Description:
Source: SpecificActivity: 2000U/µg RecommendedStorageCondition: -20°C ExperimentalData: Figure1. PerformanceofMCLAB’sT4EndonucleaseVIIanalyzedbycapillaryelectrophoresis.(a)Negativecontrolsampleanalysis,10pmolofFAMlabeled28meroligonucleotidesubstrate.(b)40UofMCLAB’sT4EndonucleaseVIIwasabletofullyresolve10pmolofFAMlabeled28meroligonucleotidesubstratewitha4-wayHollidayjunctionstructure(30minutesat37°Cin50mMTris-HCl,pH8.0,10mMMgCl2,10mM2-MEand0.1μg/μlBSA). For4-wayjunctionsubstrate: 1. Preparethefollowingreaction:
2. Mixwellandincubatethereaction@37°Cfor30min. 3. Use1µlreactiontoanalyzethecleavedfragmentsonCapillaryelectrophoresis.
Forsinglebasemismatchsubstrate: 1. Useabout200-400ngDNAfragmentthatcontainssinglebasemismatchforeachreaction:
2. Mixwellandincubatethereaction@37°Cfor30min. 3. Runa2%agarosegelandcheckforcleavedbands.
Table.ComparisonofT4EndonucleaseVIIandT7EndonucleaseI
*SeeFigure2forT4endonucleaseVIIandT7endonucleaseIactivitycomparisonresult. Suppliedin: SuppliedWith: Reference: |
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tRNA不是一条直的单链，而是弯曲的，呈现一个三叶草的形状。在弯曲的部位，tRNA自己的碱基跟自己的碱基互补配对连起来，碱基对中存在氢键。
其他的RNA一般为单链不存在氢链，但双链的由于碱基互补配对存在氢键。
探针就是DNA弹针。用于检测特定的DNA片段。
基因探针，即核酸探针，是一段带有检测标记，且顺序已知的，与目的基因互补的核酸序列(DNA或RNA)。基因探针通过分子杂交与目的基因结合，产生杂交信号，能从浩翰的基因组中把目的基因显示出来。根据杂交原理，作为探针的核酸序列至少必须具备以下两个条件：①应是单链，若为双链，必须先行变性处理。②应带有容易被检测的标记。它可以包括整个基因，也可以仅仅是基因的一部分；可以是DNA本身，也可以是由之转录而来的RNA。
进行分子突变需要大量的探针拷贝，后者一般是通过分子克隆（molecular cloning）获得的。克隆是指用无性繁殖方法获得同一个体、细胞或分子的大量复制品。当制备基因组DNA探针进，应先制备基因组文库，即把基因组DNA打断，或用限制性酶作不完全水解，得到许多大小不等的随机片段，将这些片段体外重组到运载体（噬菌体、质粒等）中去，再将后者转染适当的宿主细胞如大肠肝菌，这时在固体培养基上可以得到许多携带有不同DNA片段的克隆噬菌斑，通过原位杂交，从中可筛出含有目的基因片段的克隆，然后通过细胞扩增，制备出大量的探针。
为了制备cDNA 探针，首先需分离纯化相应mRNA，这从含有大量mRNA的组织、细胞中比较容易做到，如从造血细胞中制备α或β珠蛋白mRNA。有了mRNA作模板后，在逆转录酶的作用下，就可以合成与之互补的DNA(即cDNA)，cDNA与待测基因的编码区有完全相同的碱基顺序，但内含子已在加工过程中切除。
寡核苷酸探针是人工合成的，与已知基因DNA互补的，长度可从十几到几十个核苷酸的片段。如仅知蛋白质的氨基酸顺序量，也可以按氨基酸的密码推导出核苷酸序列，并用化学方法合成。
二：主要功能：①运输功能②在逆转录作用中作为合成互补链DNA链的引物。③在细菌细胞壁、叶绿素、脂多糖和氨酰磷脂酰甘油的合成中都与某些tRNA的参与有关。
tRNA的二级结构：单链内某些区域靠氢键配对形成局部双链，并折叠形成其二级结构-三叶草型结构
三级结构是在二级结构基础上进一步折叠形成，呈“倒L”型。
的问题在于使siRNA导入细胞，
将sirna导入细胞内常见的方法是
将靶向特定基因的大约21碱基长短的双链 siRNAs small interfering RNAs。
或者是45 50 mer的发夹结构 RNA 转染到细胞。
此外通过质粒表达siRNAs 同样可以抑制特定基因的表达。
各种系统都可以使用，AlleleID7.0没搞的定
本软件只作为学习研究之用，研究完后马上删除，支持正版。。。
感谢ddd198599及其他司机的信息及启发
http://www.stemcell8.cn/thread-20673-1-1.html
AlleleID6破解版.rar(44952.85k)
我是这样进行预测的：在“SearchMode:”中选择“rRNAscanonly:”，在“sorce”中选择“mito/chloroplast”,粘贴序列，运行程序。得到了21个tRNA，而鱼中应该是22个tRNA，我觉得很奇怪，在“SearchMode:”和“rRNAscanonly:”中进行其它的设置，都不能得到22个tRNA.
我看的一篇文献“CompletemitochondrialDNAsequenceoftheJapanese
flyingfishCypselurushiraii”中也是说22个tRNA,但是我把文章提交的序列（Genbank号为AB182653.）拿到网上提交，只有21个tRNA，我觉得很奇怪。
不知道是怎么回事？请高手指点，那个软件好像是比较权威的。
