实验十 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)分离蛋白质
| 实验方法原理 | 在定量分析蛋白质混合物方面，最广泛采用的蛋白质组学方法就是SDS-PAGE。 因为它根据蛋白质的大小不同分离蛋白，所以对于检测蛋白纯度特别有用，同时也应用于蛋白质相对分子质量（Mr)的测定。影响到SDS-PAGE蛋白分离效果的因素有： ①丙烯酰胺与交联剂（双丙烯酰胺）的比例； ②用于制备浓缩胶和分离胶的丙烯酰胺/双丙烯酰胺的比例；③浓缩胶和分离胶缓冲液pH及成分； ④样品制备的方法。 典型Laemmli胶系统（Laemmli，1970)采用甘氨酸电泳缓冲液，能分离分子质量范围.约3000?200000Da的蛋白。本方案中使用的是ScMgger和vonJagow(1987)的tricine凝胶系统，其中用tricine[三（轻甲基）甲基甘氨酸]代替了甘氨酸。这一系统可以分离小至500Da的肽类，适合SDS-PAGE肽图谱以及制备氨基末端、羧基末端测序的样品 | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 蛋白溶液或块状细胞蛋白 试剂、试剂盒 | 下槽缓冲液分离胶混合物浓缩胶混合物上槽缓冲液 实验步骤 | 1.按方案1制备不连续凝胶。 2.分别往电泳上槽和下槽中注入对应的电泳缓冲液。 3.按方案1的方法制备凝胶的蛋白质上样样品。 4.每块胶以恒流25mA，从负极到正极开始电泳。 5.选用方案2或方案7中介绍的考马斯亮蓝或银染法使蛋白显现。 |
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发布于 ： 2021-08-27
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