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Medimabs/Anti-idiotypic monoclonal antibody (1/59-2) to monoclonal antibody against Okadaic acid - Purified/MM-76405 --
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Medimabs/Anti-idiotypic monoclonal antibody (1/59-2) to monoclonal antibody against Okadaic acid - Purified/MM-76405 --
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  • ProductName
    Anti-idiotypicmonoclonalantibody(1/59-2)tomonoclonalantibodyagainstOkadaicacid-Purified
  • Host
    Mouse
  • Clonality
    Monoclonal
  • CloneID
    1/59-2
  • DataSHEET
    ViewDatasheet(PDF)
  • Isotype
    IgG1kappa
  • Conjugation
    None
  • Reactivity
    mAb235
  • Specificity
    wholeantibody
  • Format
    5mg
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根据肿瘤的分子特征进行靶向治疗,为进展期非小细胞肺癌(nonsmall cell lung cancer,NSCLC)患者的治疗提供了新机会。85%的NSCLC中具有表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的过表达,且与预后不良有关。因此,针对EGFR进行靶向性治疗有望改善NSCLC患者的预后。针对EGFR的靶向性治疗,最直接的就是通过单克隆抗体封闭EGFR。加之EGFR是跨膜酪氨酸激酶受体家族的成员 查看更多>
艾美捷科技有限公司在发布的MICU1 单克隆抗体 | MICU1 Monoclonal Antibody供应信息,浏览与MICU1 单克隆抗体 | MICU1 Monoclonal Antibody相关的产品或在搜索更多与MICU1 单克隆抗体 | MICU1 Monoclonal Antibody相关的内容。 查看更多>
北京嘉美纽诺生物科技有限公司在发布的抗体的定制:单克隆抗体制备服务供应信息,浏览与抗体的定制:单克隆抗体制备服务相关的产品或在搜索更多与抗体的定制:单克隆抗体制备服务相关的内容。 查看更多>
缺氧诱导因子1α单克隆抗体HIF-1Alpha278450上海沪震实业有限公司缺氧诱导因子1α 单克隆抗体 查看更多>
抗A、抗B血型定型试剂(单克隆抗体),抗A:浅蓝色澄明液体。抗B:浅黄色澄明液体。专用于鉴定人ABO血型。包装抗A、抗B各1支/盒塑料瓶。... 查看更多>
2018-12-26
(一)杂交瘤细胞的大量繁殖 克隆化的细胞可以在体外进行大量培养,收集上清液而获得大量的单一的克隆化抗体。不过体外培养法得到的单克隆抗体有限,其不能超过特定的细胞浓度,且每天要换培养液。而体内杂交瘤细胞繁殖可以克服这些限制。杂交瘤细胞具有从亲代淋巴细胞得来的肿瘤细胞的遗传 查看更多>
