HA-3032 | |
Name | pGH-H3 (ABD79032) |
Description | Codon optimized full-length cDNA clone of H3N2 hemagglutinin (aa1-566) (A/Udorn/72) |
Application | Optimized for mammalian cell expression |
eEnzyme是一家美国高质量生物学试剂及检测试剂盒品牌供应商，其与美国国立卫生研究院合作紧密，在全球范围内为广大科研客户提供高品质的产品与技术服务，其主要生产销售高质量的抗体和用于传染病研究的抗体/抗原，细胞因子蛋白，pcr产品等用于分子和细胞生物学研究的生物试剂，产品应用于生物技术研究，制药，药物发现，癌症研究，传染性疾病，微生物和分子诊断等众多生命科学技术领域
eENZYME为科学界生产和销售高质量的生物试剂盒和生物分析试剂盒。与NIH密切合作以保证产品在生命科学研究的多个领域成功地使用。努力提供新颖价廉且有效的工具，使实验更容易成功。产品在科研、生物技术、制药和政府的研究实验室中得到广泛的应用，包括药物发现、癌症研究、传染病研究、微生物学和分子诊断。
【简单介绍】eENZYME生产销售高质量的抗体和用于传染病研究的抗体/抗原，细胞因子蛋白，PCR产品等用于分子和细胞生物学研究的生物试剂，产品应用于生物技术研究，制药，药物发现，癌症研究，传染性疾病，微生物和分子诊断等众多生命科学技术领域。【详细说明】欢迎eENZYMEeENZYME生产销售高质量的抗体和用于传染病研究的抗体/抗原，细胞因子蛋白，PCR产品等用于分子和细胞生物学研究的生物试剂，产品应用于生物技术研究，制药，药物发现，癌症研究，传染性疾病，微生物和分子诊断等众多生命科学技术领域。 Ë ENZYMEis的高品质生物试剂及实验室设备科学界一个制造商和分销商。我们密切合作，与美国国立卫生研究院的社区，以保证我们的产品生命科学研究在广泛领域的成功表现。我们致力于提供创新和具有成本效益的工具，使您更容易取得成功。我们的产品用于在学术，生物技术，制药和政府研究实验室，包括药物发现，癌症研究，传染病研究，微生物学和分子诊断许多不同的应用。公司网站：www.eenzyme.com 目录号描述产品类型应用单位供应商IA-01SW-0100抗HA（A/California/06/09）（甲型H1N1流感）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-011-0100抗H1（H1N1/Pan）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-001-0100抗HA1（A/新喀里多尼亚）（甲型H1N1流感）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-023-0100抗-NP（A/新Caledonia/20/1999）（甲型H1N1流感兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-022-0100抗M2型（H1N1/A/新喀里多尼亚（H1N1））兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-004A-0100抗-H3（H3N2）（A/WIS/2005）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-0100抗-M1（H3N2）[A/Wyoming/3/03）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-004-0100抗HA（H3N2）[A/Wyoming/3/03）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-020-0100抗-NA（H3N2）[A/Wyoming/3/03）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-005H-0100抗H5（A/香港Kong/483/97）（H5N1）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-005-0100抗HA1（H5N1）（A/Vietnam/1203/2004）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-006-0100抗HA1（H5N1，禽流感）（A/斑头雁/Qinghai/12/05）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-010-0100抗-HA2（A/Vietnam/1203/2004）（H5N1）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-012-0100抗-M1（A/Vietnam/1203/2004）（H5N1）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-021-0100抗-NA（A/Vietnam/1203/2004）（H5N1，人）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-025-0100抗NS1（A/Vietnam/1203/2004）（H5N1）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-0100抗HA1（A/Chicken/NY/29878/91）（H2N2）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-009-0100抗HA1（A/chicken/HongKong/NT366/03）（H9N2）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-027-0100抗-NA（A/Chicken/HongKong/NT366/03）（H9N2）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-007-0100抗HA1（A/duck/Hainan/6/2004）（H6N2）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-008-0100抗HA1（A/鸡/荷兰/2/03）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-028-0100抗-NA（A/Chicken/Netherlands/1/03）（H7N7）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