商品信息
联系客服
郑重提醒：
无质量问题不接受退换货，下单前请仔细核对信息。
下单后请及时联系客服核对商品价格，订单生效后再付款。
Adipogen/NF-κB (p65) (human) (rec.) (His) (highly active)/AG-40T-0020-C002/2 µg
免费咨询热线
4000-520-616
| Product Details | |
|---|---|
| Synonyms | Nuclear Factor NF-κB p65 Subunit; Transcription Factor p65; RELA |
| Product Type | Protein |
| Properties | |
| Source/Host | Sf21 cells |
| Sequence | Human NF-κB (p65) is fused to a His-tag. |
| Crossreactivity | Human |
| Biological Activity |
~1ng is required for high mobility shift assay. ~5ng are required for reconstituted transcription assays. |
| Purity | ≥95% (SDS-PAGE) |
| Concentration | Lot dependent (0.2-1.5mg/ml) |
| Formulation | Liquid. In 50mM TRIS-HCl, pH 7.5, containing 100mM sodium chloride, 0.2% NP-40, 50mM imidazole and 10% glycerol. |
| Other Product Data |
UniProt ID Q04206: NF-κB (human) (p65 subunit) |
| Shipping and Handling | |
| Shipping | DRY ICE |
| Short Term Storage | -20°C |
| Long Term Storage | -80°C |
| Handling Advice |
After opening, prepare aliquots and store at -80°C. Avoid freeze/thaw cycles. |
| Use/Stability | Stable for at least 6 months after receipt when stored at -80°C. |
| Documents | |
| MSDS |
 Download PDF |
| Product Specification Sheet | |
| Datasheet |
Download PDF |
NF-κB is a pleiotropic transcription factor present in almost all cell types and is the endpoint of a series of signal transduction events that are initiated by a vast array of stimuli related to many biological processes such as inflammation, immunity, differentiation, cell growth, tumorigenesis and apoptosis. NF-κB is a homo- or heterodimeric complex formed by the Rel-like domain-containing proteins RELA/p65, RELB, NFKB1/p105, NFKB1/p50, REL and NFKB2/p52. The heterodimeric p65-p50 complex is the most abundant complex. The dimers bind at κB sites in the DNA of their target genes and the individual dimers have distinct preferences for different κB sites that they can bind with distinguishable affinity and specificity.
Different dimer combinations act as transcriptional activators or repressors, respectively. NF-κB complexes are held in the cytoplasm in an inactive state complexed with members of the NF-κB inhibitor (I-κB) family. In a conventional activation pathway, I-κB is phosphorylated by I-κB kinases (IKKs) in response to different activators, subsequently degraded thus liberating the active NF-κB complex which translocates to the nucleus. NF-κB heterodimeric p65-p50 and p65-c-Rel complexes are transcriptional activators. The NF-κB p65-p65 complex appears to be involved in invasin-mediated activation of IL-8 expression. p65 shows a weak DNA-binding site which could contribute directly to DNA binding in the NF-κB complex.
