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CRISPR导致基因突变”论战持续升温

作者：来源：科技日报

近日，《自然·方法》发表文章《体内CRISPR—Cas9编辑引发的不可预测基因突变》，称基因编辑工具CRISPR可能引起基因组内大量基因突变。全球很多实验室正要将CRISPR—Cas9用于人类疾病的相关基因治疗研究，有的甚至已开始用于临床试验，这时候说它可能造成大规模基因突变，着实让人惊讶。

然而剧情很快反转。几天前，两家基因编辑公司Editas药物和Intellia制药的科学家们分别写信给《自然》杂志编辑部，认为这一论文的结论完全错误，要求将该论文撤稿，并从科技文献中删除。

论文只是“读者来函”，暂无撤稿决定

对于这篇引起巨大争议的稿件，《自然》科研新闻发言人（以下称《自然》）在接受科技日报记者采访时表示，这只是一篇读者来函。读者来函栏目有时会刊登科研共同体感兴趣的涉及科研方法的短篇文章，其中可能包含新的研究数据。这篇文章在发表之前已经经过同行评审，至于撤稿，“眼下尚无法做进一步的评论”。

有业内学者告诉科技日报记者，读者来函的宗旨就是能及时分享一些有用的信息，一般选题都会比较新颖、时效，但与其他类型的文章相比，研究的系统性确实不够，但因为经过了同行评审，还是有一定的学术价值。

《自然》表示，这篇文章刊出后他们已经收到了一些来信，他们打算在经过适当技术评审之后将相关来信发表出来。因为基因编辑是一个快速兴起的科研领域，所以关注度高。《自然》希望通过展示实验和数据，让这一领域的研究不断深入。

实验设计与数据存在问题？

“这篇论文确实存在一些问题”，中科院一位不愿透露姓名的研究员在接受科技日报记者采访时表示。

在他看来，基因编辑领域，脱靶确实是一个问题，但这篇文章的实验设计、获得的数据以及结论都不够科学，不是单纯的脱靶这么简单。整个实验只涉及了三只小鼠，两个处理的小鼠和一个未处理的对照小鼠，整个实验只基于一个sgRNA数据，只显示一个SNV的数据，这些数量都是严重不足的，动物数量和分组上的问题也连带导致后期数据等诸多不合理之处。

Editas的首席技术官维克·梅尔与哈佛大学教授乔治·丘吉尔等的联合声明中也强调，在进行科学问题的重现性和可靠性研究时，数据不充分可能会成为阻碍。

中科院上海神经科学研究所研究员杨辉和他的博士研究生唐骋亦撰文点评该文，表示实验中为了制取CRISPR-Cas9编辑的小鼠，采用了向受精卵当中共注Cas9蛋白以及sgRNA质粒的方法是“非主流”的设计，蛋白溶剂可能具有一定毒性，可能会影响整个系统的稳定性。

科研和市场绑定可能产生新的问题

值得一提的是，不少国内的民众对基因公司就科学问题态度如此激烈表示不解，更有很多网友表示，“企业这么强烈表达反对意见肯定是因为论文的观点损害了自己的利益”。

中科院微生物所研究员娄春波向科技日报表示，这样激烈地质疑某些实验结果的现象其实是科学研究的常态。另外，由于国外著名期刊非常强调实验结果的创新性和吸引眼球的公共媒体性，也会助长一些实验结果被作者过度解读。

另一方面，在他看来，此次两家企业相关科学家的反应确实有些过激，但公众不必特别在意，毕竟Cas9系统基因编辑的脱靶效应是相关研究的痛点。他说，这些质疑言论产生的新闻效应对华尔街股民的影响应该会很大，但对科学研究的影响应该微乎其微。真正的学术争论需要更长的时间，因为要积累足够正反两方面的实验证据。

“实际上，美国科研—技术—资本—市场，这个完美的价值链背后也有很多脆弱的地方，也存在很多值得深入研究的问题，尤其是在中国这类准备超越美国范式的国家”，娄春波说。

应该：基突变发体细胞通性殖传给代.更确切些!
基突变代影响
①基突变发体细胞丝裂程通性殖传给代,通性繁殖传给代.
②基突变发精或卵细胞形减数裂程能通通性殖传给代.