-0015-0100抗-H11（A/duck/Yangzhou/906/02）（H11N2）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-0031抗B型流感（NP）的多克隆兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-0032抗B型流感（医管局）多克隆兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-013-0100抗-H12（A/pintail/Alaska/102/05）（H12N5）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-014-0100抗-H4（A/environment/Maryland/1101/06）（H4N6）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-018抗-H15（A/Australia/83/00（H15N8））兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-019抗-H16（A/Sweden/99（H16N3））兔多克隆抗体WB等100微克eENZYME目录号描述产品类型应用单位供应商IA-01SW-0100抗HA（A/California/06/09）（甲型H1N1流感）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-011-0100抗H1（H1N1/Pan）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-001-0100抗HA1（A/新喀里多尼亚）（甲型H1N1流感）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-023-0100抗-NP（A/新Caledonia/20/1999）（甲型H1N1流感兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-022-0100抗M2型（H1N1/A/新喀里多尼亚（H1N1））兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-004A-0100抗-H3（H3N2）（A/WIS/2005）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-0100抗-M1（H3N2）[A/Wyoming/3/03）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-004-0100抗HA（H3N2）[A/Wyoming/3/03）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-020-0100抗-NA（H3N2）[A/Wyoming/3/03）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-005H-0100抗H5（A/香港Kong/483/97）（H5N1）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-005-0100抗HA1（H5N1）（A/Vietnam/1203/2004）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-006-0100抗HA1（H5N1，禽流感）（A/斑头雁/Qinghai/12/05）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-010-0100抗-HA2（A/Vietnam/1203/2004）（H5N1）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-012-0100抗-M1（A/Vietnam/1203/2004）（H5N1）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-021-0100抗-NA（A/Vietnam/1203/2004）（H5N1，人）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-025-0100抗NS1（A/Vietnam/1203/2004）（H5N1）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-0100抗HA1（A/Chicken/NY/29878/91）（H2N2）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-009-0100抗HA1（A/chicken/HongKong/NT366/03）（H9N2）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-027-0100抗-NA（A/Chicken/HongKong/NT366/03）（H9N2）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-007-0100抗HA1（A/duck/Hainan/6/2004）（H6N2）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-008-0100抗HA1（A/鸡/荷兰/2/03）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-028-0100抗-NA（A/Chicken/Netherlands/1/03）（H7N7）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-0015-0100抗-H11（A/duck/Yangzhou/906/02）（H11N2）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-0031抗B型流感（NP）的多克隆兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-0032抗B型流感（医管局）多克隆兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-013-0100抗-H12（A/pintail/Alaska/102/05）（H12N5）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-014-0100抗-H4（A/environment/Maryland/1101/06）（H4N6）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-018抗-H15（A/Australia/83/00（H15N8））兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-019抗-H16（A/Sweden/99（H16N3））兔多克隆抗体WB等100微克eENZYME目录号描述产品类型应用单位供应商IA-01SW-0100抗HA（A/California/06/09）（甲型H1N1流感）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-011-0100抗H1（H1N1/Pan）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-001-0100抗HA1（A/新喀里多尼亚）（甲型H1N1流感）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-023-0100抗-NP（A/新Caledonia/20/1999）（甲型H1N1流感兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-022-0100抗M2型（H1N1/A/新喀里多尼亚（H1N1））兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-004A-0100抗-H3（H3N2）（A/WIS/2005）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-0100抗-M1（H3N2）[A/Wyoming/3/03）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-004-0100抗HA（H3N2）[A/Wyoming/3/03）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-020-0100抗-NA（H3N2）[A/Wyoming/3/03）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-005H-0100抗H5（A/香港Kong/483/97）（H5N1）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-005-0100抗HA1（H5N1）（A/Vietnam/1203/2004）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-006-0100抗HA1（H5N1，禽流感）（A/斑头雁/Qinghai/12/05）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-010-0100抗-HA2（A/Vietnam/1203/2004）（H5N1）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-012-0100抗-M1（A/Vietnam/1203/2004）（H5N1）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-021-0100抗-NA（A/Vietnam/1203/2004）（H5N1，人）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-025-0100抗NS1（A/Vietnam/1203/2004）（H5N1）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-0100抗HA1（A/Chicken/NY/29878/91）（H2N2）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-009-0100抗HA1（A/chicken/HongKong/NT366/03）（H9N2）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-027-0100抗-NA（A/Chicken/HongKong/NT366/03）（H9N2）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-007-0100抗HA1（A/duck/Hainan/6/2004）（H6N2）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-008-0100抗HA1（A/鸡/荷兰/2/03）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-028-0100抗-NA（A/Chicken/Netherlands/1/03）（H7N7）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-0015-0100抗-H11（A/duck/Yangzhou/906/02）（H11N2）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-0031抗B型流感（NP）的多克隆兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-0032抗B型流感（医管局）多克隆兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-013-0100抗-H12（A/pintail/Alaska/102/05）（H12N5）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-014-0100抗-H4（A/environment/Maryland/1101/06）（H4N6）兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-018抗-H15（A/Australia/83/00（H15N8））兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-019抗-H16（A/Sweden/99（H16N3））兔多克隆抗体WB等100微克eENZYME
ebiomall.com
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
