强生动态 | 强生
| 实验方法原理 | 用PCR分析酵母菌落时，无需纯化DNA。本方案以单个酵母菌落的粗裂解液作为PCR扩增的模板，来确定YAC中是否携带目的DNA序列。 | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | TaqDNA聚合酶寡核苷酸引物DNA标准参照物YAC重组子的酵母菌株 试剂、试剂盒 | PCR缓冲液dNTP溶液 仪器、耗材 | 琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶微量离心管程控式PCR仪 实验步骤 | 一、材料 1.缓冲液和溶液 10X菌落PCR缓冲液 dNTP溶液（10mmol/L),含有4种dNTP(pH8.0，PCR级） MgCl2(25mmol/L) 2.酶及其缓冲液 TaqDNA聚合酶 3.凝胶 琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶 4.核酸和寡核苷酸 寡核苷酸引物 DNA标准参照物 5.专用设备 微量离心管（0.5ml) 储存有所需PCR方案的程控式PCR仪 6.载体和酵母菌株 携带有目的YAC重组子的酵母菌株 二、方法 1.在一个无菌的0.5ml微量离心管里，依次序加入下列物质：10X菌落PCR缓冲液2μl，25mmol/LMgCl21.2μl，10mmol/LdNTPs0.4μl，寡核苷酸引物每个引物浓度为10pmol，Taq聚合酶5单位（0.2μl），H2O加至总体系为20μl。 2.用一个黄色的一次性移液器吸头，吸取少量酵母菌落(0.10~0.25μl)，加入反应体系。 3.将PCR管放进PCR仪内。按下面程序进行PCR反应。  4.用琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳分析PCR产物。电泳应采用适宜大小的标准参照物。 |
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发布于 ： 2021-07-27
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