细胞划痕实验
一、实验原理
细胞划痕（
woundhealing
）法是简捷测定细胞迁移运动和修复能力的方法，类
似体外伤口愈合模型，
在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上，
用微量枪头
或其它硬物在细胞生长的中央区域划线，
去除中央部分的细胞，
然后继续培养细
胞至实验设定的时间，
取出细胞培养板，
观察周边细胞的生长迁移能力，
实验通
常需设定正常对照组和实验组，
实验组是加了某种处理因素或药物、
外源性基因
等的组别，
通过不同分组之间的细胞对于划痕区修复能力的不同，
可以判断各组
细胞的迁移与修复能力。
二、实验步骤
1
、
所有要灭菌，直尺和
marker
笔在操作前紫外照射
30min
。
2
、
1
）先用
marker
笔在
6
孔板背后，用直尺比着，大约每隔
0.5-1cm
一道，横
穿过孔，每孔至少穿过
5
条线。
2
）在空中加入约
5×10
5
个细胞（具体数量因细胞不同而不同，掌握为过夜
能铺满）
，
37
℃培养箱培养。
3
）第二天用
10µl
枪头比着直尺，与标记线垂直的方向划两条平行线，枪头
要垂直，不能倾斜。
4
）用
PBS
洗细胞
3
次，去除划下的细胞，加入无血清培养基。
5
）放入
37
℃
5%CO
2
培养箱，按
0
、
6
、
12
、
24h
倒置显微镜观察，拍照。
三、注意事项
1
、在用
PBS
缓冲液冲洗时，注意贴壁慢慢加入，以免冲散单层贴壁细胞，影响
实验拍照结果。
2
、一般做划痕实验，都是无血清或者低血清（
2%
）
，否则细胞增殖就不能忽略。
（也可用丝裂酶处理一小时）
3
、按照
6
孔板背后画线的垂直方向划痕，可以形成若干交叉点，作为固定的检
测点，以解决了前后观察时位置不固定的问题。
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发布于 ： 2021-08-07
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