大家好，小弟最近做做乙脑病毒（JEV）全长感染性克隆，实验遇到一些问题，希望得到园子里面高手的指点。乙脑为单股正链RNA病毒，病毒基因组全长约为11kb，小弟以takarapMD19-TsimpleT载体（该载体来源PUC载体系列，含有PUCori，2700bp）为模板，为了克隆乙脑全长CDNA，将JEV全长基因组分四段进行RT-PCR扩增，得到JEV-A（2.2kb）,JEV-B（3.5kb）,JEV-C（3.3kb）,JEV-D（1.9kb）四个片段，JEV-***段5.端加上了T7启动子为后面进行体外转录用，在克隆前对宝生物的pMD19-TsimpleT载体进行了改造，连了一段linker序列（500bp左右），该序列中含有克隆JEV四段序列的单一酶切位点（克隆过程中的酶切位点均为常见酶，排除未切开的可能性，而且每次酶切均发现有小片段被切下）。采用分四段分部克隆的策略将乙脑病毒全长基因组连上改造后的载体。JEV-A很顺利一次连上，再连JEV-D也很顺利也一次连上，再连JEV-C，连了很多次，用了TAKARAT4，solutionI和NEB的连接酶均为能连上，也调整了DNA和载体的比例均未能连上，是不是PUC系列载体容量有限，装不下太大的片段，载体上连上的片段加起来越大了往上面再连就越困难。问了宝生物的客服说PUC载体最大能容下18kb的片段。之前也将JEV基因组分两段进行克隆，每段5000多bp，连了很多次一段都没连上去，故将全长DNA分四段，想每次往上面连一部分，每连上一段载体相当于变成了一个新载体，载体大小也变大了，能插入的片段也会相应变大。另外，实验室另一个学生拿pbluescriptsk载体（3.0kb）来连，采用类似的克隆策略均为连上，大家觉得是什么原因，是不是得换载体，换大载体，我查了很多别人也有拿pbluescriptsk载体建其他病毒感染性克隆的也能连上（都是连10kb以上的片段），到底是哪个环节出问题已经做了一个暑假2个多月均未得到克隆，急死了，请大家给点高见。
物芯片高密度固定固相支持介质物信息微列阵列阵每序列及位置都已知并按预先设定顺序点阵基芯片物芯片种其固定核算类物质主要用于DNA、RNA析DNA芯片微点阵两种
离目基指基组发现或找某目（标）基目前通①比较同物种间或同物种同体间；或同体同发育期或同环境条件基差异表达（基表达平行析）实现采用基芯片技术进行基差异表达研究通杂交直接检测细胞mRNA种类及丰度与传统差异显示相比具品用量自化程度高检测目标DNA密度及并行种类等优点②利用同源探针cDNA或EST微列阵筛选离目基目前DNA 芯片、cDNA芯片两种其基本步骤包括：基芯片制备、靶品制备、杂交与检测、目基离并获全
2 基文库技术离目基
基文库指某物类型全部基集合种集合重组体形式现某物DNA片段群体与载体重组重组转化宿主细胞转化细胞选择培养基单菌落（或噬菌斑或细胞）即DNA片段克隆全部DNA片段克隆集合体即该物基文库其类型基组文库与cDNA文库、克隆文库与表达文库按载体智力文库、噬菌体文库、黏粒载体文库、工染色体文库等基文库构建文库筛选基主要几种：核算杂交、免疫检测、DNA同胞选择、PCR筛选等基文库构建目前基工程核工作离目进用
3 功能蛋白组离目基
蛋白组指细胞内全部蛋白存及式即基组表达产总蛋白质统称功能蛋白质组指些能涉及特定功能机理蛋白质群体主要研究蛋白质双向电泳通高效液相色谱、质普蛋白质序列进行析借用物手段则进行目基离：应用PCR进行离目基：通蛋白质序列析通密码简并性设计简并引物利用RT-PCR 目基全；应用核算杂交筛选离目基：即利用简并寡核苷酸探针筛选cDNA或基组文库；免疫雪筛选离目基：通蛋白特异抗体与目蛋白专结合表达文库离目基蛋白基
4 PCR技术基克隆应用
PCR技术已经渗透物各领域克隆获cDNA全面起着重要作用利用 PCR技术特定条件基表达进行检测即通mRNA差别显示（DDRT-PCR）鉴定离所需目基；通RT-PCR克隆目基 cDNA区域进行cDNA文库构建通锚定PCR或反向PCR快速克隆cDNA末端未知序列、功能基调控区等现用于基离克隆 PCR主要：RT-PCRDDRT-PCR用于cDNA末端快速克隆RACE（第3节）用于DNA序列克隆Panhankle- PCR、Cassette-PCR及减cDNA文库PCR构建等Panhankle-PCR、Cassette-PCR基组已知DNA相临未知序列克隆奠定良基础
5 mRNA差别显示技术离差别表达基
mRNA差异显示技术组织特异性表达基进行离种快速行效mRNA反转录与PCR技术结合发展起种RNA指纹图谱技术利用5’锚定引物oligo（dT）12MN3’端随机引物总mRNA进行PCR扩增期差异表达条带并其差异显示条带进行收、克隆
6 插入突变离克隆目基
获突变体进行未知基克隆用举T-DNA标签转座诱变离克隆目基例T-DNA标签T-DNA任何兴趣基处产插入性突变获析该基功能照突变体T-DNA左右边界间携带外源报告基片段作选择性遗传标记插入序列已知获转基重组突变体通各种克隆PCR策略加研究倘若35S强启T-DNA整合宿主基组整合内原基游则产异增加或表达空特异性改变破坏基表达效获性突变功能丧失性突变等转座标签株携带功能性转座系统植物与遗传差异同种植物杂交转座插入某特定基序列破坏该基编码蛋白进导致见表性破坏或改变产代筛选新型突变体
设计引物候引物度设置25-27左右
我总共要做6个克隆。先把6个基因的CDNA克隆到shuttle质粒pAdTrack-CMV，进展很顺利。然后用PmeI处理重组shuttle质粒，过夜酶切，也很顺利。但与腺病毒backbone质粒pAdEasy-1共转化时遇到了大麻烦。起初，我没有BJ5183Ecoli菌株，就想当然像拿DH5a替代，但一直不成功。无论CaCl2法和电转法都不行，挑出来的克隆不是只含重组shuttle质粒，就是同时含有两种质粒，即重组shuttle质粒和pAdEasy-1。但各是各的，二者并没有在细菌内发生同源重组。
于是我借了BJ5183Ecoli菌株，采用电转化法，这时总算有点成功。6个重组腺病毒质粒构建成功了4个。经酶切鉴定均这4个克隆均正确。但是，另外2个总是失败，原因不详。于是我就重复重复，期间，糟糕的事情发生了....电转杯总是被击破，Bio-Rad电转仪总是出现"检测到低压故障电弧”的字样。想来想去找不到好的对策。起初我以为是有气泡，于是在做电转时尽可能避免气泡的出现。遗憾的是，这毫无帮助，电转杯还是击一个破一个。我那个心疼呀。倒不是心疼杯子，心疼的是我的细菌、质粒，用Tip又吸不出来，所以只好把它们丢掉。
Finally，我发现了其中的问题。我改用去离子水来溶解重组shuttle质粒和pAdEasy-1时电转杯就再也不破了。我分析，原因可能与电转菌液的离子强度有关。当我放较大体积（>15ul）的质粒到BJ5183Ecoli菌（20ul）中时，里面的TE缓冲液可能导致电击时产生高强度电流，结果杯子就破了。由此看来，气泡本身对电击可能不无影响，反而会减弱电流强度。但离子强度就不同了，离子强度太高，足以导致一次实验报废。
后感：失败并不可怕，可怕的是想当然去重复，而不去探究失败的原因。朋友们，如在这方面好的经历坏的经历，尽可拿出来一起分享。
让我们一起成长。
目基表达基工程叙述~
我的信箱：wjy_0912@hotmail.com