Different dimer combinations act as transcriptional activators or repressors, respectively. NF-κB complexes are held in the cytoplasm in an inactive state complexed with members of the NF-κB inhibitor (I-κB) family. In a conventional activation pathway, I-κB is phosphorylated by I-κB kinases (IKKs) in response to different activators, subsequently degraded thus liberating the active NF-κB complex which translocates to the nucleus. NF-κB heterodimeric p65-p50 and p65-c-Rel complexes are transcriptional activators. The NF-κB p65-p65 complex appears to be involved in invasin-mediated activation of IL-8 expression. p65 shows a weak DNA-binding site which could contribute directly to DNA binding in the NF-κB complex.
Product References
- Transcriptional coactivation of nuclear factor-kappaB-dependent gene expression by p300 is regulated by poly(ADP)-ribose polymerase-1: P.O. Hassa, et al.; J. Biol. Chem. 278, 45145 (2003)
- Arginine methyltransferase CARM1 is a promoter-specific regulator of NF-kappaB-dependent gene expression: M. Covic, et al.; EMBO J. 24, 85 (2005)
- Acetylation of poly(ADP-ribose) polymerase-1 by p300/CREB-binding protein regulates coactivation of NF-kappaB-dependent transcription: P.O. Hassa, et al.; J. Biol. Chem. 280, 40450 (2005)
- MYBBP1a is a novel repressor of NF-κB: H. R. Owen, et al.; J. Mol. Biol. 366, 725 (2007)
- Oxidized guanine base lesions function in 8-oxoguanine DNA glycosylase-1-mediated epigenetic regulation of Nuclear Factor κB-driven gene expression: L. Pan, et al.; J. Biol. Chem. 291, 25553 (2016)
- OGG1-DNA interactions facilitate NF-κB binding to DNA targets: L. Pan, et al.; Sci. Rep. 7, 43297 (2017)
蚂蚁淘电商平台
ebiomall.com
ebiomall.com
公司简介
蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁
淘搜索全球供应信息，找到合适的产品后在蚂蚁淘下单，然后蚂蚁淘的海外买手进行跨境采购、
运输到中国口岸，最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
蚂蚁淘承诺
正品保证： 全球直采 在线追溯
蚂蚁淘所有产品都是自运营的，我们已经跟国外多家厂方建立品牌推广合作关系, 获得对方的支持和授权； 同时客户可以通过订单详情查看到货物从厂方至客户的所有流程， 确保货物的来源； 正规报关，提供13%增值税发票。
及时交付： 限时必达 畅选无忧
蚂蚁淘的运营团队都是有着多年经验的成员，他们熟悉海外采购、仓储物流、报关等环节； 同时通过在线的流程监控，蚂蚁淘的进口速度比传统企业提高了50%以上， 部分产品甚至能做到7-10天到货，即蚂蚁淘的“时必达”服务。
轻松采购： 在线下单 简单省事
蚂蚁淘的价格是真实透明的，并且具有很大的价格优势，不需要繁杂的询价比价； 报价单与合同可以直接在线生成或打印；就像在京东购物一样， 您的鼠标点击几 次即完成在蚂蚁淘的采购，订单详情会告诉您所有进程。
售后申请： 耐心讲解 优质服务
蚂蚁淘提供的产品在使用过程中如因产品质量问题有售后需求时， 您可通过我的订单提交您的“申请售后”， 蚂蚁淘产品顾问会第一时间为您处理， 在售后服务过程中如遇到问题也可致电蚂蚁淘客服热线：4000-520-616。
2021-09-01
上海泽叶生物科技有限公司在发布的转录激活因子6(ATF6)重组蛋白供应信息，浏览与转录激活因子6(ATF6)重组蛋白相关的产品或在搜索更多与转录激活因子6(ATF6)重组蛋白相关的内容。 查看更多
>
2021-09-20
上海沪震实业有限公司在发布的NPC2重组蛋白供应信息，浏览与NPC2重组蛋白相关的产品或在搜索更多与NPC2重组蛋白相关的内容。 查看更多
>
Gel-elongation assay for type II fatty acid synthesisSrinivas Kodali Andrew Galgoci Sheo Singh Dr. Jun Wang Dr., jun_wang2@merck.com, Merck Research Laboratori 查看更多
>
2018-12-26
During this week you will analyze the SDS PAGE and determine the protein content in the lyophilized fraction of lipoproteins gravimetrically. You will also ext 查看更多
>
2021-09-07
上海信裕生物科技有限公司在发布的AXL受体酪氨酸激酶(AXL)重组蛋白 供应信息，浏览与AXL受体酪氨酸激酶(AXL)重组蛋白 相关的产品或在搜索更多与AXL受体酪氨酸激酶(AXL)重组蛋白 相关的内容。 查看更多
>
2021-08-02
