIllumina libraries(DNAandRNAsequencing)
  • Real-timeamplificationoflibrariespreparedfromlowinput,ChIPDNAandotherprecioussamples
  • Pre-andpost-captureamplificationintargetedcaptureworkflows

KitSpecificationsandContents/Storage:

KitSpecificationsandContents/Storage

Kitscanbestoredforupto12months at-20˚C.

KitsincludeKAPAHiFiHotStartReadyMix(2X),aconvenientPCRmastermixcontainingKAPAHiFiHotStartDNAPolymerase,KAPAdNTPs,reactionbuffer,andMgCl2atafinalconcentrationof2.5mM.Kitswithprimersarealsoavailable.

Kitsforreal-timelibraryamplificationincludeareal-timeversionoftheKAPAHiFiHotStartReadyMix,aswellasfluorescentstandardstomonitorlibraryamplification.

Components

LAK_Component Chart

Specifications

Spec
Description
CompatIBLePlatform
IlluminaHiSeq,MiSeq,NextSeq,andGAIIx
LibraryType
DNA,RNA,andbisulfite-treatedDNA
StartingMaterial
AnyNGSlibrarythatrequiresamplification
SequencingApplications
WholeGenomeSequencingWholeExomeSequencingTargetedSequencing(custompanels)RNA-SeqChIP-SeqAmpliconSequencing
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公司介绍
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I. Solutions & SuppliesBRB80 (1X): 80 mM PIPES, 1 mM MgCl2, 1 mM EGTA, pH 6.8 with KOH (generally made as a 5X stock and stored at 4¡C) 100 mM GTP 10 查看更多>
人工设计转录因子来调控目标基因的表达已经不是梦想,基于锌指蛋白结构域的设计已经展开。锌指蛋白结构域能够结合于特定的三个碱基配对的DNA序列上。RNA干扰和反义核酸技术能够抑制基 查看更多>
差异显示法[原理]:该实验方法是针对从特定细胞或组织类型的mRNA池来源的样品用PCR技术对其中许多的cDNA基因一起进行扩增和显示的实验方法。该实验方法倚赖两套不同类型的合成寡核苷酸引物:一套锚定反义引物与一套随机正义引物。锚定反义引物是与mRNA的poly(A)尾及3’-非翻译区的连接处相复性结合 查看更多>
Cell Isolation Techniques Methods and MaterialsWorking With EnzymesAll of the enzymes Worthington offers for tissue dissociation applications are available as 查看更多>
一、核酸分子杂交技术1961年Hall开拓了液相核酸杂交技术的研究,其基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基顺序,通过碱基对之间非共价键的形成,出现稳定的双链区,形成杂交的双链。自此以后,由于分子生物学技术的迅猛发展,特别是70年代末到80年代初,分子克隆、质粒和噬菌体DNA的构建成 查看更多>
众所周知,科研工作者在进行医药方面的科学研究之前,需要制定完善的统计研究设计方案,那么什么样的设计方案才称得上是完善的呢?一般来说,完善的设计方案需具备以下几个条件:实验所需的人力、物力和时间资源;实验设计的“三要素”和“六原则”均符合专业和统计学要求,对实验数据的收集、整理、分析等有一套规范的规定和正确的方法。而其中准确把握统计 查看更多>
2018-12-26
相关文件如下: 点击浏览该文件 查看更多>
差减cDNA文库法[第一条链cDNA合成]1.合成第一条cDNA链时,所有试剂应按下列顺序依次加入:10×第一条链合成缓冲液 5.0μl10mM dNTP Mix(1.4μg/μl) 2.5μl(终浓度1.25mM)Linker primer(1.4μl,终浓度100μg/μl)DEPc H2ORNase block 查看更多>
Microtubule Spindowns for Visual Analysis Microtubule spindowns for visual analysis can be performed on single microtubules or microtubules nucleated from axon 查看更多>
DescriptionCell Staining for Senescence-Associated â-Galactosidase (SA-â-Gal) Activity Procedure1. Carefully remove the growth media from the cell 查看更多>
这里是一份GIBCO的低糖DMEM粉剂配制说明(普通高糖的DMEM培养基配法是一样的):TO PREPARE 1*LIQUID 1. Measrue out 5% less distilled water than desired total volume of medium using a mixing conta 查看更多>
Log in radioactive material received and deduct amount of radioactive material used in each experiment in Radioisotope Log Book. Clear your bench top work area 查看更多>
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cDNA克隆mRNA原材料,经体外反转录合互补DNA(cDNA),再与载体DNA连接引入寄主细胞.每cDNA反映种mRNA结构,cDNA克隆布反映mRNA布.特点:
①些物,RNA病毒没DNA,能用cDNA克隆;
②cDNA克隆易筛选,cDNA库包含非结构基克隆,且每cDNA克隆含mRNA信息;
③cDNA能细菌表达.cDNA仅代表某发育阶段表达遗传信息,基文库才包含物完整遗传信息.
最近用Clontech的Smart技术,构建了肾组织的CDNA文库,库容量还行,3*106cfu,随机挑选了74个克隆进行测序,结果发现,其中有28个mtDNA转录产物,咨询了公司后,也不知道什么原因,理论上存在mtRNA也是可以理解的,但是为什么会有如此高的比例,真是百思不得其解,公司让在cDNA合成前,去掉mtRNA,怎么去得了啊,这到底怎么造成了?