克隆英文 clone音译,简单讲种工诱导性繁殖式.克隆与性繁殖同.性繁殖指经雌雄两性殖细胞结合、由物体产代殖式,见孢殖、芽殖裂殖.由植物根、茎、叶等经压条、扦插或嫁接等式产新体叫性繁殖.绵羊、猴牛等物没工操作能进行性繁殖.科家工遗传操作、植物繁殖程叫克隆,门物技术叫克隆技术.
克隆技术设想由德胚胎家于1938首提 ,1952,科家首先用青蛙展克隆实验,断利用各种物进行克隆技术研究.由于该项技术几乎没取进展,研究工作80代初期度进入低谷. ,用哺乳物胚胎细胞进行克隆取功. 19967月5,英科家伊恩·维尔穆特博士用羊体细胞克隆产羊,给克隆技术研究带重突破,突破往能用胚胎细胞进行物克隆技术难 关,首实现用体细胞进行物克隆目标,实现更高意义物复制.研究克隆技术目标找更办改变家畜基构,培育群能够消费者提供能需要更食品或任何化物质物.
克隆基本程先含遗传物质供体细胞核移 植除细胞核卵细胞,利用微电流刺激等使两者融合体,促使新细胞裂繁殖发育胚胎,胚胎发育定程度（罗斯林研究所克隆羊采用间约 6）再植入物宫使物怀孕使产与提供细胞 者基相同物.程供体细胞进行基改造,性繁殖物代基发相同变化.培育功三代克隆鼠火奴鲁鲁技术与克隆利羊技术主要区别于克隆程遗传物质经培养液培养,直接用物理注入卵细胞.程采用化刺激代替电刺激重新卵细胞进行控制.19987月 5,本石川县畜产综合与近畿畜产研究室科家宣布,利用物体细胞克隆两牛犊诞.两克隆牛诞表明克隆物技术重复.
苏格兰罗斯林研究所1996利用克隆技术克隆羊利,立即誉本世纪重争论科技突破.突破带处显易见. 利用技术抢救珍奇濒危物、复制优良家畜体、 扩良种物群体、提高畜群遗传素质产性能、提供足量试验物、推进转基物研究、攻克遗传性疾病、研制 高水平新药、产供移植内脏器官等研究发挥作用.
肯定种技术面作用同,更程度表示种技术担忧,侨衔?绻?褂貌坏保?庵旨际蹩赡芏陨?肪巢?て诘牟涣加跋欤?恍┛蒲Ъ胰衔? 畜牧业量推广种性繁殖技术,能破坏态平衡,导致些疾病规模传播；其应用类自身繁殖,产巨伦理危机.
克隆羊莉身份披露,美俄勒冈科家证实于19968月已经利用克隆胚胎培育猴；传说,比利医已意克隆男孩.尽管比利科家否认克隆报道,各政府克隆技术律 伦理面能造影响非重视,美、德、、英、加 等纷纷立专家组研究问题,科家要求 领域研究加限制.世界卫组织总干事岛宏欧盟委员负责科研委员19973月11别发表声明 谈,表示反进行体克隆试验.目前各项技术较致看制定律加强种技术管理,并严禁用复制类.克隆羊利英科家维尔穆特说, 用克隆利种技术效率极低,功克隆利前该技术曾导致先缺损物.种技术用于类 非道.
政府十重视克隆技术及其提相关问题,家科委农业部等部门已召各面专家参加研讨、 座谈,并关问题达共识.专家认,物克隆技术功科研究重事件,既益面, 利能,必须采取措施加规范,严格控制住害面,使项技术造福于类.
199711月11,联合教科文组织第29届 巴黎通项题《世界类基组与权宣言》文件,明确反用克隆技术繁殖.文件指,应利用物、遗传医类基组研究面,, 咱研究必须维护改善公众健康状况目,违背 尊严作,用克隆技术繁殖作,能允许.
19981月12,欧洲19家巴黎签署项严格禁止克隆协议(european protocol on banning human cloning).际第禁止克隆 律文件,《欧洲物医条约》补充.项禁止克 隆协议规定,禁止各签约研究机构或使用任何技术创造与或死基相似,否则予重罚.违反协议研究员医禁止事研究行医,关研究 所或医院执照吊销.签约研究机构或欧洲外区进行类追究律责任.协议签字家、丹麦、立陶宛、芬兰、希腊、尔兰、意 利、拉脱维亚、卢森堡、摩尔瓦、挪威、葡萄牙、罗马尼 亚、斯洛文尼亚、西班牙、瑞典、马其顿、土耳其圣马力诺.
克隆技术发展
克隆,Clone译音,意性繁殖,克隆技术即性繁殖技术.前久报道英罗斯林研究所试验功克隆羊利,首利用体细胞克隆功,物工程史揭新页.
克隆技术已经历三发展期：
第期微物克隆,即由细菌复制千万模细菌变细菌群.
第二期物技术克隆,DNA克隆.
第三期物克隆,即由细胞克隆物.
自界,少植物具先克隆本能,番薯、马铃薯、玫瑰等插枝繁殖植物.物克隆技术,则经历由胚胎细胞体细胞发展程.早本世纪50代,美科家两栖物鱼类作研究象,首创细胞核移植技术,研究细胞发育化潜能问题,细胞质细胞核相互作用问题.1986英科家魏拉德森首胚胎细胞利用细胞核移植克隆羊,相继克隆牛、羊、鼠、兔、猴等物.我克隆技术颇,80代末,我克隆兔,1991西北农业发育研究所与江苏农院克隆羊功,1993科院发育物研究所与扬州农院共同克隆批山羊,1995华南师广西农合作克隆牛,接着农科院畜牧研究所于1996克隆牛获功.美近克隆猴取功,本科家声称繁殖200克隆牛.所述克隆物,都用胚胎细胞作供体细胞进行细胞核移植获功.
19972月英罗斯林研究所宣布克隆功羊利,用乳腺皮细胞作供体细胞进行细胞核移植,翻物克隆史崭新页,突破利用胚胎细胞进行核移植传统式,使克隆技术足进展.整克隆程：科家选取三母羊,先母羊卵细胞所遗传物质吸,另6岁母羊乳腺细胞与融合,形含新遗传物质卵细胞,并促使裂发育胚胎,胚胎定程度再植入第三母羊宫,由孕育并产克隆羊利.利酷像提供乳腺细胞6岁母羊. 羊利世界第利用体细胞克隆功物.克隆利功,理论说明高度化细胞,经定手段处理,复受精卵期合功能；说明发育程,细胞质异源细胞核发育调控作用.物遗传疾病治疗、优良品种培育扩群等提供重要途径,物种优化、濒危物种质保存,转基物扩群均定作用. 自克隆羊利功,世界各引起强烈反响,看作福音,则视祸水,笔者新技术应采取支持态度,物克隆取突破,处培养量品质优良家畜,丰富物质,使畜牧业本降低,效率提高,提供某些药物原料提高类免疫功能等等.羊利前,罗斯林研究所曾培育奶含治疗血友病药物原料转基羊,家公司50万英镑高价买.利用体细胞批复制羊,挽救更患者命.另外,利用克隆技术量复制珍稀物,挽救濒危物种,调节自态平衡,类造福,何忧患呢?,克隆技术能带负面影响,些克隆物遗传全等,种特定病毒或其疾病染,带灾难,计划克隆物,扰乱物种进化规律,干扰性别比例,种物界控制带许意想危害.要采取相应研究策,制订科克隆计划,种负效应避免.
至于克隆,没意义研究课题,代物史证明,克隆技术能复制外貌特征相同物,能克隆复制者原才能.思想才能受制约.所,即使能克隆酷似历史伟领袖、伟科家物,仅外貌相同,却缺乏伟领袖、伟科家思想、气质、才能,试问克隆具意义?至于主张克隆取体器官,用于医体器官移植,行.克隆首先公民,享权,克隆肯捐赠器官,发明者能侵犯权. 至于克隆,现实,克隆要存,首先要吃饭,要思维,没颅能,我总能培植植物吧?且,重要克隆符合世情情,今世界口急剧膨胀,少家已实行计划育,控制口增,种情况拆巨资做违背社发展规律事呢?德研究技术部吕特格斯所说：复制类允许,定发. 目前,克隆技术英新进展,技术应用于类造血事业.英PPL公司克隆技术经济台,主管罗思詹姆斯博士说：研究利我知道,我用细胞制造转基物.我现利用技术产类血液重要组部,血浆.与罗斯林研究所合作研究种带类基牛羊.先物体内血浆取,再取代类血浆,种改变基牛羊体内含类血浆重要,通些物饲养、再克隆或繁殖,稳定靠且相便宜血资源,据统计英每价值达150英镑.谓效益匪浅. 克隆技术前景估量.