生工生物工程（上海）股份有限公司在发布的哺乳动物细胞表达系统重组蛋白表达与纯化供应信息，浏览与哺乳动物细胞表达系统重组蛋白表达与纯化相关的产品或在搜索更多与哺乳动物细胞表达系统重组蛋白表达与纯化相关的内容。 查看更多
>
2021-09-21
上海柯雷生物科技有限公司在发布的山梨醇脱氢酶(SDH)重组蛋白供应信息，浏览与山梨醇脱氢酶(SDH)重组蛋白相关的产品或在搜索更多与山梨醇脱氢酶(SDH)重组蛋白相关的内容。 查看更多
>
2021-07-20
2012生物医药年会(疫苗&重组蛋白) 查看更多
>
2018-08-07
一般认为，在几乎所有的后生动物（metazoans), 尤其是脊椎动物中，都普遍存在选择性剪接，这就为从单基因产生多种功能性多肤提供了一'条经济的途径。根据 EST(expressedsequencedtag，表达序列标签）序列定位和对合成的mRNA (resultant mRNA) 家族进行图谱分析的结果，估计约有 35% 的人类基因能产生多种不同的剪接产物。 查看更多
>
2021-08-29
上海联迈生物工程有限公司在发布的信号素3B(SEMA3B)重组蛋白供应信息，浏览与信号素3B(SEMA3B)重组蛋白相关的产品或在搜索更多与信号素3B(SEMA3B)重组蛋白相关的内容。 查看更多
>
2016-11-21
重组蛋白A预装柱/填料（技术指标：每毫升rProtein G结合30-55mg人血清IgG，22-45mg兔IgG /ml填料，4-12mg鼠血清IgG/ml填料，4-13是由广州洁特生物过滤股份有限公司代理或销售的JET BIOFIL品牌的试剂，产品来源于中国。广州洁特生物过滤股份有限公司是中国最权威的重组蛋白A预装柱/填料（技术指标：每毫升rProtein G结合30-55mg人血清IgG，22-45mg兔IgG /ml填料，4-12mg鼠血清IgG/ml填料，4-13试剂销售服务商之一，在广州等地方 查看更多
>
2021-07-16
Source: Pichia. PastorisMolecular Weight: Recombinant OPG/Fc contains 412 amino acid residues, including 180 residues from mature OPG (a.a 22-201) and 232 residues from the Fc protein of human IgG1, and has a calculated ... 查看更多
>
常见问题
蚂蚁淘所售产品均为正品吗？
蚂蚁淘的创始人兼CEO是钟定松先生，具有十年的从业经验，在业界享有良好的口碑；
Ebiomall是跨境直采平台，我们直接从厂家采购，自己的团队负责国际物流和清关，中间没有第三方，蚂蚁淘承诺所售产品仅为正品，假一罚十。
下单后可以修改订单吗？
未确认状态的订单可以修改，打开“订单详情”页面，点击右上角的“修改订单”即可，若已审核确定，则订单无法修改。
商品几天可以发货？
现货产品付款审核后即可发货,大部分期货产品在3周左右即可到货,提供时必达服务的产品订单审核十天内即可发货。
订单如何取消？
如订单处于未确定状态，进入“我的订单"页面，找到要取消的订单，点击“取消订单”按钮。
可以开发票吗？
本网站所售商品都是正规清关，均开具13%正规发票，发票金额含配送费金额，另有说明的除外。
如何联系商家？
蚂蚁淘任何页面都有在线咨询功能，点击“联系客服”、“咨询”或“在线咨询”按钮，均可咨询蚂蚁淘在线客服人员，
或拨打4000-520-616，除此之外客户可在 联系我们页面找到更多的联系方式。
收到的商品少了/发错了怎么办？
同个订单购买多个商品可能会分为一个以上包裹发出，可能不会同时送达，建议查看订单详情是否是部分发货状态；如未收到，可联系在线客服或者致电4000-520-616。
退换货/维修需要多长时间？
一般情况下，退货处理周期为客户收到产品一个月内（以快递公司显示签收时间为准），包装规格、数量、品种不符，外观毁损、短缺或缺陷，请在收到货24小时内申请退换货；特殊商品以合同条款为准。
商品咨询
可用于重组蛋白GMP生产标准的CHO细胞表达系统推荐 生物制药版...123
西木XYPT2021-08-16
各位业内前辈，我们正在考虑引进符合GMP认证标准的CHO细胞系，用于表达可做疫苗生产的重组蛋白类。目前已有符合标准信息的是Thermofisher的CHO-S悬浮培养细胞资料，希望能再多了解一些和这株细胞类似的其他公司符合GMP标准的生产株细胞做个比较。谢谢指教！
需要大量纯化细胞表达的重组蛋白,但有DNA残余,怎么去除DNA影响123
ralphsxj2021-08-15
用E.coli重组表达了一种蛋白，现在想要大量表达纯化，开始用过滤的方法，因为所需的蛋白和细胞碎片分子量差别很大，但是发现有很多的DNA污染，用什么方法能去掉DNA，而不影响需要的蛋白呢？用Dnase可以吗？
重组蛋白不切除GSTtag有活性,那对测活结果是否带来干扰123
miniswing2018-01-24
重组蛋白不切除GST-tag有活性，那么如果使用带有GST-tag的酶进行测活，对测活结果是否会带来干扰？
关于HPLC用于重组蛋白药的纯度检测方法学 生物制药版论坛123
xuelvsnow2017-12-14
大家好，想请教大家一个关于HPLC方法学的问题。
目前我们做的一个蛋白药，没有标准品，液相建立一个方法只想用于纯度鉴定，不去定量，这个方法所得到的图谱就一个主蛋白峰，面积归一化法相当于100%，现在就这个方法的方法学验证提出下面几点疑问：
1.因为我只做纯度鉴定，这个方法的方法学应该做系统适用性、专属性、检测限、耐用性和精密度这些，还是按照定量的全套加上定量限、线性、范围、准确度这些？
2.纯度鉴定中，我觉得应该对杂质进行定量，但是我们的这个方法只有一个主蛋白峰，几乎没有杂质峰，这样的话这个方法学我应该以什么为标准证明纯度呢？需将样品进行适当的氧化、酸、碱破坏吗？然后证明破坏后主峰能和产生的杂质分开？
3.对应生物蛋白药的杂质，应该属于无法获得的，如果通过强破坏，这个杂质也是不好鉴定的，是不是我只需要知道主峰能和强破坏的降解物分开，就可以说方法建立成功？还是生物药没有必要做这个强破坏，简单的走一下系统适用性、专属性、检测限、耐用性和精密度这样的流程就行？
说的有点乱，主要是自己对这个生物药的HPLC纯度鉴定的方法学，实在是疑惑重重，希望有经验的大侠能帮忙解答下。非常感谢！
大肠杆菌高效表达重组蛋白策略 123
yxiangmind2021-07-30
当蛋白组学，肿瘤细胞生物学正风风火火的开展研究时，蛋白质的高效快速表达显的日见重要。因此选择一种合适的表达蛋白体系很是重要：当然这很多的时候和实验室的条件和偏好有关。下面这篇文章就利用大肠杆菌表达重组......
