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MCLAB/Cas9 Nuclease 3NLS/CAS9N3-100/250 pmol, 50 µl
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MCLAB/Cas9 Nuclease 3NLS/CAS9N3-100/250 pmol, 50 µl
品牌 / 
MCLab
货号 / 
CAS9N3-100
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Cas9Nuclease,Streptococcuspyogenes,isanRNA-guidedendonucleasethatcatalyzessite-specificcleavageofdoublestrandedDNA.

Introduction:
Cas9(CRISPRassociatedprotein9)isaRNA-guidedDNAendonucleaseenzymeassociatedwiththeCRISPR(ClusteredRegularlyInterspacedShortPalindromicRepeats)adaptiveimmunitysystemin Streptococcuspyogenes.TheCRISPR/Cas9systemisthelatestRNA-guided,endonucleasetoolingenomeeditingwhichallowsforveryspecificgenomicdisruptionandreplacement.Guidedbyatarget-specific,singleguideRNA(sgRNA),theCas9nucleaseproteinservestounwindthegenomicDNAduplexandcleavebothstrandsuponrecognitionofthetargetsequencebythesgRNA,resultingindouble-strandedbreaks.Theresultingdouble-strandedbreakgetsrepairedbythenon-homologousendjoining(NHEJ)pathway,leADIngtoadisruptionintheopenreadingframeofthetargetedgene.

CRISPR-Cas9 System

Description:
RecombinantCas9-NLScomprisestheentireCas9proteinsequence(1368aminoacids)fusedtoaproprietarynuclearlocalizationsequence(NLS)anda6XHistagattheC-terminus.Theproteinhasanapparentmolecularweightof162kDaonSDS-PAGE.

Cas9variantsforvariousgenomemanipulationsareavailablein8forms:

  • Cas9(WT)
  • Cas9withnuclearlocalizationsignal(NLS)
  • Cas9with3NLS(onC-terminus)forbetternuclearlocalization
  • NickaseCas9(D10A)fornicking
  • dCas9(D10A/H840A)forsimplebinding
  • Hi-Fi1Cas93NLS(K848A,K1003A,R1060A)andHi-Fi2Cas93NLS(N497A,R661A,Q695A,Q926A)forreducinggenome-wideoff-targeteffects
  • dCas9-biotinylatedforimmunoprecipitation

Features:
LowendotoxinLevel
HighBIOLOGicalactivity
Consistentfromlottolot

Application:
Genomeediting

Source:
Cas9genefromStreptococcuspyogenesexpressedinE.coli

Purity:
Greaterthan97%asdeterminedbySDS-PAGE.

Activity:
96%ofPCRproductdigestionafter30minutesat37°C.Thereactionisperformedasfollow;20µlreaction,including100nMCas9protein,200nMtracrRNA,200nMEMX1-specificcrRNA,200ngEMX1-specificPCRproductand1xdigestionbuffer(20mMHEPES,100mMNaCland5mMMgCl2,pH6.5).Incubate30minutesat37°C,andstopreactionwith1µlRNAseA(1mg/ml).

Storagecondition:-20°C

10XCas9ReactionBuffer:
200mMHEPES,50mMMgCl2,1MNaCl,1mMEDTA,pH6.5

StorageBuffer:
50mMTris-HCl
50MKCl
1mMDTT
1mMEDTA
50%Glycerol
pH7.5

ExperimentalData
Cas9-IMAGE-001.pngCas9-IMAGE-002.png

References

  • JinekM,ChylinskiK,FonfaraI,HauerM,DoudnaJA,CharpentierE.(2012)Aprogrammabledual-RNA-guidedDNAendonucleaseinadaptivebacterialimmunity.Science.Aug17;337(6096):816-21.
  • MaliP,YangL,EsveltKM,AachJ,GuellM,DiCarloJE,NorvilleJE,ChurchGM.(2013)RNA-guidedhumangenomeengineeringviaCas9.Science.Feb15;339(6121):823-6. 
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RNAi在哺乳动物细胞中通常用于阻断特定基因的表达从而研究基因的功能。成功的进行RNAi
的问题在于使siRNA导入细胞,
将sirna导入细胞内常见的方法是
将靶向特定基因的大约21碱基长短的双链 siRNAs small interfering RNAs。
或者是45 50 mer的发夹结构 RNA 转染到细胞。
此外通过质粒表达siRNAs 同样可以抑制特定基因的表达。
求助:
编码线虫的氨基酰tRNA合成酶是否和编码大鼠的氨基酰tRNA合成酶的基因相同?
rRNA(核糖体RNA)是核糖体的组成成分,它和蛋白质共同组成了核糖体。
tRNA(转运RNA)可以转运氨基酸。
mRNA(信使RNA)是由细胞核内的DNA转录来的,相当于蛋白质的设计图纸。