抗A、抗B血型定型试剂(单克隆抗体),抗A:浅蓝色澄明液体。抗B:浅黄色澄明液体。专用于鉴定人ABO血型。包装抗A、抗B各1支/盒塑料瓶。... 查看更多>
相互竞争的研究团队正在接近一种新类型药物,这类药物可通过中断被认为造成头痛的事件链而预防慢性偏头痛。这类药物以降钙素相关基因肽 (CGRP)为靶点。2 期临床试验的结果显示,这些药物可在相当比例的头痛患者中有效地预防偏头痛。「这是非常令人兴奋的,因为这将是一种不可能有多种副作用的偏头痛预防,对于那些没有好的治疗的人来说将是非常有效的,」Ward 查看更多>
河豚毒素单克隆抗体TTX(5E7)278450上海沪震实业有限公司河豚毒素单克隆抗体 查看更多>
用于疾病诊断方面 利用单抗进行疾病的诊断现已被广泛应用。(1)可用于检测淋巴细胞表面分子,以区分不同分化阶段的淋巴细胞,用于鉴别淋巴细胞。(2)可用于鉴定病原体,准确诊断感染性疾病。将病原体的抗原分离,再同骨髓瘤细胞杂交建立相应的杂交瘤细胞株,分泌单克隆抗体,可以同病原体发生特异的抗原-抗体反应,通过免疫荧光试验或ELISA试验对疾病进行诊断。(3)可以用于肿瘤的诊断和分型。某些单抗具有在肿瘤部位蓄积的特性,可用于肿瘤的诊断。目前已批准... 查看更多>
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单克隆抗体制备的宿主动物一般选用BALB/c小鼠,鼠单抗的应用范围相当广泛,一些国内外公司均开发出了兔的单克隆抗体制备技术。
免疫原分为可溶性抗原和颗粒性(细胞)抗原,用无菌盐水稀释并与佐剂混合,腹腔注射抗原与佐剂彻底混匀后形成的稳定乳状液,在免疫原提供持续的免疫应答基础上进行加强免疫
周期第1天 采血0.2ml(获得0.1ml免疫前血清)
第一次免疫(抗原加弗氏完全佐剂)
第14天 第二次免疫(抗原加弗氏不完全佐剂)
第21天 采血和ELISA检测
第35天 第三次免疫(抗原加弗氏不完全佐剂)
第42天 采血和ELISA检测
第56天 第四次免疫(抗原溶于PBS或盐水)
第61天 细胞融合向左转|向右转
这好像是高中生物吧
先说骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合,共有3种情况,B淋巴和B淋巴融合,B淋巴和骨髓瘤细胞融合,骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞融合
第一次筛选是为了筛选出能无限增殖的细胞,这只有两种情况:
1、经过免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的融合细胞
2、骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞的融合细胞
第二次是为了筛选出能产生单克隆抗体的细胞
那么只可能是,经过免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的融合细胞。
所以有两次筛选
单克隆抗体是由淋巴细胞杂交瘤产生的、只针对复合抗原分子上某一单个抗原决定簇的特异性抗体。
单克隆抗体这项新技术从根本上解决了在抗体制备中长期存在的特异性和可重复性问题,可用于探讨: ①蛋白质的精细结构;②淋巴细胞亚群的表面新抗原;③组织相容性抗原;④激素和药物的放射免疫(或酶免疫)分析;⑤肿瘤的定位和分类;⑥纯化微生物和寄生虫抗原;⑦免疫治疗和与药物结合的免疫-化学疗法 (“导弹”疗法,利用单克隆抗体与靶细胞特异性结合,将药物带至病灶部位.。
因此,单克隆抗体可直接用于人类疾病的诊断、预防、治疗以及免疫机制的研究,为人类恶性肿瘤的免疫诊断与免疫治疗开辟了广阔前景。
兔抗抗体源兔针蛋白抗体