简介：　　基因突变指基因组DNA分子发生的突然的、可遗传的变异现象（gene mutation）。从分子水平上看，基因突变是指基因在结构上发生碱基对组成或排列顺序的改变。基因虽然十分稳定，能在细胞分裂时精确地复制自己，但这种稳定性是相对的。在一定的条件下基因也可以从原来的存在形式突然改变成另一种新的存在形式，就是在一个位点上，突然出现了一个新基因，代替了原有基因，这个基因叫做突变基因。于是后代的表现中也就突然地出现祖先从未有的新性状。　　1个基因内部可以遗传的结构的改变。又称为点突变，通常可引起一定的表型变化。广义的突变包括染色体畸变。狭义的突变专指点突变。实际上畸变和点突变的界限并不明确，特别是微细的畸变更是如此。野生型基因通过突变成为突变型基因。突变型一词既指突变基因，也指具有这一突变基因的个体。　　基因突变可以发生在发育的任何时期，通常发生在DNA复制时期，即细胞分裂间期，包括有丝分裂间期和减数分裂间期；同时基因突变和脱氧核糖核酸的复制、DNA损伤修复、癌变和衰老都有关系，基因突变也是生物进化的重要因素之一，所以研究基因突变除了本身的理论意义以外还有广泛的生物学意义。基因突变为遗传学研究提供突变型，为育种工作提供素材，所以它还有科学研究和生产上的实际意义。

