
Esposito, L., Hunter, K., Clark, J., Rainbow, D., Stevens, H., Denesha, J., Duley, S., Dawson, S., Coleman, G., Nutland, S., Bell, G., Moran, C., Pekalski, M., Todd, J. and Wicker, L. (2014). Investigation of Soluble and Transmembrane CTLA-4 Isoforms in Serum and Microvesicles. J Immunol, 193(2), 889-900. PMID: 24928993
Sekiya, T. and Takaki, S. (2019). RGMB enhances the suppressive activity of the monomeric secreted form of CTLA-4. Sci Rep, 9(1). PMID: 31061392
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请问:同型对照应该怎么设?
不买专门的IgG2Bisotypecontrol,而用其他的抗体,
比如mouseanti-humanCD117,Igclass也是IgG2B,可以吗?
选用和特异性抗体同种亚型的,同样荧光素标记的抗体,采用同样的染色步骤染同样浓度的细胞。然后上机检测。如果细胞有非特异性的结合,那同型对照的荧光强度可能会比未染色的阴性对照要高一些。
同型对照只用于那种阳性和阴性之间没有明确分解的情况。如果阳性细胞群非常清楚,是不需要同型对照的。另外,在多色同染的情况下,也不采用同型对照,而是采用FMO(fluorensence minus one)对照。
另外,对于同型对照的使用,也有很多反对意见。就算是同型抗体,也可能会有不同的亲和力,并不一定就能真实反应非特异性的结合。
英 ['aɪsətaɪp]美 ['aɪsəˌtaɪp]
n. 同型动物(或植物),图形文字,象征性图像;同位型;同模;同号模式
同型对照(阴性对照)管:A同型+B同型+C同型
单阳性对照
A检测管:A+B同型+C同型
B检测管:B+A同型+C同型
C检测管:C+A同型+B同型
不存在荧光重叠的两个抗体不需要调节补偿。
样本为PBMC,想用三色标记Treg细胞,分别为CD4-PECY,CD25-Fitc,Foxp3-PE,想知道如何设置荧光补偿,用的是BD的流式仪,1、是设置阴性管一个,单阳性管每种一个,样品管一个么?
荧光素强度依次为PE, PECY5 APC FITC, PE最强,FITC最弱。 所以,建议抗体组合为:
Foxp3-PE,CD4-FITC,CD25-PECy5.5或者CD25-APC。
同时购买三个相应的同型对照抗体。
样品管设置如下:
1. cell + FITC-isotype + Pecy5.5( or APC)-isotype + PE-isotype
2. Cell + FITC-isotype + CD25-mAb + PE-isotype
3. Cell + PE-mAb + FITC-isotype + Pecy5.5( or APC)-isotype
4. Cell + CD4-FITC + Foxp3-PE + CD25 -PECy5.5( or APC)。 [这一管的数据可以拿来分析用]。
在充分了解调整电压和补偿原理的基础上,也可以做一些简化。如果不太懂,就按照这个来。其中Foxp3的抗体和同型对照抗体都是在固定破膜以后再加,不是与CD4或者CD25同时加。

