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Argus II_
来自 : 蚂蚁淘
实验方法原理荧光免疫染色法显示细胞骨架具有清晰优点,但操作过程较复杂;考马斯亮蓝染色法简便易行,清晰度稍差,但如分化处理适当能提高清晰度。
实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤
1. 固定液准备

0.1M磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O)14.0ml

0.1M磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)36.0ml

蒸馏水50.9ml

(以上各液相混合后再加戊二醛)

25%戊二醛50.0ml

染色液:

甲醇46.5ml

冰醋酸7.0ml

蒸溜水46.5ml

(以上各液相混合后再加染)

考马斯亮蓝0.2g

2. 培养细胞

用支持物盖片培养法;

3. 固定

从培养瓶中取出细胞盖片,投入固定剂中固定15分钟;

4. 漂洗

取出盖片先置蒸馏水中漂洗2分钟,再用蒸馏水洗两次,每次1分钟;

5. 染色

在考马斯亮蓝液中染色60分钟;

6. 按4程序漂洗;

7. 分化

置入含甲醇冰醋酸液碟皿中(不含染料),在倒置显微镜直接窥视下,见
细胞质内微丝逐渐明显,背地清亮时便终止;

8. 漂洗

按4处理;

9. 脱水→各度酒精→二甲苯;

10. 封片

用树胶封固;

11. 结果

细胞内微丝呈蓝色,如分化较好时背地清亮,反之会影响微丝的清晰度。
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