Description
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Transfection Reagent for HEK-293 Cells (Epithelial Kidney Cells, CRL-1573)
- Two component formulation enhances lipid mediated transfection efficiency
- Optimized easy-to-use transfection protocol provided for transfection of siRNA, DNA, mRNA, and microRNA
- Kit includes Transfection Enhancer reagent and recommended transfection protocol
- High transfection efficacy in the presence of serum
- Expand your RNAi application with a reagent optimized for delivery of both siRNA and plasmid
- Works well for standard reverse transfection and high-throughput applications
- Download HEK293 transfection protocol: [PDF]
- Download HEK293 CRISPR/Cas9 transfection protocol: [PDF]
- Download PowerPoint presentation for HEK293 cells transfection kit: [PPT]
- Developed and manufactured by Altogen Biosystems
Transfection Efficiency:
Reagent exhibits at least 90% transfection efficiency of siRNA delivery. Transfection efficiency was determined by qRT-PCR.
Transfection Protocol and MSDS:
Download Altogen Biosystems HEK-293 Transfection Protocol: [PDF]
Download MSDS: [PDF]
HEK-293 Cell Line:
Human embryonic kidney cells have high transfection efficiency and are commonly used in cancer research as well as for pharmaceutical and biomedical purposes. HEK-293 human epithelial kidney cells were originally derived in 1977 from human embryonic kidney cells transformed with sheared adenovirus 5 DNA grown in tissue culture. The transformation incorporated approximately 4.5 kilobases from the viral genome into human chromosome 19 of the HEK cells. HEK has been described as being a cellular test tube. These cells were developed from embryonic kidney cells, and are useful in a variety of molecular and biological research, many of which have medical applications. In addition to being reliable hosts for transfection, HEK-293 cells are particularly helpful for the production of therapeutic proteins as well as viruses for gene therapy. Altogen Biosystems offers pre-optimized advanced formulation of lipid-based transfection reagent kits for human epithelial kidney cells that yield at least 90% transfection efficiency, as verified by qRT-PCR.
Data:
Figure 1. SiRNAs targeting Lamin A/C mRNA or non-silencing control siRNA were transfected into HEK-293 cells following the recommended protocol. At 48 hours post-transfection the cells were analyzed by qRT-PCR for gene expression levels. 18S rRNA levels were used to normalize the Lamin A/C data. Values are normalized to untreated sample. Data are means ± SD (n=3).
Figure 2. Protein expression of Lamin A/C in HEK-293 cells. DNA plasmid expressing Lamin A/C or siRNA targeting Lamin A/C were transfected into HEK-293 cells following Altogen Biosystems transfection protocol. At 72 hours post-transfection the cells were analyzed by Western Blot for protein expression levels (normalized by total protein, 10 µg of total protein loaded per each well). Untreated cells used as a negative control.
Selected in vivo transfection product citations (ALTOGEN® IN VIVO Transfection Kits used in the following publications):
- Am J Pathology. 2010 177(4):1870-80. Role of ocular complement factor H in a murine model … Lyzogubov et al [PDF]
- Jounal of Biological Chemistry. 2012 287(4):2907. Chaperoning of mutant p53 protein … Gogna et al [PDF]
- PLoS Pathogens. 2012 8(8) Uridine composition of the poly-U/UC tract of HCV RNA … Schnell et al [PDF]
- J Proteome Res. 2012(11) Retinal proteome analysis in a mouse model of oxygen-induced … Kim et al [PDF]
- J Transl Med. 2010 15;8:133. Prevention of hyperglycemia-induced myocardial apoptosis … Zhang et al [PDF]
HEK-293 Transfection Reagent
Altogen Biosystems:
Altogen Biosystems is a life sciences company that offers cell type-specific and pre-optimized transfection products, electroporation kits, and in vivo delivery reagents. Advanced formulation of reagents and optimized transfection protocols provide efficient intracellular delivery of protein, DNA, mRNA, shRNA and siRNA molecules. Read more about transfection technology at Altogen’s Transfection Resource.
Altogen Research Services:
Altogen Labs provides GLP-compliant contract research studies for pre-clinical research, IND applications, and drug development. Biology CRO services include: Xenograft models (30+), development of stable cell lines, ELISA assay development, cell-based and tissue targeted RNAi studies, safety pharm/tox assays, and other studies (visit AltogenLabs.com).
Volume Options:
- 0.5 ml (Catalog #1763)
- 1.5 ml (Catalog #1764)
- 1.5 ml CRISPR (Catalog #2149)
- 8.0 ml (Catalog #7046)
AltogenBiosystems是一家开发和制造用于生命科学研究，药物发现和开发的转染试剂盒的生物技术公司。转染试剂盒针对特定癌细胞系和原代细胞培养进行了优化，可将生物分子有效递送到靶组织中。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现体外（癌细胞系）和体内（动物组织靶向试剂、癌细胞系）递送货物分子，包括质粒DNA，各种类型的RNA（mRNA，siRNA，shRNA，microRNA），蛋白质和小分子研究。
Altogen生命科学公司致力于研发，生产和销售特定细胞系的转染试剂，用于细胞间生物分子的传递，并通过对转染试剂类型的设计将siRNA和质粒DNA有效地转入不同的细胞系和原代细胞内。Altogen公司开发的聚合物，脂质体，纳米粒子为基础的转染技术分别针对分子生物学，组合化学，和细胞生物学而分别应用。Altogen定制服务提供符合GLP要求定制研究服务，包括代稳定的细胞系，细胞银行和冷冻保存，焦磷酸测序，克隆，RNA干扰（RNAi）和基因沉默服务，发展分析，siRNA文库筛选，并转染服务。稳定的肿瘤细胞株和原代细胞的产生，可以是非常昂贵和费时。该公司的细胞培养科学家的细胞株的选择，无论是利息或shRNA表达载体的稳定表达的基因改造。标准的RNAi技术服务，包括设计与合成的siRNA的利益，验证siRNA的沉默效率，siRNA转染条件的优化，使高效的基因沉默细胞系或原代培养细胞的靶基因。转染培养细胞的瞬时或稳定的引入外源性分子和遗传物质（即RNA或DNA），通常是在生物实验室用来研究基因功能，基因表达的调节，生化映射，突变分析，和蛋白质的生产。科学家利用各种载体分子，这种分子，使质粒DNA（PDNA），信使RNA（mRNA），短干扰RNA（siRNA），小分子RNA（miRNA）的，并进入肿瘤细胞株和原代细胞的蛋白质的基因交付。不幸的是，无单提货的方法或转染试剂，可以适用于所有类型的细胞，细胞的细胞毒性和转染效率显着不同，取决于试剂，协议，并正在利用细胞类型。Altogen生物系统公司提供超过60种类型的细胞的预优化转染试剂盒。纳米粒子，脂质和聚合物基ALTOGEN®在体内转染试剂，使交付功能的RNA和DNA分子在体内。PEG脂质体在体内输送系统减少由于PEG修饰的先天免疫反应，并提供高效的siRNA转染的DNA，并在体内的蛋白质。由科学“杂志（2010年12月17日）：PEG脂质体在体内转染试剂盒siRNA的特色Altogen生物系统功能的特定细胞系转染试剂盒