E.coliExpressionSystems.pdf(136.05k)
E.coliExpressionSystems.pdf(136.05k)
人类摄入红肉致癌证据不足_寻医问药专家频道123
鷡窷〆拧〆2018-03-16
1.在悬浮培养液中培养Sf9细胞，并使之适应无血清培养液。
2.准备旋转培养瓶，用于按比例扩增Sf9细胞，将合适大小的两孔盖连接在转瓶的一个 侧臂，另用一平盖接在另一侧臂。将一段短管（约6英寸或15 cm）装在通气孔中，末端连接一滤器，借助张力器用管索将管子与通气孔和滤器固牢。
3.将一段长管（30~60 cm）连接至进气孔，并在末端连接一滤器，用管索加固，另一段管子连接于滤器的另一端，用管索固牢。管子末端用铝箔封好。
4.将与两孔装置相对的侧壁上的盖子旋转90度以松开，高压灭菌培养瓶1 h。
5.将适应了无血清培养液的细胞接种于经高压灭菌的培养瓶中。将培养瓶装至半
2.准备旋转培养瓶，用于按比例扩增Sf9细胞，将合适大小的两孔盖连接在转瓶的一个 侧臂，另用一平盖接在另一侧臂。将一段短管（约6英寸或15 cm）装在通气孔中，末端连接一滤器，借助张力器用管索将管子与通气孔和滤器固牢。
3.将一段长管（30~60 cm）连接至进气孔，并在末端连接一滤器，用管索加固，另一段管子连接于滤器的另一端，用管索固牢。管子末端用铝箔封好。
4.将与两孔装置相对的侧壁上的盖子旋转90度以松开，高压灭菌培养瓶1 h。
5.将适应了无血清培养液的细胞接种于经高压灭菌的培养瓶中。将培养瓶装至半
包涵体溶解、复性,以及蛋白纯化_重组123
dxy_4zk0fey62021-07-22
大肠杆菌原核表达重组蛋白，表达在包涵体，可是包涵体用8M尿素始终溶解不了，求大神帮助，有没有遇到这样的问题的呀，万分感谢
生物学凝胶作用和用途123
温存迷醉丶覫2018-03-23
生物分子下游纯化的对象一般包括蛋白、酶、重组蛋白、单抗、抗体及抗原、肽类、病毒、核酸等。纯化前首先需要测定生物分子的各物理和化学特性，然后通过实验选择出最有效的纯化流程。
1.测定——分子量、PI
当目标蛋白的物理特性如分子量、PI等都不清楚时，可用PAGE电泳方法或层析方法加以测定。分离范围广阔的Superose HR预装柱很适合测定未知蛋白的分子量。用少量离子交换介质在多个含不同PH缓冲液的试管中，可简易地测出PI，并选择纯化用缓冲液的最佳PH。
2.选择——层析方法
若对目标蛋白的特性或样品成分不太了解，可尝试几种不同的纯化方法：
一 使用最通用的凝胶过滤方法，选择分离范围广阔的介质如Superose、Sephacryl HR依据分子量将样品分成不同组份。
二 用含专一配体或抗体的亲和层析介质结合目标蛋白。亦可用各种活化偶联介质偶联目标蛋白的底物、受体等自制亲和介质，再用以结合目标蛋白。一步即可得到高纯度样品。
三 体积大的样品，往往使用离子交换层析加以浓缩及粗纯化。高盐洗脱的样品，可再用疏水层析纯化。疏水层析利用高盐吸附、低盐洗脱的原理，洗脱样品又可直接上离子交换等吸附性层析。两种方法常被交替使用于纯化流程中。
3.纯化——大量粗品
处理大量原液时，为避免堵塞柱子，一般使用sepharose big beads、sepharoseXL、sepharose fast flow等大颗粒离子交换介质。扩张柱床吸附技术利用多种STREAMLINE介质，直接从含破碎细胞或组织萃取物的发酵液中俘获蛋白。将离心、超滤、初纯化结合为一。提高回收率，缩短纯化周期。
4.纯化——硫酸氨样品
硫酸氨沉淀方法常被用来初步净化样品，经处理过的样本处于高盐状态下，很适合直接上疏水层析。若作离子交换，需先用Sephadex G-25脱盐。疏水层析是较新技术，随着介质种类不断增多，渐被融入各生产工艺中。利用Hitrap HIC Test Kit 和RESOURCE HIC Test Kit可在八种疏水介质中选择最适合介质及最佳的纯化条件。低盐洗脱的样品可稍加稀释或直接上其它吸附性层析。
5.纯化——糖类分子
固化外源凝订素如刀豆球蛋白、花生、大麦等凝集素，可结合碳水化合物的糖类残基，很适合用作分离糖化细胞膜组份、细胞、甚至亚细胞细胞器，纯化糖蛋白等。两种附上外源凝集素的Sepharose 6MB亲和层析介质，专为俘获整个细胞或大复合物，如膜囊等。
6.纯化——膜蛋白
膜蛋白分离常使用去污剂以保持其活性。离子性去污剂应选用与目标蛋白相反电荷者，避免在作离子交换时和目标蛋白竞争交换介质，藉此除去去污剂。非离子性去污剂可以疏水层析除去。
7.纯化——单抗、抗原
单抗多为IgG.来源主要是腹水和融合瘤培养上清液。在培养前除去IgG.重组蛋白A介质Mabselect和rProtein A Sepharose FF对IgG有更高的载量和专一性，基团脱落更少。脱落的rProtein A用离子交换Q Sepharose HP或凝胶过滤Superdex 200，很容易去除。
疏水层析Phenyl Sepharose HP亦很适合纯化IgG.宿主抗体和污染IgG可用凝胶过滤Superdex 200在精细纯化中去除。
纯化IgG抗原最有效的方法是用活化偶联介质如CNBr、NHs activated Sepharose FF偶联IgG，再进一步获取IgG抗原。
HiTrap IgM是用来纯化融合瘤细胞培养的单抗IgM，结合量达5mg IgM.HiTrap IgY是专门用来纯化IgY，结合量达100mg纯IgY.
