
ProductType | ControlLysate |
Units | 100µl |
Application | WesternBlotting |
BackgroundEndothelialcelldifferentiationgene-2(EDG-2)receptorisahighaffinityreceptorforlysophosphatidicacid(LPA).EDG-2,alsoknownaslysophospholipidreceptorA1,Vzg-1,mrec1.3orGPCR26,likeallotherEDGreceptors,couplemultiple(3ormore)typesofGproteinsandtransducedecreasesinc[AMP]ithroughGiandincreasesin[Ca2+]ibyaugmentingphospholipaseCthroughGq/11andbeta/gammadimersandbyinductionofPI3kinase,p125FAK,phospholipaseDbyactivatingrhothroughG12/13.HumanEDG-2ispresentinhighlevelsonoligodendrocytesandcertainhumanmalignantTcelllines.EDG-2receptors(withEDG-4)mayplayaroleinprotectingcardiomyocytesfromapoptosisinducedbyhypoxiaandandrenergicstimulation.
Synonyms:EDG-2transfectedcelllysate
Product
ProductForm:Unconjugated
Formulation:Providedin10%glycerol,0.063MTris-HCl(pH6.8),2%SDSand0.002%bromophenolblue,5%2-mercaptoethanol
Concentration:Seevialforconcentration
ApplicationsForuseasapositivecontrolwithExalpha"sEDG2(LPA1)polyclonalantibody(Cat.No.C174P)forWesternblotanalysis.
FunctionalAnalysis:WesternBlotting
StorageProductshouldbestoredat-20ºC.Aliquottoavoidfreeze/thawcycles
ProductStABIlity:Productsarestableforoneyearfrompurchasewhenstoredproperly
ShippingConditions:Shipatambienttemperature,freezeuponarrival
CautionThisproductisintendedFORRESEARCHUSEONLY,andFORTESTSINVITRO,notforuseindiagnosticortherapeuticproceduresinvolvinghumansoranimals.Itmaycontainhazardousingredients. PleaserefertotheSafetyDataSheets(SDS)foradditionalinformationandproperhandlingprocedures.Disposeproductremaindersaccordingtolocalregulations.Thisdatasheetisasaccurateasreasonablyachievable,butNordic-Mubioacceptsnoliabilityforanyinaccuraciesoromissionsinthisinformation.
ProteinReference(s)
DatabaseName:UniProt
Accessionnumber:Q92633
SafetyDatasheet(s)forthisproduct:NM_Glycerol/wp-content/uploads/SDS/SDSAntibodieswithglycerolNordic-MUbio.pdf
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请问:同型对照应该怎么设?
不买专门的IgG2Bisotypecontrol,而用其他的抗体,
比如mouseanti-humanCD117,Igclass也是IgG2B,可以吗?
选用和特异性抗体同种亚型的,同样荧光素标记的抗体,采用同样的染色步骤染同样浓度的细胞。然后上机检测。如果细胞有非特异性的结合,那同型对照的荧光强度可能会比未染色的阴性对照要高一些。
同型对照只用于那种阳性和阴性之间没有明确分解的情况。如果阳性细胞群非常清楚,是不需要同型对照的。另外,在多色同染的情况下,也不采用同型对照,而是采用FMO(fluorensence minus one)对照。
另外,对于同型对照的使用,也有很多反对意见。就算是同型抗体,也可能会有不同的亲和力,并不一定就能真实反应非特异性的结合。
英 ['aɪsətaɪp]美 ['aɪsəˌtaɪp]
n. 同型动物(或植物),图形文字,象征性图像;同位型;同模;同号模式
同型对照(阴性对照)管:A同型+B同型+C同型
单阳性对照
A检测管:A+B同型+C同型
B检测管:B+A同型+C同型
C检测管:C+A同型+B同型
不存在荧光重叠的两个抗体不需要调节补偿。
样本为PBMC,想用三色标记Treg细胞,分别为CD4-PECY,CD25-Fitc,Foxp3-PE,想知道如何设置荧光补偿,用的是BD的流式仪,1、是设置阴性管一个,单阳性管每种一个,样品管一个么?
荧光素强度依次为PE, PECY5 APC FITC, PE最强,FITC最弱。 所以,建议抗体组合为:
Foxp3-PE,CD4-FITC,CD25-PECy5.5或者CD25-APC。
同时购买三个相应的同型对照抗体。
样品管设置如下:
1. cell + FITC-isotype + Pecy5.5( or APC)-isotype + PE-isotype
2. Cell + FITC-isotype + CD25-mAb + PE-isotype
3. Cell + PE-mAb + FITC-isotype + Pecy5.5( or APC)-isotype
4. Cell + CD4-FITC + Foxp3-PE + CD25 -PECy5.5( or APC)。 [这一管的数据可以拿来分析用]。
在充分了解调整电压和补偿原理的基础上,也可以做一些简化。如果不太懂,就按照这个来。其中Foxp3的抗体和同型对照抗体都是在固定破膜以后再加,不是与CD4或者CD25同时加。