基因组酶切后,切胶回收浓度大概为多少才可以进行下一步实验?为什么二十几的浓度和载体连不上呢?载体也明明去磷酸化了,单连载体的时候也不会自连。那为什么把载体和酶切后的基因组连起来转化后挑菌做PCR验证却有很多空载呢?我的基因组酶切大小为2kb~4kb。上面那排7kb~10kb的带是什么东西呢?


附件里是我反转录的CDNA片段,过柱后,基本上去除了500bp以下的小片段。我用的是BDclontechCo的libraryconstructKit,我不是很清楚该选择哪几个管子的cDNA去装载体比较好?
DNAmark是TakaraCo的DL2000(2000,1000,750,500,200,100)。
谢谢各位用过此kit的战友指点!
这种题要根据题干内容来定。
(1)人的免疫球蛋白细胞 cDNA文库(cDNA 文库是把内含子去除后的裸DNA,人的和牛的DNA是不能识别的就是因为内含子的缘故,cRNA反转录后的是去除后的)。
基因组dna文库和cdna文库的区别 123
流泪的魔术师2017-12-07
一、 DNA文库和cDNA文库的概念
将某种生物的基因组DNA切割成一定大小的片段,并与合适的载体重组后导入宿主细胞进行克隆。这些存在于所有重组体内的基因组DNA片段的集合,即基因组文库,它包含了该生物的所有基因。
以mRNA为模板,经反转录酶催化,在体外反转录成cDNA,与适当的载体(常用噬菌体或质粒载体)连接后转化受体菌,则每个细菌含有一段cDNA,并能繁殖扩增,这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。
二、 DNA文库和cDNA文库的构建原理
DNA文库:用限制性内切酶切割细胞的整个基因组DNA,可以得到大量的基因组DNA片段,然后将这些DNA片段与载体连接,再转化到细菌中去,让宿主菌长成克隆。这样,一个克隆内的每个细胞的载体上都包含有特定的基因组DNA片段,整个克隆群体就包含基因组的全部基因片段总和称为基因组文库。
cDNA文库:以mRNA为模板,经反转录酶催化,在体外反转录成cDNA,与适当的载体常用噬菌体或质粒载体连接后转化受体菌,则每个细菌含有一段cDNA,并能繁殖扩增,这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。
三、DNA文库和cDNA文库的用途
基因组含有的基因在特定的组织细胞中只有一部分表达,而且处在不同环境条件、不同分化时期的细胞其基因表达的种类和强度也不尽相同,所以cDNA文库具有组织细胞特异性。cDNA文库显然比基因组DNA文库小得多,能够比较容易从中筛选克隆得到细胞特异表达的基因。但对真核细胞来说,从基因组DNA文库获得的基因与从cDNA文库获得的不同。DNA文库所含的是带有内含子和外显子的基因组基因,而从cDNA文库中获得的是已经过剪接、去除了内含子的cDNA展开
我想使用ActiveMotif公司的试剂盒用生物素标记探针来筛选CDNA文库,具体原理图如下,只是我没有用过这个公司的产品,不知道好不好用,有没有XDJM用过这种方法或是这个公司的产品啊?请给我一些建议,谢谢大家了