8.纯化——重组蛋白
重组蛋白在设计、构建时应已融入纯化构想。样品多夹杂了破碎细胞或溶解产物，扩张柱床吸附技术STREAMLINE便很适合做粗分离。Amersham biosciences提供三个快速表达、一步纯化的融合系统。
一 GST融合载体使要表达的蛋白和谷胱甘肽S转移酶一起表达，然后利用Glutathione Sepharose 4B作亲和层析纯化，再利用凝血酶或因子Xa切开。
2. 蛋白A融合载体使要表达的蛋白和蛋白A的IgG结合部位融合在一起表达，以IgG Sepharose 6 FF纯化。
二 含组氨酸标记（Histidine-tagged）的融合蛋白可用Chelating Sepharose FF螯合Ni2+金属，在一般或变性条件（8M尿素）下透过组氨酸螯合融合蛋白。HisTrap试剂盒提供整套His-Tag蛋白的纯化方法。
9.纯化——包涵体蛋白
包涵体蛋白往往需溶于6M盐酸胍或8M尿素中。一般包涵体蛋白样品的纯度越高，复性效果越好。SOURCE 30 RPC反相层析介质很适合纯化复性前的粗品，并可以1MnaOH重生。此方法纯化后的包涵体蛋白，复性回收率明显提高。
10.包涵体蛋白固相复性
许多文献报导将包涵体蛋白在变性条件下固定（吸附）在层析介质上，一般用各种Sepharose FF离子交换层析介质。而且无需大量稀释样品，并将复性和初纯化合二为一，大大节省时间及提高回收率。
固相复性方法也被用于以HiTrap Chelating金属螯合层析直接复性及纯化包涵体形式表达的组氨酸融合蛋白；以HiTrap Heparin肝素亲和层析直接复性及纯化包涵体形式表达的含多个赖氨酸的融合蛋白。两种亲和层析预装柱均可反复多次重复使用，比一般试剂盒更方便、耐用。
11.纯化——中草药有效成分
中药的化学成分极其复杂。例：如用甲醇分离黄酮甙，三糖甙先被洗下来，二糖甙其次，单糖甙随后，最后是甙元。Sephadex LH-20可使用水、醇、丙酮、氯仿等各种试剂，广泛用于各种天然产物的分离，包括生物碱、甙、黄酮、醌类、内脂、萜类、甾类等。
生物碱在酸性缓冲液中带正电，成为盐，HiTrap SP阳离子交换层析柱可以分离许多结构非常近似的生物碱。相反，黄酮、蒽醌、皂甙、有机酸等可溶于偏碱的缓冲液中，在HiTrap Q阴离子交换柱上分离效果良好。
一般多糖纯化大多使用分子筛如Sephadex，Sephacryl.若分子量在600KD以下，并需更高分辨率，可选择新一代的Superdex.一般植物可能含水溶性、酸溶性、碱溶性多种多糖。SOURCE5、15、30RPC反相层析也很适合各种中药有效成分的检测、分离和放大制备。由于中药的成分非常复杂，SOURCE反相层析可用范围为PH1-14 ，并可用1M NaOH，1M HCL清洗、再生。比传统硅胶反相层析更易于工艺优化及在位清洗，寿命也更长。
12.纯化——肽类
肽类的来源有天然萃取，合成肽和重组肽三种。肽容易被酶降解，但可从有机溶剂或促溶剂中复性，所以多以高选择性的反相层析如SOURCE 30RPC、SOURCE 15RPC、SOURCE 5RPC或离子交换Minibeads、Monobeads作纯化。Superdex Peptide HR是专为肽分子纯化设计的凝胶过滤预装柱，能配合反相层析做出更精美的肽图。肽分子制备可用离子交换配合凝胶过滤Superdex 30 PG。医学都市多功能
13.纯化——核酸、病毒
核酸的纯化用于去除影响测序或PCR污染物等研究。核酸可大致上分为质粒DNA、噬菌体DNA和PCR产物等。病毒也可视作核酸大分子，和质粒DNA一样，可用分离大分子的Sephacry S-1000 SF、Superose或Sepharoce 4FF凝胶过滤介质去除杂蛋白，再配合离子交换如Mono Q、 SOURCE Q分离核酸。
14.纯化——寡核苷酸寡酸苷酸
多应用在反义（anti-sense）DNA、RNA测序、PCR和cDNA合成等研究。合成后含三苯甲基的寡核苷酸以阴离子交换的Mono Q或快速低反压的SOURCE Q在PH12下可除副产物，并避免凝集和保护基的脱落。载量大大高过反相层析，可用做大量制备。不含三苯甲基的失败序列可用反相柱ProRPC去除。
15.脱盐、小分子去除
使用凝胶过滤介质Sephadex G10，G15，G25，G50等去除小分子，效率高，处理量可达床体积30%.只需在进样后收集首1/3-1/2柱体积的洗脱液，HiPrep Desalting（26ml）可在数分钟为多至10ml样品脱盐。
16.疫苗纯化
使用凝胶过滤介质Sepharose 4FF纯化疫苗，去除培养基中的杂蛋白，处理量可大于床体积10%.柱高一般40-70cm，整个过程约半至一小时。使用此法生产的疫苗品种有乙肝、狂犬、出血热、流感、肺结核、小儿麻痹疫苗等。分子量较小的疫苗可使用Sephacryl S-500HR，如甲肝疫苗等。
17.抗生素聚合物分析
中国药典从2000年版起要求抗生素头孢曲松钠需要找出聚合物占产品的白分比，规定使用Sephadex G10凝胶过滤法测定。
18.纯化-基因治疗用病毒载体
SORRCE 15Q
19.纯化-基因治疗用质粒
Q Sepharose XL，SOURCE 15Q，STREAMLINE Q，Sephacryl S500，Plasmidselect 在下游纯化中，可应用不同层析技术在纯化生物分子的同时，去除各种污染物。 1.去除——内毒素
内毒素又称热原。含脂肪A、糖类和蛋白，是带负电的复合大分子。
