又出新问题……WB转膜后marker不见了……
2017-05-30
问题描述：
最近做的三次WB，用的试剂都一样，条件都一样，转膜是300mA40min，分子量是40kd和45kd。三次结果如下：第一次，转膜后Marker正常，最后显影条带正常。第二次，转膜后marker不见了，最后显影条带如图，一张膜呈现一头大一头小的条带，另一张膜结果正常。第三次，转膜后还是没有marker，显影后条带上什么都没有求帮忙分析同样的条件同一瓶母液，为什么会这个样子呢……心里急得很……
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粗糙外科医生
用户
第三张没有的话肯定是反了，至于第二个感觉像是抗体没有孵育均匀
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喵呜57
用户dxy_tekrnub6第三张没有的话肯定是反了，至于第二个感觉像是抗体没有孵育均匀没有放反啊最近做了三次都是这样刚才转了20min354055kd的Marker条带也都不见了，但是70kd的条带还在
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粗糙外科医生
用户喵呜33没有放反啊最近做了三次都是这样刚才转了20min354055kd的Marker条带也都不见了，但是70kd的条带还在换一只新的marker吧，用久了就是没有才买的亮，话说你加的多少体积来着？
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喵呜57
用户dxy_tekrnub6换一只新的Marker吧，用久了就是没有才买的亮，话说你加的多少体积来着？marker是这个学期刚开的一支…加的5μl…
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粗糙外科医生
用户喵呜33Marker是这个学期刚开的一支…加的5μl…新的我加3ul都很亮了，电转液配方是啥？用的什么牌子的膜？
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昆仑散人
用户展开引用喵呜33最近做的三次WB，用的试剂都一样，条件都一样，转膜是300mA40min，分子量是40kd和45kd。三次结果如下：第一次，转膜后Marker正常，最后显影条带正常。第二次，转膜后marker不见了，最后显影条带如图，一张膜呈现一头大一头小的条带，另一张膜结果正常。第三次，转膜后还是没有marker，显影后条带上什么都没有求帮忙分析同样的条件同一瓶母液，为什么会这个样子呢……心里急得很……......加样量不一致
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喵呜57
用户dxy_tekrnub6新的我加3ul都很亮了，电转液配方是啥？用的什么牌子的膜？配方：10X转移缓冲液甘氨酸29.8gTris(mw121.13)58gSDS3.7g(加一定的水溶解后，测PH＞8.0，最后定容至1L)使用的时候10X转移缓冲液100ml加水定容至800ml后，加200ml甲醇。膜是Millipore的pvdf膜0.45μm的
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喵呜57
用户昆仑散人加样量不一致都是做过蛋白定量的
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粗糙外科医生
用户展开引用喵呜33配方：10X转移缓冲液甘氨酸29.8gTris(mw121.13)58gSDS3.7g(加一定的水溶解后，测PH＞8.0，最后定容至1L)使用的时候10X转移缓冲液100ml加水定容至800ml后，加200ml甲醇。膜是Millipore的pvdf膜0.45μm的......电转液最好现配现用吧，绕后不回收，不过我以前用10层感觉也没遇到这个问题
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粗糙外科医生
用户dxy_tekrnub6电转液最好现配现用吧，绕后不回收，不过我以前用10层感觉也没遇到这个问题不加sds效果感觉好些
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昆仑散人
用户喵呜33都是做过蛋白定量的你用的枪是否准确，上枪头是否不够标准，排液是否有残留。
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oyeme11
用户我也碰到了跟你差不多的问题，一起转的42kd的actin挺好的，我21kd的目的蛋白什么都没有，maker颜色膜上没有，胶上也没有，不知道去哪儿了，请问你解决了吗，怎么解决的，谢谢！
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pkshanliwa
用户确定转膜的操作没问题吗？最好让别的同学和你一起做
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喵呜57
用户oyeme11我也碰到了跟你差不多的问题，一起转的42kd的actin挺好的，我21kd的目的蛋白什么都没有，maker颜色膜上没有，胶上也没有，不知道去哪儿了，请问你解决了吗，怎么解决的，谢谢！我的问题应该是滤纸比膜和胶大太多了……
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大脸龙猫
用户oyeme11我也碰到了跟你差不多的问题，一起转的42kd的actin挺好的，我21kd的目的蛋白什么都没有，maker颜色膜上没有，胶上也没有，不知道去哪儿了，请问你解决了吗，请问楼主你的问题解决了么？我也遇到了这样的问题，膜上隐约可见红色条带的Marker，但是其他的Marker都不知道去哪里了，胶上没有，PVDF膜上也没有,膜用丽春红染色也是什么也没有，求指导。
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biotech_li
用户大脸龙猫请问楼主你的问题解决了么？我也遇到了这样的问题，膜上隐约可见红色条带的Marker，但是其他的Marker都不知道去哪里了，胶上没有，PVDF膜上也没有,膜用丽春红染色也是什么也没有，求指导。染胶看一下，是不是Marker用的时间长了，掉色了？
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