体组织标本抗选种兔抗鼠抗类抗抗体

二抗针抗源抗兔抗二抗要选鼠抗兔或者羊抗兔类抗兔抗体(注意句抗兔抗基础抗鼠抗二抗要选抗鼠抗体)
单克隆抗体制备的技术123
relinlq-cqmu2021-07-23

求助:看了许多文献,对于免疫小鼠的抗原剂量以及方法各不相同,所以发帖问问大家制备单抗的详细过程,谢谢大家

有一些问题想向蚂蚁淘的前辈请教,我的肽段只有9个氨基酸,想用它免疫BALB/C小鼠制备单抗,目前觉得可行的增强免疫原性的方案:1.KLH-Cys-九个氨基酸 2.FMOC法合成以赖氨酸为骨架的MAP8分支,连接我的8条肽段。 我想请教的问题,①上述两种方法是否可行。能否较好的增强其免疫原性,达到抗体制备的效果?②有什么比较好的佐剂能与上述两法连用,增强免疫效果?③我用上述两法,是否需要加大我的抗原剂量,一般为10-50ug,我是否需要从50或100或150开始免疫?④针对我这种情况,三免时,需要加佐剂还是用生理盐水就可以?
希望得到前辈们的回答。非常感谢!




★☆★★☆★★☆单克隆抗体技术相关总结与讨论专帖★☆★★☆★★☆


一、前言

1975年,Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合,形成的杂交细胞既可产生抗体,又可无限增殖,从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元,也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。

制备单克隆抗体包括动物免疫、细胞融合、选择杂交瘤、检测抗体、杂交瘤细胞的克隆化、冻存以及单克隆抗体的大量生产,要经过几个月的一系列实验步骤。

虽然单抗技术已经非常成熟,但是由于其经济价值,仍然有很多人在从事这项研究,而且其中也会遇到很多这样那样大问题。我本人就是其中一个,由于是第一次做单抗,所以过程中遇到了很多困难,终于在前几天得到了几株阳性克隆。

鉴于此,我将单克隆抗体制备的整个过程贴出来,同时搜索了园子里面一些战友的求助帖以及一些经典的应助帖,希望能对将要或是正在从事这项研究的战友们有些帮助。

实验外包单克隆抗体在现代生物医学中的作用越来越大,它不仅被广泛应用于生化和免疫检测,而且治疗癌症和自体免疫疾病的单抗药物也逐渐批准上市。因此单抗的制备和筛选具有其内在的重要性。

动物免疫

取4只6周龄雌性BALB/c小鼠皮下注射抗原(20μg/只),第一次免疫与等量弗氏完全佐剂乳化,0.2mL/只;两周后进行第二次免疫,抗原与等量弗氏不完全佐剂乳化,皮下注射,0.2mL/只;两周后进行第三次免疫,免疫方法及剂量同第二次免疫。第三次免疫一周后,小鼠眼眶采血测其效价,第三次免疫两周后,选择效价最高的小鼠,用不加佐剂的抗原加强免疫,3d后取小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合。

细胞融合

1骨髓瘤细胞的准备

选择生长状态良好的SP2/0细胞,覆盖瓶底80%时弃上清,以不完全培养基洗涤一次后,用l0mL不完全培养基将细胞轻轻吹下。

2脾淋巴细胞的准备

取加强免疫后3天的小鼠,摘除眼球采血作为阳性血清;颈脱臼将小鼠致死,用75%酒精消毒体表10min,随即放入超净台内的解剖板上,腹部朝上,四肢固定;无菌打开腹腔取出脾脏,用基础培养基洗涤,并仔细去掉周围附着的结缔组织;随后将脾脏转移到另一个盛有DMEM的平皿中。用研磨棒挤压,使脾细胞充分释放,制成脾细胞悬液。

3饲养细胞的制备

取一只成熟健康的ICR小鼠,摘眼球采血作为阴性血清,颈脱臼处死;体表消毒和固定后,暴露腹膜,酒精棉球消毒腹膜;用l0mL注射器,12#针头,吸取10mLHAT培养基到腹腔,右手固定注射器,左手持酒精棉球轻轻按摩腹部,抽回腹腔内液体,注入己准备好的容器中。

4融合

将上述制备的骨髓瘤细胞与脾细胞混合于一支50mL的带盖的融合管中,1000rpm离心10min,弃上清。将融合管置于手掌中,轻轻摩擦底部,使两种细胞充分混匀;在37°C水浴中45s内缓慢加入1mL预热的PEG-1500到融合管中,边加边轻轻摇匀;随即在90s内先慢后快滴加30mL37°C预热的不完全DMEM培养基,使PEG稀释而失去作用,37°C静置10min,1000rpm离心10min;弃上清,用60mLHAT培养基轻轻悬浮沉淀细胞,再加入适量的腹腔巨噬细胞;分装于96孔细胞培养板,然后将培养板置37°C6%CO2培养箱内培养;5d后用新鲜的HAT培养基换出一半培养基;10d后用预热的HT换出HAT;观察杂交瘤细胞的生长情况,待其细胞培养上清变黄或克隆分布至孔底面积的1/10以上时,吸取适量细胞上清进行ELISA检测,两次检测结果为阳性设为阳性克隆孔。