分类：
　　基因突变可以是自发的也可以是诱发的。自发产生的基因突变型和诱发产生的基因突变型之间没有本质上的不同，基因突变诱变剂的作用也只是提高了基因的突变率。　　按照表型效应，突变型可以区分为形态突变型、生化突变型以及致死突变型等。这样的区分并不涉及突变的本质，而且也不严格。因为形态的突变和致死的突变必然有它们的生物化学基础，所以严格地讲一切突变型都是生物化学突变型。根据碱基变化的情况，基因突变一般可分为碱基置换突变（base substitution和移码突变（frameshift mutation）两大类。
碱基置换突变(subsititution)　　指DNA分子中一个碱基对被另一个不同的碱基对取代所引起的突变，也称为点突变（point mutation）。点突变分转换和颠换两种形式。如果一种嘌呤被另一种嘌呤取代或一种嘧啶被另一种嘧啶取代则称为转换（transition）。嘌呤取代嘧啶或嘧啶取代嘌呤的突变则称为颠换（transversion）。由于DNA分子中有四种碱基，故可能出现4种转换和8种颠换（见上图）。在自然发生的突变中，转换多于颠换。　　碱基对的转换可由碱基类似物的掺入造成。例如，5-溴尿嘧啶(5-bromouracil，BU）是一种与胸腺嘧啶类似的化合物，具有酮式和烯醇式两种结构，且两者可以互变，一般酮式较易变为烯醇式。当DNA复制 时，酮式BU代替了T，使A-T碱基对变为A-BU；第二次复制时，烯醇式BU能和G配对，故出现G-BU碱基对；第三次复制时，G和C配对，从而出现G-C碱基对，这样，原来的A-T碱基对就变成G-C碱基对（见下图）。向左转|向右转　　碱基对的转换也可由一些化学诱变剂诱变所致。例如，亚硝酸类能使胞嘧啶（C）氧化脱氨变成尿嘧啶（U），在下一 次复制中，U不与G配对，而与A配对；复制结果C-G变为T-A（见右图）。又如，烷化剂中的芥子气和硫酸二乙酯可使G发生乙基化，成为烷基化鸟嘌呤（mG），结果，mG不与C配对，而与T配对，经过复制，G-C变为A-T。
移码突变（translocation）　　指DNA片段中某一位点插入或丢失一个或几个（非3或3的倍数）碱基对时，造成插入或丢失位点以后的一系列编码顺序发生错位的一种突变。它可引起该位点以后的遗传信息都出现异常。发生了移码突变的基因在表达时可使组成多肽链的氨基酸序列发生改变，从而严重影响蛋白质或酶的结构与功能。吖啶类诱变剂如原黄素、吖黄素、吖啶橙等由于分子比较扁平，能插入到DNA分子的相邻碱基对之间。如在DNA复制前插入，会造成1个碱基对的插入；若在复制过程中插入，则会造成1个碱基对的缺失，两者的结果都引起移码突变。
缺失突变(deletion)　　基因也可以因为较长片段的DNA的缺失而发生突变。缺失的范围如果包括两个基因，那么就好象两个基因同时发生突变，因此又称为多位点突变。由缺失造成的突变不会发生回复突变。所以严格地讲，缺失应属于染色体畸变。
插入突变(insertion)　　一个基因的DNA中如果插入一段外来的DNA，那么它的结构便被破坏而导致突变。大肠杆菌的噬菌体Mu-1和一些插入顺序（IS）以及转座子（见转座因子）都是能够转移位置的遗传因子，当它们转移到某一基因中时，便使这一基因发生突变。许多转座子上带有抗药性基因，当它们转移到某一基因中时，一方面引起突变，另一方面使这一位置上出现一个抗药性基因。插入的DNA分子可以通过切离而失去，准确的切离可以使突变基因回复成为野生型基因。这一事件的出现频率并不由于诱变剂的处理而提高。

