Cas9Nuclease,Streptococcuspyogenes,isanRNA-guidedendonucleasethatcatalyzessite-specificcleavageofdoublestrandedDNA.
Introduction:
Description: Cas9variantsforvariousgenomemanipulationsareavailablein8forms:
Features: Application: Source: Purity: Activity: Storagecondition:-20°C 10XCas9ReactionBuffer: StorageBuffer: ExperimentalData References
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各种系统都可以使用，AlleleID7.0没搞的定
本软件只作为学习研究之用，研究完后马上删除，支持正版。。。
感谢ddd198599及其他司机的信息及启发
http://www.stemcell8.cn/thread-20673-1-1.html
AlleleID6破解版.rar(44952.85k)
补充，还有说常见的有丝氨酸水解酶家族，有文献提及赖氨酸。请问这些是如何选择的
siRNA (Small interfering RNA)，是一种小RNA分子（~21-25核苷酸），由Dicer（RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶）加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员，激发与之互补的目标mRNA的沉默。
这方面的新手还在看文献看帖学习阶段有个疑惑看到有的文章siRNA也会用到载体比如说pSUPERxx
Thecellsweretransientlytransfectedwith4mg(1:1)pSUPER.retroandpSilencer2.1-U6hygrovectors(vectorgroup),4mgHIF-1asiRNA-expressingplasmid(HIF-1asiRNAgroup),4mgVEGFsiRNA-expressing
plasmid(VEGFsiRNAgroup),or4mg(1:1)HIF-1asiRNA-andVEGFsiRNA-expressingplasmids(co-transfectiongroup)bytheLipofectamine2000(LF2K;Invitrogen,Carlsbad,CA)methodaccordingtothemanufacturer’sinstructions
但是我看各位前辈的说法
siRNA是化学合成的加发卡结构后shRNA才可以加载体构建质粒？然后可能在进一步构建病毒
为什么文章把siRNA插入到载体里面呢？我没理解错吧？它这种表述是不是有问题呢？
然后是构建了质粒载体之后可以再包装成病毒吗？那质粒载体可以直接用吗？
可能我表述的也不太清楚。。。希望有前辈简单回答！
tRNA的功能：主要是携带氨基酸进入核糖体，在mRNA指导下合成蛋白质。即以mRNA为模板，将其中具有密码意义的核苷酸顺序翻译成蛋白质中的氨基酸顺序（见蛋白质的生物合成、核糖体）。tRNA与mRNA是通过反密码子与密码子相互作用而发生关系的。在肽链生成过程中，第一个进入核糖体与mRNA起始密码子结合的tRNA叫起始tRNA，其余tRNA参与肽链延伸，称为延伸tRNA，按照mRNA上密码的排列，携带特定氨基酸的tRNA依次进入核糖体。形成肽链后，tRNA即从核糖体释放出来。整个过程叫做tRNA循环（图3）。tRNA靠反密码子与mRNA识别，但并非一种反密码子只能识别一种密码子。例如反密码子CIG（I是次黄嘌呤核苷酸）能识别三种密码子。一般反密码子中的稀有核苷酸因配对不严格而能识别多种密码子，这种现象在生物学中称为“摆动性”tRNA是通过分子中3′端的CCA携带氨基酸的。氨基酸连接在腺苷酸的2′或3′OH基上，携带了氨基酸的tRNA叫氨酰tRNA，例如，携带甘氨酸的tRNA叫甘氨酰tRNA。氨基酸与tRNA的结合由氨酰tRNA合成酶催化，分二步进行：①氨基酸+ATP→氨酰-AMP+焦磷酸；②氨酰-AMP+tRNA→氨酰-tRNA+AMP。与一种氨基酸对应的至少有一种tRNA和一种氨酰-tRNA合成酶（见蛋白质生物合成）。tRNA还具有其他一些特异功能，例如，在没有核糖体或其他核酸分子参与下，携带氨基酸转移至专一的受体分子，以合成细胞膜或细胞壁组分；作为反转录酶引物参与DNA合成；作为某些酶的抑制剂等。有的氨酰-tRNA还能调节氨基酸的生物合成。在许多植物病毒RNA分子中发现有类似于tRNA的三叶草结构，有的也能接受氨基酸，其功能不详。向左转|向右转
没法移动，也没有办法看信号强度啊？
编码线虫的氨基酰tRNA合成酶是否和编码大鼠的氨基酰tRNA合成酶的基因相同？
大家好，近期在用lipo2000做悬浮细胞HL-60的siRNA转染，siRNA是由公司合成的三个siRNA，但是敲除效率很低，并且每次qPCR后做出来的结果都不一样：有时是第一个siRNA敲除作用好点，但有时是第二个或第三个siRNA效果好。由于结果不稳，并且细胞不好转我就将细胞换成了A549，但是换成了贴壁细胞后发现每次转染后进行qPCR检测时结果还是不稳，另外，我还设置了不同siRNA的组合，有时结果显示siRNA1+siRNA3效果好，但有时显示siRNA1+2+3效果好。光做这个siRNA转染已经几个月了，到现在都没有确定具体哪个片段起作用或效果最好，也没有一个稳定的趋势。请问造成这种敲除效率不稳定的原因到底是为什么？急切等待回复，谢谢！
探针就是DNA弹针。用于检测特定的DNA片段。
基因探针，即核酸探针，是一段带有检测标记，且顺序已知的，与目的基因互补的核酸序列(DNA或RNA)。基因探针通过分子杂交与目的基因结合，产生杂交信号，能从浩翰的基因组中把目的基因显示出来。根据杂交原理，作为探针的核酸序列至少必须具备以下两个条件：①应是单链，若为双链，必须先行变性处理。②应带有容易被检测的标记。它可以包括整个基因，也可以仅仅是基因的一部分；可以是DNA本身，也可以是由之转录而来的RNA。
进行分子突变需要大量的探针拷贝，后者一般是通过分子克隆（molecular cloning）获得的。克隆是指用无性繁殖方法获得同一个体、细胞或分子的大量复制品。当制备基因组DNA探针进，应先制备基因组文库，即把基因组DNA打断，或用限制性酶作不完全水解，得到许多大小不等的随机片段，将这些片段体外重组到运载体（噬菌体、质粒等）中去，再将后者转染适当的宿主细胞如大肠肝菌，这时在固体培养基上可以得到许多携带有不同DNA片段的克隆噬菌斑，通过原位杂交，从中可筛出含有目的基因片段的克隆，然后通过细胞扩增，制备出大量的探针。
为了制备cDNA 探针，首先需分离纯化相应mRNA，这从含有大量mRNA的组织、细胞中比较容易做到，如从造血细胞中制备α或β珠蛋白mRNA。有了mRNA作模板后，在逆转录酶的作用下，就可以合成与之互补的DNA(即cDNA)，cDNA与待测基因的编码区有完全相同的碱基顺序，但内含子已在加工过程中切除。
寡核苷酸探针是人工合成的，与已知基因DNA互补的，长度可从十几到几十个核苷酸的片段。如仅知蛋白质的氨基酸顺序量，也可以按氨基酸的密码推导出核苷酸序列，并用化学方法合成。
本人，大学本科生小白，想问一下各位老师，sirna设计出来之后，用snapgene吧sirna与靶mrna进行序列对比为什么没有同源序列，还有如果我想检验sirna是不是脱靶，是不是可以将sirna序列与相关影响的非靶基因序列对比确定哪。
