
Description | GstDNAPolymeraseisfunctionallyequivalenttothelargefragmentofBsmPolymeraseIandBstPolymeraseI.RecombinantGstDNAPolymerase(largefragment)has5’->3’polymeraseactivity,butlacks5’->3’exonucleaseand3'→5'exonucleaseactivities.GstDNAPolymerase,LargeFragment,hasastrongstranddisplacementactivityandisactiveinawiderangeoftemperaturesfrom30°Cto63°C,withanoptimumofactivityat60°.ItisanenzymewithhighfunctionalsimilaritytoBstDNAPolymerase,LargeFragment,andcanreplaceitinmostapplicationssuchasrapidamplificationoftraceamountsofDNAtemplatesforsequencingandLAMP. |
Applications |
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Source | ArecombinantE.colistraincarryingthelargefragmentofDNApolymerasegenefromGeobacillusstearoThermophilus |
UnitDefinition | Oneunitisdefinedastheamountofpolymeraserequiredtocatalyzetheincorporationof10nmolofdNTPintoacid-insolublematerialin30minutesat65°C. |
Components |
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QualityControl | Theabsenceofendonuclease,nickingactivityandexonucleaseactivityisconfirmedbyappropriatequalitytests. |
StorageCondition | -20°C |
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我用来扩增一个1.1kb的基因,用TAKARA的EXtaq和其他的总是出现突变不知道这个酶能不能完全保真,另外末端是否加A
但是也有以RNA为模板的DNA聚合酶和RNA聚合酶 (也就是反转录酶和RNA依赖的RNA聚合酶),它们的结合位点在RNA上.
也就是说,模版是谁,结合位点就在谁上。
2.结合位点就是启动合成DNA或者RNA的碱基序列,如RNA聚合酶结合位点是转录起始位点,是一段特殊的位于编码基因上游的DNA序列.这段DNA序列可以结合RNA聚合酶,从而起始转录过程.经典的RNA聚合酶结合位点是TATA box.
TATA box是编码序列前的4个碱基.在大多数生物的基因前面都有TATA着4个碱基序列的存在,它就是一个RNA聚合酶结合位点.
解旋酶:在DNA复制、转录时,作用于DNA双链,将双链DNA解开形成单链。
RNA聚合酶:在转录过程中,作用于游离的核糖核苷酸,将它们连接形成mRNA链
DNA连接酶作用于基因工程,用于连接两个DNA片段间的磷酸二酯键。
可分为以下几个类群:(1)依赖DNA的DNA聚合酶;(2)依赖RNA的DNA聚合酶;(3)依赖DNA的RNA聚合酶;(4)依赖RNA的RNA聚合酶。前两者是DNA聚合酶,它使DNA复制链按模板顺序延长。如在原核生物中仅就大肠杆菌中已被发现的就有三种(分别简称为PolⅠ,PolⅡ和PolⅢ等);DNA聚合酶只能在有引物的基础上,即在DNA或RNA引物的3′-OH延伸,这DNA的合成方向记为5′→3′。换言之DNA聚合酶催化反应除底物(αNTP)外,还需要Mg2+ 、模板DNA和引物,迄今细胞内尚无发现可从单体起始DNA的合成。同样,上述(3)和(4)是催化RNA生物合成反应中最主要的RNA合成酶,它们以四种三磷酸核糖核苷(NTP)为底物,并需有DNA模板以及Mn2 及Mg2 的存在下,在前一个核苷酸3′-OH与下一个核苷酸的5′-P聚合形成3′,5′-磷酸二酯键,其新生链的方向也是5′→3′。RNA聚合酶也大量存在于原核和真核生物的细胞中。如大肠杆菌RNA聚合酶分子量4.8×105,由5条多肽链组成,分别命名为α,α,β,β′,和γ,全酶可用α2ββ′λ表示。真核生物RNA聚合酶分子大于5×105,由10~12个大小不等亚基组成。聚合酶除作为自然界生命活动中不可缺少的组分外,在实验室中大多用作生命科学研究的工具酶类之一。


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