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实验方法原理 | |||||||||||
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实验材料 | 见基本方案 试剂、试剂盒 | 见基本方案 仪器、耗材 | 见基本方案 实验步骤 | 1.按照基本方案6步骤1~6操作。 要得到真实浓度的近似值,DNA的浓度由A260值计算得到,组蛋白的浓度通过BCA分析系统来确定。 2.按如下所述进行5个装配反应: 2.1在56.6ulNH中(见基本方案6步骤3)加入1ulACF(2~10U)。 2.2从冰上取下管子,平衡到室温。 2.3加入10.5ulAM主混合液(见基本方案步骤4),及2.5、2.22、2.0、1.82、1.67ulDNA模板(使用过量的拓扑异构酶Ⅰ变松弛或超螺旋的;见基本方案步骤5)。马上轻轻地涡旋混匀2~3S。 2.427℃装配1.5~2.5h。 3.按照基本方案步骤8~12操作。 4.从凝胶上分析确定组蛋白与DNA最高量的比值,这时仍然能观察到未弥散的梯度。使用下一个最低的比值作为进行进一步装配反应的最理想的比值。重新计算核心组蛋白的有效浓度以使新的最佳比值为1.0:1。 注意事项 | 其他 | |
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发布于 : 2018-08-06
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