普遍发DNA复制期碱基配错
少量发任何期外界环境（辐射）损伤DNADNA自我修复修复能发突变

基突变
gene mutation
由于DNA发碱基增添、缺失或改变,引起基结构改变,叫做基突变.
1基内部遗传结构改变 .称点突变,通引起定表型变化 .广义突变包括染色体畸变.狭义突变专指点突变.实际畸变点突变界限并明确,特别微细畸变更.野型基通突变突变型基.突变型词既指突变基,指具突变基体.
基突变通发DNA复制期,即细胞裂间期,包括丝裂间期减数裂间期；同基突变脱氧核糖核酸复制、DNA损伤修复、癌变衰都关系,基突变物进化重要素,所研究基突变除本身理论意义外广泛物意义.基突变遗传研究提供突变型,育种工作提供素材,所科研究产实际意义.
基变异 基变异指基组DNA发突遗传变异.水平看,基变异指基结构发碱基组或排列顺序改变.基虽十稳定,能细胞裂精确复制自,种隐定性相.
定条件基原存形式突改变另种新存形式,位点,突现新基,代替原基,基叫做变异基.于代表现突现祖先未新性状.

900字左右...其!

基突变特点5项:
1、普遍性：物界任何物都能发基突变细胞物任何细胞都能发基突变
2、随机性：基突变发物体发育任何期物体任何细胞突变发期越早表现突变部越突变发期越晚表现突变部越少若突变发于殖细胞例精卵细胞则能传递给代若发于体细胞则难传递给代
3、突变频率低：例真核物基突变频率约十万
4、般害利少物环境于原环境般适应则突变产新基应新性状般适应原环境故基突变般害
5、定项性：基突变显性突变隐性突变
论类型突变都具五特点

pretes体细胞基突变早筛检查指检查

任何基因突变都是生化突变这句话不对。生化突变型 （biochemical mutant ）由于基因突变，参与代谢系的酶的活性降低或缺失，这突变型称生化突变型。
其突变性状可用生化的方法鉴别，与可见的形态突变型迥然有别。代表性的例子如与氨基酸、维生素、核酸碱基等合成代谢有关的酶失活的营养突变型，以及呼吸突变型、抗药突变型等。它们不仅广泛用于遗传学分析，而且还用于活体内代谢途径的研究和物质的生物测定等。还有许多未知用途。
基因突变可以是自发的也可以是诱发的。自发产生的基因突变型和诱发产生的基因突变型之间没有本质上的不同，基因突变诱变剂的作用也只是提高了基因的突变率。
按照表型效应，突变型可以区分为形态突变型、生化突变型以及致死突变型等。这样的区分并不涉及突变的本质，而且也不严格。因为形态的突变和致死的突变必然有它们的生物化学基础，所以严格地讲一切突变型都是生物化学突变型。根据碱基变化的情况，基因突变一般可分为碱基置换突变（base substitution和移码突变（frameshift mutation）两大类。

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各位老师:
我做RNA干扰实验,采用方案是shＲＮＡ表达质粒，我的问题就是质粒转染细胞后，是否需要将转染的细胞进行单克隆啊，如果说要单克隆化的话只是筛选就得化很长时间啊，望高手帮助啊？急啊