Details
Source
RecombinantE.colistrain
ReagentsSupplied
10XT4PolynucleotideKinaseReactionBuffer
Applications
- Catalyzesthetransferofthegamma-phosphateofATPtothe5"-OHterminusinDNAorRNA
- Contains3"-phosphataseactivity(1)
- Usedfor5"-endlabelingofnucleicacidspriortoDNAorRNAsequencing(2,3)
- PhosphorylatessyntheticlinkersandfragmentsofDNAorRNApriortoligation
- Labels5"-terminipriortopartialrestrictionenzymedigestion
UnitDefinition
Oneunitistheamountofenzymerequiredtotransfer1nmolofγ-phosphatefromATPtothe5"OHterminusofsalmonspermDNAat37°C in30minutes
HeatInactivation
15minutesat65ºC
Concentration
20-30Units/µl
StorageBuffer
50mMTrisHCl(pH7.6)
0.1mMEDTA
25mMKCl
5mMdithiothreitol
0.1µMATP
50%(v/v)glycerol
AssayConditions
70mMTris-HCl(pH7.6)
10mMMgCl2
5mMdithiothreitol
50ug5"-OHterminatedDNA(micrococcalnucleasetreatedsalmonspermDNA)
0.07mM[γ-32P]ATP
Reactionvolumeof100µl
StorageConditions
Storeat-20°C
Productshippedondryice
Downloads
CertificateofAnalysisPDF -CurrentLot
MSDSPDF -CurrentLot
References
(1)Richardson,C.C.(1971)ProgressinNucleicAcidsRes.andMol.Biol.2,815-828
(2)Maxam,A.andGilbert,W.(1977)Proc.Natl.Acad.Sci.USA74,560-56
(3)Donis-Keller,H.(1980)NucleicAcidsRes.8,3133-3142
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1.小鼠Lewis肺癌细胞DNA含量测定方法
(1).从C57BL/6小鼠上切除肿块,在培养皿内用PBS冲洗.
(2).去除结缔组织及脂肪,剪碎肿块.
(3).小碎片移入1.20×38mm注射针,加压使其通过,于4℃条件下重悬细胞于HBSS中.
(4).将200~300μL细胞悬液(5×105细胞/mL)中加入3mL PI(50μg/mL),染色3LL细胞,于4℃存放20~30分钟.
(5).测定580~750nm之间的发射荧光,以去除末结合PI产生的激发光与发射光谱线之间的重叠部分.
荧光燃料使用的问题有两个:
一个就是迁移性,使用时要严格控制用量,以避免产生迁移现象;
二是荧光染料使用有一个极限值,如果超量使用,导致荧光线被吸收,使吸收和发光成叠所致。
想请问一下,DAPI这个染料到底有没有膜通透性,我通过百度搜索查询关于DAPI染料的,基本上是说它能透过细胞膜对活细胞和死细胞均能染上蓝色;但是也有人说DAPI只可以透过死细胞膜,不能对活细胞进行染色,用以区分活死细胞,到底哪个是对的啊,蒙了!!!!!!
我想用共聚焦观察间期染色体,用涂染探针,有一个问题很困扰我,我想涂染完染色后用DAPI复染细胞核,但是目前哈尔滨的共聚焦都没有紫外激发光,不能激发DAPI,我怎么才能实现,用红色涂一条染色体,用绿色涂另一条,用DAPI蓝色染核,同时成像呢,所说的双光子显微镜可以么?我实在很迷惑,求求版主别再删我的帖子,尽管我现在只是一个索取者,还不能给大家提供有用的信息,但是相信有一天会为大家做贡献的,谢谢了

