| Product Name | Calcitonin Gene Related Peptide, CGRP, humanACDTATCVTHRLAGLLSRSGGVVKNNFVPTNVGSKAF - NH2 (Disulfide bridge: 2 - 7) |
| Size | 1 mg |
| Catalog # | AS-20682 |
| US$ | $267 |
| Purity | % Peak Area By HPLC ≥ 95% |
Calcitonin gene-related peptide (CGRP) is a 37-amino acid neuropeptide produced by tissue specific processing of the calcitonin gene and is the major product in neural tissues. CGRP is released by motor neurons where it exerts both short and long term effects on skeletal muscle fibers. In addition, sensory neurons release CGRP to the surrounding vasculature where it is partly responsible for local vasodilation following muscle contraction. CGRP acts through G protein-coupled receptors whose presence and changes in function modulate the peptide"s effects in various tissues. | |
| Detailed Information | |
| Storage | -20°C |
| References | Ref: Nimmagadda D. GS. Indian J. Pharmacol. 36, 277 (2004); Feuerstein, G. et al. Can. J. Physiol. Pharmacol. 73, 1070 (1995). |
| Molecular Weight | 3789.4 |
| ACDTATCVTHRLAGLLSRSGGVVKNNFVPTNVGSKAF-NH2 (Disulfide bridge: 2-7) | |
| Sequence(Three-Letter Code) | H - Ala - Cys - Asp - Thr - Ala - Thr - Cys - Val - Thr - His - Arg - Leu - Ala - Gly - Leu - Leu - Ser - Arg - Ser - Gly - Gly - Val - Val - Lys - Asn - Asn - Phe - Val - Pro - Thr - Asn - Val - Gly - Ser - Lys - Ala - Phe - NH2(Disulfide bridge: 2 - 7) |
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. 50 mM Tris-HCl pH 7.4 缓冲体系 · 150 mM NaCl 等渗体系
· 1 mM PMSF 强大的蛋白酶抑制剂 · 1 mM EDTA 变性剂和稳定剂
· 5 µg/ml Aprotinin 蛋白酶抑制剂 · 5 µg/ml Leupeptin 蛋白酶抑制剂 · 1% Triton x-100 破坏细胞
·1% Sodium deoxycholate 中度变性剂和蛋白溶解剂 ·0.1% SDS 强变性剂和蛋白溶解剂
组织裂解液和细胞裂解液如何配制
http://wenku.baidu.com/link?url=wSb7SK6U6DwRWnh4oq2PWLhYpcVp1BZQA42ybzcNGDB0xXR1HJCmuREp-ikc--tOmNYvKu-vRHAHjFz_D0eB3IZ_uEYz1AAU9X4BkluWIZW
不知单纯使用冰浴中超声裂解够了吗?还是说要选用裂解液呢?最主要的就是我不知道该怎么赔这个裂解液,使其COX活性不产生影响
我的邮箱:maoyuanqing@citiz.net
A.优点:
多重分析——一次分析可以检测16种干细胞相关的TF
定量比较——二个样本的差异可以定量分析和比较
步骤简单——探针温育、柱分离、板杂交和HRP检测
无需贵重仪器——无需如Luminex那样的贵重仪器
B.原理:
干细胞转录因子活性多重检测阵列试剂用于同时检测多种TF活性。该技术中,基于TFDNA结合位点的一致性序列,制备一系列生物素标记的探针。当探针混合物与核提取物一起温育时,每个探针寻找相应的TF,形成TF/探针复合物,通过柱离心纯化可以很容易与游离探针分开。结合的探针从混合物中分离出来,通过板杂交分析。板孔中预包被上与探针互补的特异序列,捕获的DNA探针进一步用链酶亲和素-HRP检测,化学发光检测仪测定发光强度(RLUs)。
样品处理:
a. 植物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨,把粉末加入到1ml裂解液中混匀。
b. 动物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液,用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。
c. 贴壁细胞:直接在培养板中加入裂解液裂解细胞,每106细胞加1ml 裂解液。用取样器吹打混匀。
d. 细胞悬液:离心收集细胞。每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。
e. 血液处理:取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液,混匀后室温放置10分钟,10000rpm离心1分钟。弃上清,若沉淀含有红细胞,可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1 ml裂解液混匀。
将处理后的样品在室温放置5分钟,使得核酸蛋白复合物完全分离。
向匀浆样品中加0.2ml氯仿,盖好管盖,剧烈振荡15秒,室温放置3-5分钟。
2-8℃ 12000 rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中,把水相转移到新管中,不要吸到沉淀。
吸附柱前处理:在吸附柱中加入500ul 洗柱液,室温放置2分钟,2-8℃ 12,000 rpm离心2min,弃废液。6. 第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀,加入吸附柱静置2分钟,2-8℃ 12000rpm离心2min,弃废液。7. 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),2-8℃ 12,000 rpm离心2min,弃废液。8. 向吸附柱中加入600ul漂洗液,2-8℃ 12,000 rpm离心2min,弃废液。9. 12000rpm离心2min,弃掉收集管,将吸附柱置于室温放置数分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除。10. 将吸附柱放入新管中,向膜中央滴加50-100ul RNase free ddH2O,室温放置5min,12000rpm室温离心2min即得到RNA。
注意事项:
所有相关器皿耗材都应为RNase-free产品,操作过程要小心,带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。
RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之间,但这并不表示RNA不纯,需电泳检测。

