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제품특징
□ 농도 : 15~30 U/㎕
□ 형상
50 mM | Tris-HCl (pH8.0) |
10 mM | 2-Mercaptoethanol |
50 mM | NaCl |
50% | Glycerol |
□ 첨부 Buffer 조성 (10×)
200 mM | Tris-HCl (pH8.0) |
50 mM | NaCl |
25 mM | CaCl2 |
□ 보존 -20℃
□ 기원
Staphylococcus aureus 배양 상층액
□ 제품설명
본 효소는 endonuclease로 단일가닥와 이중가닥의 핵산에 작용하여 3’-phosphate 말단을 형성한다. 단일가닥 핵산에 대하여 반응성이 강하고 DNA 또는 RNA의 AT-또는 AU-rich 지역을 특히 잘 분해한다. 본 효소는 활성에 Mg2+를 필요로 하지 않고 Ca2+ 이온을 필요로 한다.
□ 활성의 정의
열변성 송아지 흉선 DNA를 기질로 37℃, pH8.0에서 30분 동안 반응하여 1 OD260의 산가용성 물질을 생성하는 효소활성을 1 U으로 한다.
□ 활성 측정용 반응액 조성
20 mM | Tris-HCl (pH8.0) |
5 mM | NaCl |
2.5 mM | CaCl2 |
0.5 mg/ml | 열변성 송아지 흉선 DNA |
□ 순도
● 50 U의 본 효소와 1 ㎍의 λDNA를 제한효소 반응액(H 버퍼)중에서 37℃, 10분간 반응하여도 DNA의 전기영동 패턴에 변화가 일어나지 않는다.
● SDS 전기영동으로 95% 이상의 순도를 나타낸다.
□ 용도
● 세포 추출액중의 핵산성분 가수분해
● Nucleosome을 조제하기 위한 크로마틴 소화
□ 사용상의 주의
본 효소의 활성은 Ca2+에 절대적으로 의존한다. EDTA 또는 EGTA로 반응을 정지할 수 있다.
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我要做的两个目的蛋白,分子量一个是140的,另一个是36,内参用的GAPDH。这几天刚刚要做小鼠组织的蛋白,就把新提取的组织蛋白和之前做过的细胞蛋白一起上了,细胞和组织的各上了3个孔。
电泳转膜孵育等条件都是以前做成熟的
之后显影,细胞蛋白的,两个目的和内参都出得挺好;但是小鼠的组织蛋白只有分子量140的那个显出条带了,36的那个显出来的像一片水渍一样,斑片状的黑,内参有时也这样、有时干脆什么都不显。不知道这是什么原因...按说细胞同样的蛋白做出来,WB的各个步骤应该不会有太大问题的。
有点怀疑蛋白提取的不好,我提组织蛋白的的操作是在冰上进行的,裂解液也加有PMSF,用BCA法测得的蛋白浓度大概也有3~5mg/ml。
在这里求助各位高手~望给我指点一下~不胜感激啊!
去垢剂作为添加剂生长蛋白质晶体是一项很有用的技术。非离子和两性离子结晶剂在膜蛋白结晶中已经得到很好应用,目前已经变成常规的实验手段。去垢剂在一些可溶蛋白中也起到了一定的作用,提高了晶体的质量和结果的可重复性 ,促进了单晶的生长, 但具体的影响机制尚不明确。其可能原因是去垢剂的引入使结晶液滴中的蛋白分子更具有亲水性,使溶液中同质蛋白质分子增加。向左转|向右转
如要膜蛋白保持原来的结构应采用:非离子型去垢剂.
表面活性剂:通常由一个极性头和一个非极性尾组成,用于去除难溶于水的污渍
漂白剂:通常含次氯酸盐成分,原理为其氧化性
稀盐酸:用于去除碱性的污渍,如马桶中的结块
碳酸钠溶液:用于去除油渍,其原理为酯在碱溶液中水解,参见皂化反应

