非标记抗体免疫酶组织化学实验——ABPAP法资讯...
| 实验方法原理 | ABPAP法是PAP法和ABC法的联合应用，使更多的酶分子结合到抗原-抗体复合物上，目的就是增加方法的敏感性。其原理见图4-11。作者应用了30余种特异性一抗、鼠源性和兔源性PAP复合物以及ABC检测系统，结果ABPAP法比单一的PAP法要敏感7～8倍，比单一的ABC法要敏感1～4倍。 | ||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 石蜡切片ABC复合物PAP复合物动物血清 试剂、试剂盒 | 蛋白酶特异性一抗桥抗体PBSDABH2O2 仪器、耗材 | 滴管玻片 实验步骤 | 1.4μm石蜡切片58℃烤片4h，切片常规脱蜡至水，PBS洗3min×3次。 2.蛋白酶消化或AR（组织抗原的暴露或抗原的修复，此步视情况而定）。 3.0.3％H2O2处理切片20min（室温），PBS洗3min×2次。 4.3％正常动物血清处理切片30min（室温），吸去多余血清，不洗。 5.适当稀释的特异性一抗孵育（4℃过夜或37℃60min），PBS洗3min×3次。 6.滴加桥抗体（二抗），37℃孵育30min，PBS洗3min×3次。 7.适当稀释的PAP复合物（要求与特异性一抗同一种属）37℃孵育30min。 8.PBS洗3min×3次。 9.适当稀释的生物素化羊抗兔或抗鼠二抗（根据PAP复合物种属而选择不同的二抗）37℃孵育30min，PBS洗3min×3次。 10.适当稀释ABC复合物37℃孵育30min，PBS洗3min×3次。 11.0.04％DAB-0.03％H2O2显色8～12min。 12.水洗、复染、脱水、树胶封片，观察结果。 注意事项 | 其他 | |
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发布于 ： 2021-08-09
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