内毒素的脂肪A部份有很强的疏水性。但在高盐下会凝集，无法上疏水层析。利用疏水层析试验盒（17-1349-01）可选择结合目标蛋白的介质而去除内毒素。
内毒素与阴离子交换介质Q或DEAE Sepharose Fast Flow有较强结合。可在洗脱目标蛋白后用高盐缓冲液或NaOH去除。
利用CNBr或NHS Sepharose FF可偶联内毒素底物如LAL，PMB，自动成亲合层析介质结合内毒素。内毒素经常是多聚体，凝胶过滤层析可有效地将之去除。
2.去除——蛋白中的核酸
大量核酸增加样本黏度，令区带扩张，反压增加，降低分辨率和流速。药审和食检对核酸含量也有严格限制。
胞内表达蛋白的核酸问题尤其严重。核酸带阴电荷，在初步纯化时利用阳离子交换介质如STREAMLINESP，SP Sepharose Big Beads，SP或CM Sepharose FF，SP SepharoseXL结合目标蛋白，可除去大量核酸。
核酸在高盐下会和蛋白解离，疏水层析介质很适合用来结合目标蛋白，在纯化蛋白的同时去除核酸。
利用核酸酶将核酸切成小片断，用凝胶过滤做精细纯化时便很容易去除了。
3.去除——病毒和微生物
病毒和微生物可成为病原，应尽量减除。结合不同层析技术，使用注射用水，用NaOH定期进行仪器和凝胶的在位消毒和在位清洗，皆可避免污染物增加。
病毒大都有脂外壳。可用与目标蛋白电荷相反的S/D（solvent/detergent）处理，使病毒失活，如Triton和Tween.再用适当的离子交换介质如CM Sepharose FF结合目标蛋白，去除S/D.
其它污染物可以改变pH和离子强度使其从目标分子中解离或失活，凝胶过滤介质Superdex及多种吸附性介质，SOURCE都是很好的精细纯化介质，可去除多种微量污染物。 凝胶是指颗粒大小在1埃到10埃之间的混合物。高分子溶液和某些溶胶，在适当的条件下，整个体系会转变成一种弹性的半固体状态的稠厚物质，失去流动性。这种现象称为胶凝作用,所形成的产物叫做凝胶或冻胶.
“气凝胶”是指分散系为气态的，如：云，雾等，“固凝胶”有烟水晶等，“液凝胶”就是呈液态的胶体，如氢氧化铁胶体 。向左转|向右转
1.测定——分子量、PI
当目标蛋白的物理特性如分子量、PI等都不清楚时，可用PAGE电泳方法或层析方法加以测定。分离范围广阔的Superose HR预装柱很适合测定未知蛋白的分子量。用少量离子交换介质在多个含不同PH缓冲液的试管中，可简易地测出PI，并选择纯化用缓冲液的最佳PH。
2.选择——层析方法
若对目标蛋白的特性或样品成分不太了解，可尝试几种不同的纯化方法：
一 使用最通用的凝胶过滤方法，选择分离范围广阔的介质如Superose、Sephacryl HR依据分子量将样品分成不同组份。
二 用含专一配体或抗体的亲和层析介质结合目标蛋白。亦可用各种活化偶联介质偶联目标蛋白的底物、受体等自制亲和介质，再用以结合目标蛋白。一步即可得到高纯度样品。
三 体积大的样品，往往使用离子交换层析加以浓缩及粗纯化。高盐洗脱的样品，可再用疏水层析纯化。疏水层析利用高盐吸附、低盐洗脱的原理，洗脱样品又可直接上离子交换等吸附性层析。两种方法常被交替使用于纯化流程中。
3.纯化——大量粗品
处理大量原液时，为避免堵塞柱子，一般使用sepharose big beads、sepharoseXL、sepharose fast flow等大颗粒离子交换介质。扩张柱床吸附技术利用多种STREAMLINE介质，直接从含破碎细胞或组织萃取物的发酵液中俘获蛋白。将离心、超滤、初纯化结合为一。提高回收率，缩短纯化周期。
4.纯化——硫酸氨样品
硫酸氨沉淀方法常被用来初步净化样品，经处理过的样本处于高盐状态下，很适合直接上疏水层析。若作离子交换，需先用Sephadex G-25脱盐。疏水层析是较新技术，随着介质种类不断增多，渐被融入各生产工艺中。利用Hitrap HIC Test Kit 和RESOURCE HIC Test Kit可在八种疏水介质中选择最适合介质及最佳的纯化条件。低盐洗脱的样品可稍加稀释或直接上其它吸附性层析。
5.纯化——糖类分子
固化外源凝订素如刀豆球蛋白、花生、大麦等凝集素，可结合碳水化合物的糖类残基，很适合用作分离糖化细胞膜组份、细胞、甚至亚细胞细胞器，纯化糖蛋白等。两种附上外源凝集素的Sepharose 6MB亲和层析介质，专为俘获整个细胞或大复合物，如膜囊等。
6.纯化——膜蛋白
膜蛋白分离常使用去污剂以保持其活性。离子性去污剂应选用与目标蛋白相反电荷者，避免在作离子交换时和目标蛋白竞争交换介质，藉此除去去污剂。非离子性去污剂可以疏水层析除去。
7.纯化——单抗、抗原
单抗多为IgG.来源主要是腹水和融合瘤培养上清液。在培养前除去IgG.重组蛋白A介质Mabselect和rProtein A Sepharose FF对IgG有更高的载量和专一性，基团脱落更少。脱落的rProtein A用离子交换Q Sepharose HP或凝胶过滤Superdex 200，很容易去除。
疏水层析Phenyl Sepharose HP亦很适合纯化IgG.宿主抗体和污染IgG可用凝胶过滤Superdex 200在精细纯化中去除。
纯化IgG抗原最有效的方法是用活化偶联介质如CNBr、NHs activated Sepharose FF偶联IgG，再进一步获取IgG抗原。
HiTrap IgM是用来纯化融合瘤细胞培养的单抗IgM，结合量达5mg IgM.HiTrap IgY是专门用来纯化IgY，结合量达100mg纯IgY.