翻译的过程:核糖体附着在mRNA上,然后tRNA搬运氨基酸,运往到核糖体上,从而拼合成蛋白质。

本人,大学本科生小白,想问一下各位老师,sirna设计出来之后,用snapgene吧sirna与靶mrna进行序列对比为什么没有同源序列,还有如果我想检验sirna是不是脱靶,是不是可以将sirna序列与相关影响的非靶基因序列对比确定哪。

最近测序做了TRNAfragment,但是在验证测序结果上遇到了问题,TRF大小在30左右,按照mirna设计颈环引物跑PCR,结果测序为0的数据也能跑出来,后来师兄分析可能把成熟的TRNA也检测出来了,不知道有哪位大神可以指导下TRF的引物应该如何设计啊?

各位大神,想求解下关于siRNA和shRNA的区别。了解到shRNA是构建到载体转染细胞,也可以构建好了包慢病毒。但是不知道siRNA设计合成后,可不可以包到慢病毒上?如果可以的话,那么这两个都可以包到慢病毒上,效果有什么区别?
你好,很高兴回答你的问题。
探针就是DNA弹针。用于检测特定的DNA片段。
基因探针,即核酸探针,是一段带有检测标记,且顺序已知的,与目的基因互补的核酸序列(DNA或RNA)。基因探针通过分子杂交与目的基因结合,产生杂交信号,能从浩翰的基因组中把目的基因显示出来。根据杂交原理,作为探针的核酸序列至少必须具备以下两个条件:①应是单链,若为双链,必须先行变性处理。②应带有容易被检测的标记。它可以包括整个基因,也可以仅仅是基因的一部分;可以是DNA本身,也可以是由之转录而来的RNA。
进行分子突变需要大量的探针拷贝,后者一般是通过分子克隆(molecular cloning)获得的。克隆是指用无性繁殖方法获得同一个体、细胞或分子的大量复制品。当制备基因组DNA探针进,应先制备基因组文库,即把基因组DNA打断,或用限制性酶作不完全水解,得到许多大小不等的随机片段,将这些片段体外重组到运载体(噬菌体、质粒等)中去,再将后者转染适当的宿主细胞如大肠肝菌,这时在固体培养基上可以得到许多携带有不同DNA片段的克隆噬菌斑,通过原位杂交,从中可筛出含有目的基因片段的克隆,然后通过细胞扩增,制备出大量的探针。
为了制备cDNA 探针,首先需分离纯化相应mRNA,这从含有大量mRNA的组织、细胞中比较容易做到,如从造血细胞中制备α或β珠蛋白mRNA。有了mRNA作模板后,在逆转录酶的作用下,就可以合成与之互补的DNA(即cDNA),cDNA与待测基因的编码区有完全相同的碱基顺序,但内含子已在加工过程中切除。
寡核苷酸探针是人工合成的,与已知基因DNA互补的,长度可从十几到几十个核苷酸的片段。如仅知蛋白质的氨基酸顺序量,也可以按氨基酸的密码推导出核苷酸序列,并用化学方法合成。

请问大神,siRNA一定是瞬转;如果瞬转,比如只能维持个2-3天,那么如果我想观察药物A作用于siRNA干预的细胞的效果,但是这个药物A需要作用10天,那么我间隔2-3天加一点SIRNA,这样可以吗,谢谢大神了

一:结构特点:①含有稀有碱基较多,达核苷酸总量的5%-20%。②不同的tRNA尽管核苷酸组分和排列顺序各异,但其3’端都含有CCA序列,是所有tRNA接受氨基酸的特定位置。③所有的tRNA分子都折叠成紧密的三叶草二级结构和L型立体构象,结构较稳定,半衰期均在24小时以上。
  二:主要功能:①运输功能②在逆转录作用中作为合成互补链DNA链的引物。③在细菌细胞壁、叶绿素、脂多糖和氨酰磷脂酰甘油的合成中都与某些tRNA的参与有关。
tRNA中是有氢键的。
tRNA不是一条直的单链,而是弯曲的,呈现一个三叶草的形状。在弯曲的部位,tRNA自己的碱基跟自己的碱基互补配对连起来,碱基对中存在氢键。
其他的RNA一般为单链不存在氢链,但双链的由于碱基互补配对存在氢键。

各种系统都可以使用,AlleleID7.0没搞的定

本软件只作为学习研究之用,研究完后马上删除,支持正版。。。




感谢ddd198599及其他司机的信息及启发

http://www.stemcell8.cn/thread-20673-1-1.html



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但tRNA上不只有反密码子。
tRNA也是一段长的核糖核苷酸链,而且具有局部双链结构,反密码子位于一端。
所以它和mRNA、rRNA一样都含有四种含氮碱基。