Overview:
CDK5 is a member of the Cyclin-Dependent Kinase family that is most abundant in the mammalian brain. Active form of CDK5, which has also been called neuronal cdc2-like kinase, is a heterodimer of CDK5 and a 25 kDa protein which is derived proteolytically from a 35 kDa brain and neuron-specific protein and is essential for the kinase activity of CDK5 (1). CDK5 has emerged as a crucial regulator of neuronal migration in the developing central nervous system. CDK5 phosphorylates a diverse list of substrates, implicating it in the regulation of a range of cellular processes - from adhesion and motility, to synaptic plasticity and drug addiction (2).
Gene Aliases:
PSSALRE
Genbank Number:
NM_004935
References:
1. Tang, D. et al: Cyclin-dependent kinase 5 (Cdk5) and neuron-specific Cdk5 activators. Prog Cell Cycle Res. 1996;2:205-16. 2. Dhavan, R. et al: A decade of CDK5. Nat Rev Mol Cell Biol. 2001 Oct;2(10):749-59.
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RNAi技术的原理与应用（一）.ppt(218.5k)
这里有关于miRNA专题报道，可以看看
步骤
A． 真核细胞和组织
自己需要的材料：
β－巯基乙醇、70％乙醇（DEPC水配置）、除RNase的枪头和EP管。
材料的最佳量
想得到最佳的产量和好的Hibind RNA柱的纯化效果，选用正确的细胞和组织量是最重要的。Hibind RNA柱的最大处理量是可变的，根据细胞和组织的类型。最大的结合能力是100ug的RNA。TRK裂解缓冲液的最大裂解能力是1*107个细胞或30mg的组织。
细胞的步骤
1． 用500ul的TRK裂解缓冲液裂解细胞（≤1*107），使细胞团松散，轻轻弹EP管或者用枪头吹旋，再用漩涡振荡混匀。
a) 使用前每1ml TRK裂解缓冲液加入20ul的β－巯基乙醇。
b) 如果是单层的组织培养细胞（成纤维细胞，内皮细胞等），可以直接在细胞培养器里裂解细胞。完全吸去培养基后直接加TRK裂解缓冲液至细胞中。加700ul的TRK到T35细颈瓶或250px的培养皿中，更小的培养器加500ul的TRK。将液体布满整个器皿表面，确保细胞裂解完全。将裂解产物转移至1.5mlEP管中。
c) 如果细胞是悬液培养，收集细胞（≤1,500rpm or 400*g）*5min，弃上清，加入TRK裂解液，漩涡振荡混匀，转移到1.5ml EP管中，进行步骤2。
2． 匀浆化裂解产物
“裂解和匀浆化样品”－第四页有详细的说明，如果细胞≤1*105，漩涡振荡1min。不完全使样品匀浆化会显著的减少RNA的产量还容易造成柱子堵塞。
a) 用匀浆器30 s，使样品匀浆化。
b) 用钝的针头的注射器（0.9mm直径），至少吹打5次是样品匀浆化。注射器要除RNase。
3． 将匀浆后的裂解产物转移至Homogenization Spin Column中，离心，≥1,4000*g, 3min,室温。将离心收集的流出液转移到新的EP管中。转到总RNA分离中第4步。
组织的步骤：
1． 用500ul的TRK裂解缓冲液裂解细胞（≤30mg），使用前每1ml TRK裂解缓冲液加入20ul的β－巯基乙醇。
500ulTRK裂解液最大裂解能力30mg，难破碎的组织大于20mg就用700ul的TRK裂解液。当组织量超出建议的最大量时，也不要超过40mg。
组织样品匀浆化参照第四页选择一种方法只用，除非是使用液氮，
2． 离心，≥1,5000*g, 5min, 室温。
3． 转移上清至，Homogenization Spin Column中，离心，≥1,3000*g, 3min,室温。将离心收集的流出液转移到新的EP管中。