8.纯化——重组蛋白
重组蛋白在设计、构建时应已融入纯化构想。样品多夹杂了破碎细胞或溶解产物，扩张柱床吸附技术STREAMLINE便很适合做粗分离。Amersham biosciences提供三个快速表达、一步纯化的融合系统。
一 GST融合载体使要表达的蛋白和谷胱甘肽S转移酶一起表达，然后利用Glutathione Sepharose 4B作亲和层析纯化，再利用凝血酶或因子Xa切开。
2. 蛋白A融合载体使要表达的蛋白和蛋白A的IgG结合部位融合在一起表达，以IgG Sepharose 6 FF纯化。
二 含组氨酸标记（Histidine-tagged）的融合蛋白可用Chelating Sepharose FF螯合Ni2+金属，在一般或变性条件（8M尿素）下透过组氨酸螯合融合蛋白。HisTrap试剂盒提供整套His-Tag蛋白的纯化方法。
9.纯化——包涵体蛋白
包涵体蛋白往往需溶于6M盐酸胍或8M尿素中。一般包涵体蛋白样品的纯度越高，复性效果越好。SOURCE 30 RPC反相层析介质很适合纯化复性前的粗品，并可以1MnaOH重生。此方法纯化后的包涵体蛋白，复性回收率明显提高。
10.包涵体蛋白固相复性
许多文献报导将包涵体蛋白在变性条件下固定（吸附）在层析介质上，一般用各种Sepharose FF离子交换层析介质。而且无需大量稀释样品，并将复性和初纯化合二为一，大大节省时间及提高回收率。
固相复性方法也被用于以HiTrap Chelating金属螯合层析直接复性及纯化包涵体形式表达的组氨酸融合蛋白；以HiTrap Heparin肝素亲和层析直接复性及纯化包涵体形式表达的含多个赖氨酸的融合蛋白。两种亲和层析预装柱均可反复多次重复使用，比一般试剂盒更方便、耐用。
11.纯化——中草药有效成分
中药的化学成分极其复杂。例：如用甲醇分离黄酮甙，三糖甙先被洗下来，二糖甙其次，单糖甙随后，最后是甙元。Sephadex LH-20可使用水、醇、丙酮、氯仿等各种试剂，广泛用于各种天然产物的分离，包括生物碱、甙、黄酮、醌类、内脂、萜类、甾类等。
生物碱在酸性缓冲液中带正电，成为盐，HiTrap SP阳离子交换层析柱可以分离许多结构非常近似的生物碱。相反，黄酮、蒽醌、皂甙、有机酸等可溶于偏碱的缓冲液中，在HiTrap Q阴离子交换柱上分离效果良好。
一般多糖纯化大多使用分子筛如Sephadex，Sephacryl.若分子量在600KD以下，并需更高分辨率，可选择新一代的Superdex.一般植物可能含水溶性、酸溶性、碱溶性多种多糖。SOURCE5、15、30RPC反相层析也很适合各种中药有效成分的检测、分离和放大制备。由于中药的成分非常复杂，SOURCE反相层析可用范围为PH1-14 ，并可用1M NaOH，1M HCL清洗、再生。比传统硅胶反相层析更易于工艺优化及在位清洗，寿命也更长。
12.纯化——肽类
肽类的来源有天然萃取，合成肽和重组肽三种。肽容易被酶降解，但可从有机溶剂或促溶剂中复性，所以多以高选择性的反相层析如SOURCE 30RPC、SOURCE 15RPC、SOURCE 5RPC或离子交换Minibeads、Monobeads作纯化。Superdex Peptide HR是专为肽分子纯化设计的凝胶过滤预装柱，能配合反相层析做出更精美的肽图。肽分子制备可用离子交换配合凝胶过滤Superdex 30 PG。医学都市多功能
13.纯化——核酸、病毒
核酸的纯化用于去除影响测序或PCR污染物等研究。核酸可大致上分为质粒DNA、噬菌体DNA和PCR产物等。病毒也可视作核酸大分子，和质粒DNA一样，可用分离大分子的Sephacry S-1000 SF、Superose或Sepharoce 4FF凝胶过滤介质去除杂蛋白，再配合离子交换如Mono Q、 SOURCE Q分离核酸。
14.纯化——寡核苷酸寡酸苷酸
多应用在反义（anti-sense）DNA、RNA测序、PCR和cDNA合成等研究。合成后含三苯甲基的寡核苷酸以阴离子交换的Mono Q或快速低反压的SOURCE Q在PH12下可除副产物，并避免凝集和保护基的脱落。载量大大高过反相层析，可用做大量制备。不含三苯甲基的失败序列可用反相柱ProRPC去除。
15.脱盐、小分子去除
使用凝胶过滤介质Sephadex G10，G15，G25，G50等去除小分子，效率高，处理量可达床体积30%.只需在进样后收集首1/3-1/2柱体积的洗脱液，HiPrep Desalting（26ml）可在数分钟为多至10ml样品脱盐。