能提出问题引发大家的思考和讨论,加分鼓励!
cDNA文库的用途 123
sjg百合2021-08-07
cDNA文库是以特定的组织或细胞mRNA为模板,逆转录形成的互补DNA(cDNA)与适当的载体(常用噬菌体或质粒载体)连接后转化受体菌形成重组DNA克隆群,这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织或细胞的cDNA文库。cDNA文库特异地反映某种组织或细胞中,在特定发育阶段表达的蛋白质的编码基因,因此cDNA文库具有组织或细胞特异性。
cDNA文库显然比基因组DNA文库小得多,能够比较容易从中筛选克隆得到细胞特异表达的基因。但对真核细胞来说,从基因组DNA文库获得的基因与从cDNA文库获得的不同,基因组DNA文库所含的是带有内含子和外显子的基因组基因,而从cDNA文库中获得的是已经过剪接、去除了内含子的cDNA。
真核生物基因组DNA十分庞大,其复杂程度是蛋白质和mRNA的100倍左右,而且含有大量的重复序列. 采用电泳分离和杂交的方法,都难以直接分离到目的基因.这是从染色体DNA为出发材料直接克隆目的基因的一个主要困难。
高等生物一般具有10^5种左右不同的基因,但在一定时间阶段的单个细胞或个体中,都仅有15%左右的基因得以表达,产生约15000种不同的mRNA分子.可见,由mRNA出发的cDNA克隆,其复杂程度要比直接从基因组克隆简单得多。
cDNA文库在研究具体某类特定细胞中基因组的表达状态及表达基因的功能鉴定方便具有特殊的优势,从而使它在个体发育、细胞分化、细胞周期调控、细胞衰老和死亡调控等生命现象的研究中具有更为广泛的应用价值,是研究工作中最常使用到的基因文库。
第一次建CDNA文库,用的是Clontech的PCRcDNAsynthesisKit,通过LDPCR获得cDNA二链后割胶分级回收连接PMD-18T载体,最后PCR检测,得到的片段大部分集中在500bp左右,只有少量的大于1kb,请各位大虾帮忙看看是不是因为T载体不适合做cDNA文库还是因为质粒cDNA文库的容量问题,还是其它什么原因?多多赐教,不胜感激!
RNA干扰抗乙肝病毒123
quiller2021-08-05
原本不打算贴出这个贴子,主要是因为这方面还不太成熟。不知道有没有人了解更多一些,只想做个引子!

RNA干扰(RNAi)与乙肝.txt(10.4k)
酵母单杂交pabai可以不用线性化载体
酵母单杂交技术最早是1993年由Li等从酵母双杂交技术发展而来,通过对报告基因的表型检测,分析DNA与蛋白之间的相互作用,以研究真核细胞内的基因表达调控。由于酵母单杂交方法检测特定转录因子与顺式作用元件专一性相互作用的敏感性和可靠性,现已被广泛用于克隆细胞中含量微弱的、用生化手段难以纯化的特定转录因子。
酵母单杂交(Yeast one-hybrid)是根据DNA结合蛋白(即转录因子)与DNA顺式作用元件结合调控报道基因表达的原理,克隆与靶元件特异结合的转录因子基因(cDNA)的有效方法。其理论基础是:许多真核生物的转录激活子由物理和功能上独立的DNA结合区(DNA-binding domain BD)和转录激活区(Activation domain AD)组成,因此可构建各种基因与AD的融合表达载体,在酵母中表达为融合蛋白时,根据报道基因的表达情况,便能筛选出与靶元件有特异结合区域的蛋白。理论上,在单杂交检测中,任何靶元件都可被用于筛选一种与之有特异结合区域的蛋白。