总RNA分离：
4． 在裂解产物中加入50％体积（250ul－350ul）的无水乙醇（96％－100％）混匀，漩涡振荡20s。
5． 样品转移到Hibind RNA Mini column上，离心管的最大容量为750ul，加完乙醇后可能会形成沉淀。所以要充分振荡将所有的混合液加入到柱子上。室温离心，10,000*g,0.5-1min。弃去流出液（透过柱子流出到离心管里的液体）。
6． 将柱子放在一个新的2ml收集管中，加上300ul RNA wash buffer I。室温离心，10,000*g, 0.5-1min。同样弃掉流出液。
7． DNase I 消化（选择性）
在我的实验中没有做这一步。
8． 将柱子再放到一个新的2ml收集管中，加入400ul RNA wash buffer I, 室温离心，10,000*g, 30s，弃流出液。
9． 将柱子放到2ml收集管中，加入500ul RNA wash buffer II（乙醇稀释过的），室温离心，10,000*g, 30s，弃流出液。注意：使用前RNA wash buffer II 必须要用无水乙醇稀释(48ml)，按照标签上的说明。
10． 用500ul RNA wash buffer II洗涤一次柱子，同上一步骤一样。室温离心，10,000*g, 30s，弃流出液。然后在空收集管中，以最大转速离心柱子，≥12,000*g, 2min, 室温，使的HiBind 基质完全干燥。
11． 转移柱子到一个新的1.5ml的Ep管中，（试剂盒中没有提供），加入50－100ul的DEPC水洗脱柱子（试剂盒中提供）。确保水直接加到了柱子的基质上。10,000*, 1min, 室温。如果RNA的总量大于30ug，可以进行二次洗脱。
注意：可以选择性地，用大一点的体积洗脱RNA。如果进行二次洗脱，总RNA的量会增加，但是浓度会降低，因为80％以上的RNA会在第一次时被回收。在加柱子前将水加热到65℃并室温孵育柱子5min会增加产量。
氯仿萃取RNA
异丙醇沉淀RNA
酒精清洗
求助：最近要提取血浆中的RNA，不知道用哪种试剂好，查了好多资料，有用Trizol，TrizolLS，RNAisoBlood和天根。但我从没做过，求各位大神给点意见。提取的RNA用于qPCR。
RNA提取对于科研人员来说并不陌生，但是要得到好的结果却不是一件很容易的事情。事实上，现在市面上的丰富的RNA提取试剂基本上可以满足科研人员的需要，为什么往往提取的RNA却容易失败呢？
RNA提取失败的主要现象有三个：提取的RNA降解、提取的RNA量偏低以及提取的RNA纯度低。究竟怎样才能确保RNA提取的成功率呢？
首先，要确定材料的可用性。尽管现有的RNA提取试剂都用抑制RNase的成分，但提取的材料仍需谨慎处理。提取的材料的新鲜度是获取完整RNA的关键，但是由于种种原因无法立即从新鲜材料中提取RNA时，使用Takara公司的样品保护剂SampleProtectorforRNA/DNA可以免去使用液氮或超低温冰箱的不便，同时也可以有效解决组织、细胞样品的短时间保存及运输问题。此外，如果将不同时期收集的样品都预先存放于本试剂中，可以做到立即终止并固定RNA表达的时序变化，减少实验组间的误差。
其次，选择合适的提取试剂是最重要的一步。好的提取试剂在确保成功的同时，操作方便且经济实用。对于动物组织、简单的植物材料、各种微生物、培养细胞的totalRNA提取，Takara公司的RNAisoPlus具有诸多的成功案例。随着2013年7月柱型提取试剂TaKaRaMiniBESTUniversalTotalRNAExtractionKit的成功上市，进一步丰富了TakaraRNA提取的产品线。该产品采用了独特的细胞裂解系统，无需苯酚氯仿抽提等步骤，简单快捷。组织或细胞裂解后，提取操作仅需20分钟便可完成。
对于富含多糖多酚的植物类组织提取是个难点，Takara精心研发的柱型提取试剂TaKaRaMiniBESTPlantRNAExtractionKit可以轻松解决这个问题。TaKaRaMiniBESTPlantRNAExtractionKit可以高效地从各种简单的植物组织材料（叶片、茎、幼苗等）、富含多糖多酚的植物组织材料（果实、种子等）、真菌提取高纯度的TotalRNA，适用范围广泛。按照标准流程，本试剂盒可以有效地提取分子量大于200nt的RNA，也可以按照可选步骤提取得到包含SmallRNA(<200nt)的TotalRNA。试剂盒中包含了RNA提取所需的全部试剂，无需额外购买其它试剂。
1.破碎和裂解植物细胞壁。
2.抑制rna酶
3.去除植物多糖和多酚。树脂 淀粉和纤维材料。
4.去除许多高等植物组织尤其是成熟组织能产生某些水溶性的次级代谢产物，这些次级代谢产物很容易与RNA结合并与RNA共同被抽提出来而阻碍具有生物活性的RNA分离。
除了干扰RNA分离之外，植物多糖和多酚及次级代谢产物还能明显抑制下游RNA反应如转录和PCR.