120+细胞转染试剂和活体组织靶向试剂盒制造商AltogenBiosystems是一家生物技术公司，开发和制造用于生命科学研究、药物发现和开发的转染试剂盒。Altogen®体内转染试剂可有效地将生物分子导入靶组织。细胞转染试剂盒针对特定的癌细胞系和原代细胞进行了优化。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现货物分子（DNA、RNA、蛋白质）的高效传递。AltogenBiosystems利用高分子化学、分子和细胞生物学的专业知识，开发了新的体内外给药技术。转染是将外源分子导入培养细胞中，常用于研究基因功能、基因表达调控、生化定位和蛋白质生产。不幸的是，由于细胞毒性和转染效率的差异很大，并且取决于所使用的试剂、方案和细胞类型，因此没有一种单一的传递方法或转染试剂可应用于所有类型的细胞。AltogenBiosystems为120多个癌细胞系和原代细胞类型提供优化的转染试剂盒和电穿孔产品。体内转染试剂可实现组织靶向给药。Altogen的转染试剂盒包括用于体外（癌细胞系）和体内（用于动物研究的组织靶向试剂）转染的转染增强剂试剂和转染复合物冷凝器。Altogen实验室提供符合GLP的实验室合同研究服务。我们的生物CRO服务包括异种移植物的疗效、IND应用的pharm/tox研究和安全性测试、分析开发（ELISA、IC-50、qPCR）、90多个异种移植物动物模型、RNAi和基因沉默服务。Altogen的细胞培养科学家通过在28天内培育出稳定的细胞系，将选择的细胞系转化为稳定表达感兴趣的基因。
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一、机械裂解法主要有以下两中：
1．热休克（Thermal shock）,既反复冻溶法,是一种常用的机械裂解方式比,通常由冷冻和解冻两部分组成（freezing and thawing）,.原理：由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀,使细胞结构破碎.冷冻通常在液氮或-20°C冰上进行,解冻可以在37、50、65 或100℃水浴中进热休克比化学裂解温和,但是很有效,有资料表明用热休克和溶菌酶与SDS的方法获得了90%的细胞裂解率.
2．超声波处理（Ultrasonication）既利用超声加热的方法,把细胞破碎.但这种处理会导致DNA 的断裂,所以加热不宜过剧烈,要设定好超声时间和间隙时间,一般超声时间不超过5秒,间隙时间最好大于超声时间,这些都有利于保护酶的活性.bead-beating 也是常用的机械处理方式,有报道指出bead-beating 比热休克和化学裂解的细胞裂解效果更好 虽然DNA产量较高,但通常得到的DNA片段较小.
二、 化学裂解和酶裂解法（在提核酸时联合使用）
主要是裂解液处理法,细胞裂解液的主要目的有以下几种：（1）利用去污剂破坏脂质双分子层,破裂细胞；（2）溶解蛋白；（3）蛋白变性使其稳定；（4）抑制蛋白酶活性.
主要根据不同的目的,裂解液的组成有所不同,主要有提取核酸和蛋白两中.在提取RNA或DNA时,我们主要是要充分裂解细胞,得到更多的核酸；如果我们的目的是蛋白,那要根据蛋白的位置、特性等因素考虑裂解液,在提取蛋白后,再根据实验需要复性蛋白等.以下是细胞裂解中常用试剂和其作用：
50 mM Tris-HCl pH 7.4（缓冲体系）,150 mM NaCl（等渗体系）,1 mM PMSF （强大的蛋白酶抑制剂）,1 mM EDTA（变性剂和稳定剂）,5 μg/ml Aprotinin（蛋白酶抑制剂）,5 μg/ml Leupeptin（蛋白酶抑制剂）,1% Triton x-100（破坏细胞）,1% Sodium deoxycholate（中度变性剂和蛋白溶解剂）,0.1% SDS（强变性剂和蛋白溶解剂）.7M 尿素,2M硫脲(可以提高膜蛋白的融解）,蛋白酶K等.