16.疫苗纯化
使用凝胶过滤介质Sepharose 4FF纯化疫苗，去除培养基中的杂蛋白，处理量可大于床体积10%.柱高一般40-70cm，整个过程约半至一小时。使用此法生产的疫苗品种有乙肝、狂犬、出血热、流感、肺结核、小儿麻痹疫苗等。分子量较小的疫苗可使用Sephacryl S-500HR，如甲肝疫苗等。
17.抗生素聚合物分析
中国药典从2000年版起要求抗生素头孢曲松钠需要找出聚合物占产品的白分比，规定使用Sephadex G10凝胶过滤法测定。
18.纯化-基因治疗用病毒载体
SORRCE 15Q
19.纯化-基因治疗用质粒
Q Sepharose XL，SOURCE 15Q，STREAMLINE Q，Sephacryl S500，Plasmidselect 在下游纯化中，可应用不同层析技术在纯化生物分子的同时，去除各种污染物。 1.去除——内毒素
内毒素又称热原。含脂肪A、糖类和蛋白，是带负电的复合大分子。
内毒素的脂肪A部份有很强的疏水性。但在高盐下会凝集，无法上疏水层析。利用疏水层析试验盒（17-1349-01）可选择结合目标蛋白的介质而去除内毒素。
内毒素与阴离子交换介质Q或DEAE Sepharose Fast Flow有较强结合。可在洗脱目标蛋白后用高盐缓冲液或NaOH去除。
利用CNBr或NHS Sepharose FF可偶联内毒素底物如LAL，PMB，自动成亲合层析介质结合内毒素。内毒素经常是多聚体，凝胶过滤层析可有效地将之去除。
2.去除——蛋白中的核酸
大量核酸增加样本黏度，令区带扩张，反压增加，降低分辨率和流速。药审和食检对核酸含量也有严格限制。
胞内表达蛋白的核酸问题尤其严重。核酸带阴电荷，在初步纯化时利用阳离子交换介质如STREAMLINESP，SP Sepharose Big Beads，SP或CM Sepharose FF，SP SepharoseXL结合目标蛋白，可除去大量核酸。
核酸在高盐下会和蛋白解离，疏水层析介质很适合用来结合目标蛋白，在纯化蛋白的同时去除核酸。
利用核酸酶将核酸切成小片断，用凝胶过滤做精细纯化时便很容易去除了。
3.去除——病毒和微生物
病毒和微生物可成为病原，应尽量减除。结合不同层析技术，使用注射用水，用NaOH定期进行仪器和凝胶的在位消毒和在位清洗，皆可避免污染物增加。
病毒大都有脂外壳。可用与目标蛋白电荷相反的S/D（solvent/detergent）处理，使病毒失活，如Triton和Tween.再用适当的离子交换介质如CM Sepharose FF结合目标蛋白，去除S/D.
其它污染物可以改变pH和离子强度使其从目标分子中解离或失活，凝胶过滤介质Superdex及多种吸附性介质，SOURCE都是很好的精细纯化介质，可去除多种微量污染物。 凝胶是指颗粒大小在1埃到10埃之间的混合物。高分子溶液和某些溶胶，在适当的条件下，整个体系会转变成一种弹性的半固体状态的稠厚物质，失去流动性。这种现象称为胶凝作用,所形成的产物叫做凝胶或冻胶.
“气凝胶”是指分散系为气态的，如：云，雾等，“固凝胶”有烟水晶等，“液凝胶”就是呈液态的胶体，如氢氧化铁胶体 。向左转|向右转
哪家做生物技术服务蛋白表达与纯化和Western blot服务态度好,性价比高...123
H墨白2021-07-21
你可以咨询下武汉普健生物,已经在他那做了几个蛋白,优先提供的上清表达的蛋白,实验的活性比预期的还好些
重组蛋白的定性、定量分别用什么方法?试剂毒性大吗?123
wind_huan2018-03-06
定性：western blot。蛋白纯化后电泳，转膜，封闭，1抗标记，2抗标记，具体过程网上有。
定量：考马斯亮蓝显色或紫外分光光度计，就是光谱学的方法。
定量：考马斯亮蓝显色或紫外分光光度计，就是光谱学的方法。
如何切入生物制药,尤其是单抗药物和重组蛋白药物领域 123
wahaha03702021-07-25
就看你“切入”的目的了，如果是做市场分析，可以读文献、读新闻、读别人的市场分析。
如果是做科研，国内外很多知名的药企都是你学习借鉴的榜样。
如果是做科研，国内外很多知名的药企都是你学习借鉴的榜样。
体外PDL1激活PD1通路,PDL1重组蛋白用量多少合适? 细胞技术...123
buzztr2017-08-31
我想在体外培养的细胞中，加入PD-L1重组蛋白，激活PD-L1:PD-1通路，但我没能查到相关的文献，不清楚PD-L1重组蛋白的用量。请问各位有相关的经验吗？或者阅读过相关的文献？
▍
官网分类
▍
品牌问答
