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4×和5×的上样缓冲液的区别就是加样的比例不一样。4×上样缓冲液使用方法：1、按每30微升蛋白样品加入10微升上样缓冲液的比例(4倍稀释)来使用。如果蛋白浓度过高，可用双蒸水稀释。2、混匀后，100℃水浴加热5-10分钟，使蛋白变性。 3、冷却至室温后，10000-14000rpm离心2-5分钟，取上清直接上样电泳即可。5×上样缓冲液使用方法：1.在室温或不超过37℃的水浴中溶解SDS-PAGE上样缓冲液(5X)。水浴溶解后立即室温存放，尽量避免长时间置于水浴中。2.按照每4微升蛋白样品加入1微升蛋白上样缓冲液(5X)的比例，混合蛋白样品和蛋白上样缓冲液(5X)。3.100℃或沸水浴加热3-5分钟，以充分变性蛋白。4.冷却到室温后，直接上样到SDS-PAGE胶加样孔内即可。5.通常电泳至蓝色染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。
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