实验十 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)分离蛋白质
实验方法原理 | 在定量分析蛋白质混合物方面,最广泛采用的蛋白质组学方法就是SDS-PAGE。 因为它根据蛋白质的大小不同分离蛋白,所以对于检测蛋白纯度特别有用,同时也应用于蛋白质相对分子质量(Mr)的测定。影响到SDS-PAGE蛋白分离效果的因素有: ①丙烯酰胺与交联剂(双丙烯酰胺)的比例; ②用于制备浓缩胶和分离胶的丙烯酰胺/双丙烯酰胺的比例;③浓缩胶和分离胶缓冲液pH及成分; ④样品制备的方法。 典型Laemmli胶系统(Laemmli,1970)采用甘氨酸电泳缓冲液,能分离分子质量范围.约3000?200000Da的蛋白。本方案中使用的是ScMgger和vonJagow(1987)的tricine凝胶系统,其中用tricine[三(轻甲基)甲基甘氨酸]代替了甘氨酸。这一系统可以分离小至500Da的肽类,适合SDS-PAGE肽图谱以及制备氨基末端、羧基末端测序的样品 | ||||
---|---|---|---|---|---|
实验材料 | 蛋白溶液或块状细胞蛋白 试剂、试剂盒 | 下槽缓冲液分离胶混合物浓缩胶混合物上槽缓冲液 实验步骤 | 1.按方案1制备不连续凝胶。 2.分别往电泳上槽和下槽中注入对应的电泳缓冲液。 3.按方案1的方法制备凝胶的蛋白质上样样品。 4.每块胶以恒流25mA,从负极到正极开始电泳。 5.选用方案2或方案7中介绍的考马斯亮蓝或银染法使蛋白显现。 |
免责声明 本文仅代表作者个人观点,与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实,对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺,请读者仅作参考,并请自行核实相关内容。
版权声明 未经蚂蚁淘授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的,应该授权范围内使用,并注明“来源:蚂蚁淘”。违反上述声明者,本网将追究其相关法律责任。
发布于 : 2021-08-27
阅读(211)
▍
相关分类
▍
相关文章
电泳槽与电泳仪之间有什么区别?
dGTP Solution(100 mM) 脱氧鸟苷三磷酸溶液(100 mM)https://www.yeasen.com/products/detail/96脱氧核糖核苷三磷酸溶液套装(dATP, dCTP, dTTP, dGTP, 100mM each ) 10122ES74 4×40
5.2.1 甲醛变性琼脂糖凝胶电泳_实验⽅法_
Aviva Systems品牌简介 (Aviva Systems Biology ) 抗体;生物 ...
安玛西亚品牌简介 GE Amersham Biosciences 安玛西亚 ...
固相化pH梯度双向凝胶电泳实验7
分离外周血单个核细胞的常用方法()_
fine是什么意思?帮你突破I’m fine的框框 蔡妈笔记网
sds聚丙烯酰胺凝胶电泳法实验报告
鉴定分析植物蛋白复合物的蓝绿非变性凝胶电泳实验 ...
其它_chengfong的专栏_chengfong
循环水式真空泵实验室常规仪器浙江杭州凯弗克斯实验室设备 ...
▍
相关问答