Description:
BacPAK6Sec+linearizedbaculovirusDNAisthelatestbaculovirusexpressionsystemtocomeoutoftheOETlabs.BytakingtheoriginalBacPAK6systemandgeneticallymodifyingit,BacPAK6Sec+isabletoincreasetheyieldofrecombinantproteinandtheeaseofharvesting.
BacPAK6Sec+containsadeletionofthechitinasegene(chiA)fromtheoriginalBacPAK6viralbackbone.
Chitinasehasbeenshownbybothconfocalandelectronmicroscopytolocatetotheendoplasmicreticulum,whereitisdenselypackedinaparacrystallinearray,whichseverelyinhibitsthefunctionandefficacyofthesecretorypathway.BydeletingthechiA,secretionoftargetproteinsintothecytoplasmisincreased,greatlyenhancingtheyieldofharvestablerecombinantprotein.
TheconceptofdeletingthechiAgenecameafterthesuccessoftheflashBAC™platformthatutilizesthesamegeneticdeletionforincreasedrecombinantproteinyield.TofindoutmoreabouttheflashBAC™system,clickhere.
BacPAK6linearDNAistheoriginalconvenient,highlyefficientreagentforgeneratingrecombinantbaculovirusexpressionvectors. Itcomprisesamodified Autographacalifornica nucleopolyhedrovirus(AcMNPV)genomewith lacZ insertedinplaceofthenativepolyhedringenecodingregionforconvenientblue/whiteselection.
DigestionofBacPAK6DNAatthreesiteswithBsu36Iremoves lacZ andpartofORF1629,whichisanessentialAcMNPVgene. ThelinearvirusDNAisunabletoinitiateareplicationcycleininsectcells.
Co-transfectionofinsectcellswithlinearBacPAK6DNAandacompatIBLetransfervectorcontainingthecompleteORF1629andaforeigngeneofinterestresultsinrecombinationandrestorationofthecircular,infectiousvirusgenome. Over95%ofthevirusderivedfromtheco-transfectioncomprisesrecombinantvirus. Usually,asingleplaqueassaytitrationincubatedwithX-galandcounterstainedwithneutralredissufficienttodifferentiateparentalbluefromrecombinantwhite(colourless)plaques. ThesecanbereADIlyisolatedandamplifiedtoworkingstocksofpurifiedrecombinantvirusinafewdays.
TheBacPAK6Sec+reagentfromOETLtdcomprisestransfection-ready,linearized(Bsu36I-digested)virusDNA. Itisavailablein5,24and96reactionpacks. Forbulkpurchases,pleasecontactusoninfo@oetltd.com.
WeofferapromotionaldealonallBacPAK6productstoincludeafree3reactionflashBAC™kittohelpyoudecideifmakingtheswitchistherightchoiceforyourlab.
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我想在体外培养的细胞中，加入PD-L1重组蛋白，激活PD-L1:PD-1通路，但我没能查到相关的文献，不清楚PD-L1重组蛋白的用量。请问各位有相关的经验吗？或者阅读过相关的文献？
植物：抗虫、抗病、抗除草剂植物培育、改良作物品质（富含赖氨酸的玉米）
动物：提高生长速度、生产药物蛋白、器官移植、乳腺生物反应器
微生物：疫苗
基因治疗等等
基因重组只是控制同一性状表达不同而已，但是它不会改变性状的基本情况。如：控制眼睛颜色的基因，亲本的基因重组之后可能亲本为黑色，子代便为蓝色。但绝对不会控制眼睛颜色的基因在重组之后就变成控制耳朵的基因。
各位业内前辈，我们正在考虑引进符合GMP认证标准的CHO细胞系，用于表达可做疫苗生产的重组蛋白类。目前已有符合标准信息的是Thermofisher的CHO-S悬浮培养细胞资料，希望能再多了解一些和这株细胞类似的其他公司符合GMP标准的生产株细胞做个比较。谢谢指教！
防止包涵体常用的方法：使用中等强度或弱的启动子，低温培养，有限的诱导，优化培养基条件，进行融合表达，与伴侣分子和折叠酶共表达，表达定位于不同的空间，选择突变的菌株或其他的原核表达系统。
增加蛋白质折叠的添加剂：添加剂可能的作用机制甘油对蛋白质具有优先的水合作用/增加黏度L-精氨酸两亲分子/渗压剂甘氨酰甜菜碱/山梨糖醇 对蛋白质具有优先的水合作用阿拉伯聚糖 增加黏度木糖醇 增加黏度乙醇 调节极性DMSO 调节极性
两性离子表面活性剂（Zwitterionic detergents）保护非极性表面Triton X-100保护非极性表面硫代甜菜碱类物质（NDSBs）保护非极性表面蔗糖/海藻糖对蛋白质具有优先的水合作用/增加黏度N-氧化三甲胺（TMAO）对蛋白质具有优先的水合作用/渗压剂三氟乙醇（TFE）促进二级结构的形成低浓度盐酸胍使部分折叠的中间体不稳定/增加天然构象蛋白质的溶解性低浓度尿素使部分折叠的中间体不稳定/增加天然构象蛋白质的溶解性配体稳定天然结构状态聚乙二醇保护熔球体（molten globule）/增加黏度需要强调的是在培养细菌时，在培养基中加入5％的乙醇可以起到一定的防止包涵体产生的作用。
对比另外一篇文章：
减少包涵体形成的策略降低重组菌的生长温度，降低培养温度是减少包涵体形成的最常用的方法，较低的生长温度降低了无活性聚集体形成的速率和疏水相互作用，从而可减少包涵体的形成。2. 添加可促进重组蛋白质可溶性表达的生长添加剂，培养E.coli时添加高浓度的多醇类、蔗糖或非代谢糖可以阻止分泌到周质的蛋白质聚集反应，在最适浓度范围内添加这些添加剂不会影响细胞的生长、蛋白质的合成或运输，其它促重组蛋白质可溶性表达的生长添加剂还有乙醇（诱导热休克蛋白的表达）、低分子量的巯基或二硫化合物（影响细胞周质的还原态，从而影响二硫键的形成）和NaCl。3. 供给丰富的培养基，创造最佳培养条件，如供氧、pH等。
而没答案
帮帮我
给我提供答案
考研细胞的题答案