A.优点：
多重分析——一次分析可以检测16种干细胞相关的TF
定量比较——二个样本的差异可以定量分析和比较
步骤简单——探针温育、柱分离、板杂交和HRP检测
无需贵重仪器——无需如Luminex那样的贵重仪器
B.原理：
干细胞转录因子活性多重检测阵列试剂用于同时检测多种TF活性。该技术中，基于TFDNA结合位点的一致性序列，制备一系列生物素标记的探针。当探针混合物与核提取物一起温育时，每个探针寻找相应的TF，形成TF/探针复合物，通过柱离心纯化可以很容易与游离探针分开。结合的探针从混合物中分离出来，通过板杂交分析。板孔中预包被上与探针互补的特异序列，捕获的DNA探针进一步用链酶亲和素-HRP检测，化学发光检测仪测定发光强度（RLUs）。
这样可不可以？
另还有几个问题：1、这样的裂解液裂解线粒体提蛋白可不可以
2、裂解液加多少剂量
3、12000g离心10min和30分钟有没有区别
我的邮箱：maoyuanqing@citiz.net
不知单纯使用冰浴中超声裂解够了吗？还是说要选用裂解液呢？最主要的就是我不知道该怎么赔这个裂解液，使其COX活性不产生影响
样品处理：
a. 植物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混匀。
b. 动物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液，用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。
c. 贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每106细胞加1ml 裂解液。用取样器吹打混匀。
d. 细胞悬液：离心收集细胞。每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。
e. 血液处理：取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，10000rpm离心1分钟。弃上清，若沉淀含有红细胞，可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1 ml裂解液混匀。
将处理后的样品在室温放置5分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。
向匀浆样品中加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置3-5分钟。
2-8℃ 12000 rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中，把水相转移到新管中，不要吸到沉淀。
吸附柱前处理：在吸附柱中加入500ul 洗柱液，室温放置2分钟，2-8℃ 12,000 rpm离心2min，弃废液。6. 第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀，加入吸附柱静置2分钟，2-8℃ 12000rpm离心2min，弃废液。7. 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，2-8℃ 12,000 rpm离心2min，弃废液。8. 向吸附柱中加入600ul漂洗液，2-8℃ 12,000 rpm离心2min，弃废液。9. 12000rpm离心2min，弃掉收集管，将吸附柱置于室温放置数分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除。10. 将吸附柱放入新管中，向膜中央滴加50-100ul RNase free ddH2O，室温放置5min，12000rpm室温离心2min即得到RNA。
注意事项：
所有相关器皿耗材都应为RNase-free产品，操作过程要小心，带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。
RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA不纯，需电泳检测。
**捷向您推荐美国Trevigen的一款通用PARP分析试剂盒检测试剂盒。该试剂盒是检测凋亡前与凋亡中细胞提取液中PARP活性的理想方案，操作简单，重复性高。其通过检测96孔板上生物素标记的多聚ADP核糖聚合到邻近组蛋白的反应，从而确定已知的或可能的PARP抑制剂。试剂盒中的依托泊苷（Etoposide）是拓扑异构酶Ⅱ抑制剂，在拓扑异构酶Ⅱ切割完DNA后能够稳定该酶。在试剂盒中，依托泊苷作为凋亡诱导的对照参与检测。
通量PARP/凋亡分析试剂盒可广泛应用于1）检测原代、肿瘤等细胞的PARP活性；2）检测凋亡前后的PARP活性；3）利用细胞裂解液筛选PARP抑制剂。
试剂盒特色比色法/化学发光法，无放射性输出。96well，高通量检测。极大地节省了分析时间，提高了使用效率。高敏感性。能够检测到500个细胞中低至0.1mU的PARP。检测范围广。0.1-10mU。样本用量少。仅仅需要10-100ng的提取物。检测时间短。仅需要3h即可完成检测。
**捷向您提供一站式的PARP相关实验解决方案，除了高通量PARP/凋亡分析试剂盒，还有PARP体内药理动力学二代分析试剂盒(PDAII)和通用PAPR分析试剂盒外(含组蛋白包被可拆卸板)，以及相关抗体和重组蛋白。
Trevigen是一家快速成长的美国生物技术公司，专注于细胞凋亡、DNA损伤和修复、肿瘤细胞功能与行为等方面研究的肿瘤研究产品和服务。作为Trevigen在中国区域的总代理，**捷与Trevigen一道为中国的科研工作者提供最好、最新的氧化应激、细胞损伤和肿瘤细胞行为研究等领域内的优质产品和技术服务。如果您对上述产品及方案感兴趣，请致电400-6800-868至**捷科技有限公司垂询血管生成研究的相关实验解决方案，或索取最新的产品资料。