杂交瘤细胞的克隆化及建株

采用有限稀释法对连续两次检测为阳性的细胞株进行克隆化。阳性细胞计数,取100个细胞放入5mL含饲养细胞的培养液中,即20个细胞/mL,100μL/孔滴加于96孔细胞培养板,即每孔1个细胞:再将余下的细胞悬液倍比稀释,细胞数为10个/mL,100μL/孔滴加于96孔细胞培养板,即每孔0.5个细胞。第8~9d时,肉眼可见细胞克隆,对出现单个细胞克隆的孔再按筛选阳性杂交瘤细胞的间接ELISA方法进行筛选。连续进行三次以上亚克隆,判为阳性的细胞株扩大培养,建株冻存。


单克隆抗体制备过程中,多种抗体都是针对同一个抗原的,应该都能识别的啊,阳性是指识别达到一定的量吗,还是其他的抗体一点都不能识别了?

最近我想筛选一个针对膜蛋白的单克隆抗体,这个抗体的参考文献中提到的一种筛选方法是用DNA质粒直接免疫小鼠,然后再脾融合筛选出来的。这里有几个问题想向大家请教一下:

1.DNA效果比蛋白差很远,但是膜蛋白的抗体有可能是针对空间构象的,能起效的抗体位点很少,所以要在免疫阶段保证抗体多样性和特异性。看参考文献的剂量都是25ug或者50ug这种比较低的剂量,免疫次数2-3次,最后在融合前用细胞加免一次。而我设计的实验组是100ug剂量,免疫了4-5次,我这样是不是筛不出来特异性的抗体了?

2.DNA筛到的阳性抗体,可能亲和力低,如果不想筛到IgM的抗体,DNA免疫从什么时候开始由IgM转换成IgG的?抗体多样性在免疫的什么阶段比较高?


单克隆抗体制备的原理:B淋巴细胞在抗原的刺激下,能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力、B细胞的这种能力和量是有限的,不可能持续分化增殖下去,因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的、将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞,再进一步克隆化,这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的能力,又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞的能力,将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获得大量的高效价、单一的特异性抗体.这种技术即称为单克隆抗体技术。单克隆抗体制备的过程:免疫动物免疫动物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠,按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官,刺激相应B淋巴细胞克隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏B淋巴细胞。细胞融合采用二氧化碳气体处死小鼠,无菌操作取出脾脏,在平皿内挤压研磨,制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合,并加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下,各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合,形成杂交瘤细胞。选择性培养选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞,一般采用HAT选择性培养基。在HAT培养基中,未融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶,不能利用补救途径合成DNA而死亡。 未融合的淋巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶,但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。 只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶,并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性,因此能在HAT培养基中存活和增殖。杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞,只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞,因此,必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快速、特异的免疫学方法,筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞,并进行克隆扩增。经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后,及时进行冻存。单克隆抗体的大量制备单克隆抗体的大量制备主要采用动物体内诱生法和体外培养法。(1)体内诱生法 取BALB/c小鼠,首先腹腔注射0.5ml液体石蜡或降植烷进行预处理。1-2周后,腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖,并产生和分泌单克隆抗体。约1-2周,可见小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水,即可获得大量单克隆抗体。(2)体外培养法 将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养。在培养过程中,杂交瘤细胞产生并分泌单克隆抗体,收集培养上清液,离心去除细胞及其碎片,即可获得所需要的单克隆抗体。但这种方法产生的抗体量有限。各种新型培养技术和装置不断出现,大大提高了抗体的生产量。单克隆抗体制备的意义:用于以下各种生命科学实验并具有医用价值(1)沉淀反应:Precipitation reaction(2)凝集实验:haemaglutination(3)放射免疫学方法检测免疫复合物(4) 流式细胞仪:用于细胞的分型和细胞分离.(5)ELISA 等免疫学检测(6)BIAcore biosensor:检测Ab-Ag或与蛋白的亲和力 .(7)免疫印记(western blotting)(8) 免疫沉淀:(9) 亲和层析:分离蛋白质(10) 磁珠分离细胞(11)临床疾病的诊断和治疗;