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Xpressbio
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2017-06-12
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哪位专家可以帮我一下,能不能给我一份详细些的关于构建基因组文库的基因组DNA的提取流程及注意事项?谢谢大家了!
另外,我准备买clonetech公司的基因组文库构建试剂盒,大家认为怎么样?有什么好的建议?
求助大神:有人提过柔嫩**尔球虫的DNA吗?要求是能构建出文库的,一般文献记载的都是跑PCR就可以了,质量不够。我需要能构建文库的。
不要RNA,不要CDNA文库,就要DNA文库!
好人一生平安,大神帮帮忙!
各位战友:

样本:从沸水煮过的中药上清
目的:提取DNA并进行PCR检测

问题:
(1)这样的样本中DNA应该会大部分降解,仅有痕量保留,能否推荐一些痕量DNA提取或检测的试剂盒
(2)Qiagen的法医级别试剂盒有人用过吗?效果如何?
(3)这样的实验战友们有成功的案例吗?

非常感谢!
我正在准备制备细胞样品用于检测凋亡的DNAladder,不知道DNAladder的DNA提取与普通的DNA提取有无不同之处,可否用tripure或者一般的DNA提取试剂盒提取细胞的DNA用于凋亡的DNAladder检测吗?也就是可不可以不用专用的用于凋亡检测的DNAladder提取试剂盒?
1、DNA提取问题:现在核算提取试剂盒大部分都是吸附柱法,相信你应该不会操作错误,如果提取之后进行核酸定量结果很低的话,试着再最后一步溶解核算的时候把水稍微加温(37℃就可以了),溶解时间稍微长一些,然后再离心的时候采用分次离心,比如开始你用200ul溶解的话,你可以分两次用100ul水溶解离心,这样可以提高DNA的产率.
2、电泳问题:如果你核酸定量浓度不低的话就考虑电泳问题,电泳的时候加上1kb的marker,如果marker跑不出来说明你凝胶有问题,一般只要marker跑出来了,DNA浓度又比较高,而没有条带这样的现象很少见,DNA提取比较简单而且相当稳定,本人当时做甲基化提取的DNA有一次拿出来电泳忘了放回冰箱了,结果大夏天的在外面放了一天,心怀忐忑的进行了一次电泳,结果条带依然给力,一点都没有降解.
构建部分基因文库为什么要用CDNa而不用dna
基因组文库用dna还是rna
天根的DNA提取试剂盒中,组织样品要求先将组织制备成单细胞悬液,再进行下一步操作。http://www.tiangen.com/?productShow/t1/1/id/26.html请问大家用过这个试剂盒的是怎么操作的?
产品介绍:
普通的手提或者试剂盒提取的土壤基因组DNA由于常常残留有PCR的强烈抑制物如腐殖酸、棕黄酸等杂质造成实验失败,此外,由于采用了剧烈的玻璃珠击打来破裂菌体,常常造成DNA剪切和降解。本公司经过长期研发开发出了具有自主知识产权的土壤基因组DNA,通过专利配方的腐殖酸和棕黄酸去除试剂配合特殊处理的纯化柱,可以最大程度的去除这些杂质,同时加上多次柱漂洗,确保得到的DNA具有极高纯度,此外独特的抽提和裂解体系可以迅速裂解细胞(壁)和灭活细胞内核酸酶,不需要借助玻璃珠破壁,有效保证了基因组DNA的完整性。
产品特点:
1.本公司独有的专利配方和纯化柱能有效去除腐殖酸等杂质。
2.不需要借助玻璃珠破壁,有效保证了基因组DNA的完整性,长度可达30kb -50kb,可直接用于PCR,Southern-blot和各种酶切反应。
3.兼容性强,适用于各种不同的土壤包括淤泥等提取困难的土壤。
4.多步骤去除各种杂质和抑制物,保证了极高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.7~1.9。
5.不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
6.快速,简捷,单个样品操作一般可在60分钟内完成。
你找下,杭州昊鑫生物
你说的是哪款试剂盒呢?根据样本不同,可以选择不同的试剂盒的。比如抽血液样本的QIAamp DNA Blood Mini Kit 50次目录价为1630元。如果要购买应该会给折扣。
我用的是华美生物工程公司全血基因组DNA纯化系统试剂盒,说明书上说利用A260光吸测定浓度对该方法制备的基因组DNA是不适用的,产量可达1ug/20ul全血,5-10ul上清液可以直接用于PCR扩增。
我分别用3ul、5ul、8ul都试过了,没有任何条带,用别人别的方法提好的DNA做,却能出现结果,不知道是自己提取的DNA浓度不够,还是根本没有提取出来。
不知道谁用过,或者有更好的全血提取NDA的试剂盒推荐呢?
本人刚刚开始做PCR,谢谢各位高手!
QPCR常见问题123
富家子弟2021-07-30

各位好,希望能得到你的建议与帮助!

从人的冰冻组织提取DNA,Nanodrop定量纯度a260/a280在1.86左右,qubit2.0定量浓度达到了100ng/ul以上,按照Thermo的建库试剂盒操作,建库完成后,利用qPCR进行文库定量,有几个文库定量值只有20pM,问题在哪呢?

我试着更换Barcode重新建库,部分文库定量居然达到了600多pM,问了技术支持,他们也没有相关经验,请问群里的大神可否遇到过?

建库试剂盒是在保质期内IONAmpliseqlibrarykit2.0,引物是2013年自己定制的panel,一直储藏在-20℃冰箱,Barcode超出保质期半年。

全血基因组DNA提取试剂盒(离心柱型)作用原来具体是这样的:独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶,然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱.  试剂盒特点:  不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤.  快速,简捷,单个样品操作一般可在20分钟内完成.  多次柱漂洗确保高纯度,典型的产量200μl全血可提取出3-6μg,纯度达1.1.9,长度可达30Kb-50kb,可直接用于PCR,Southern-blot和各种酶切反应.  从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方,裂解快速完全,客户可根据需要选择购买.  说明书中针对实验过程出现的疑难做出了详细的解答,帮助你解决实验过程中遇到的问题(如标本中含有血凝块、红细胞裂解不完全、DNA产量低、DNA下游酶切不能切开或者酶切不完全、DNA长度小于15kb、A260吸光值异常偏高、洗脱下来的DNA溶液还带有轻微的颜色等).