EffectivelydigestlargeorsmalldsDNAandssDNAintomononucleotides
DigestunwanteddsDNAandssDNAmoleculesincludingsmallssDNAsuchasrandomhexamers- UseinsensitiveapplicationsrequiringreversetranscriptionwhereanycontaminatingDNAisunwanted
Applications
Baseline-ZERO™DNase*digestsdsDNAandssDNAintomononucleotidesmoreeffectivelythanthecommonlyusedbovinepancreaticDNaseI.EventhesmallDNAoligonucleotidesthatremainaftertreatmentwithbovinepancreaticDNaseIareundetectablebygelelectrophoresisfollowingtreatmentwithBaseline-ZERODNase(Fig.2).RemovalofDNAfromRNApreparationsisparticularlybeneficialwhenRNAinasampleisamplifiedusingamethodthatinvolvesreversetranscriptionusingrandomprimers,sinceanycontaminatingDNAwouldalsobeatemplateforrandom-primedCDNAsynthesis. |
Figure1.Real-timePCRofHeLaRNApreparationstreatedwithvariousDNases.ThelowertheCTvalue(intersectionofcurveswiththeredline),thegreatertheamountofresidualDNAnotdigestedbytheindicatedDNase.Thus,Baseline-ZERO™DNaseremovedalldetectableDNAfromtheRNAsample.TheTaqMan®probeassayamplifieda268-bpfragmentofβ-actin.Sampleswereruninduplicate. |
UnitDefinition:OneMolecularBIOLOGyUnit(MBU)ofBaseline-ZERO™DNaseproducesanincreaseintheA260ofasolutionofdsDNA,of0.001perminuteat25°C.Functionally,1MBUcompletelydigests1µgoflinearpUC19DNAtomononucleotidesin10minutesat37°C. StorageBuffer:Baseline-ZERODNaseissuppliedina50%glycerolsolutioncontaining50mMTris-HCl(pH7.5),10mMCaCl2,10mMMgCl2and0.1%Triton®X-100. 10XBaseline-ZERO™DNaseReactionBuffer:100mMTrisHCl(pH7.5),25mMMgCl2and5mMCaCl2. 10XBaseline-ZERO™DNaseStopSolution:30mMEDTA. QualityControl:Baseline-ZERODNaseisassayedforitsABIlitytocompletelydigestlineardsDNAtomononucleotidesunderstandardassayconditions.Baseline-ZERODNaseisfreeofdetectableRNaseactivitiesasassayedbyPAGEanalysisof1µgofasyntheticRNAtranscriptfollowinganovernightincubationwithsufficientDNaseItocompletelydigest1,000 µgofDNA. References
*Patentpending. |  |
ORDERINFORMATION
Includesa10Xreactionbufferanda10Xstopsolution.ebiomall.com
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我用来扩增一个1.1kb的基因，用TAKARA的EXtaq和其他的总是出现突变不知道这个酶能不能完全保真，另外末端是否加A
DNA连接酶作用于基因工程，用于连接两个DNA片段间的磷酸二酯键。
聚合酶就是多功能的dna的制作机器
但是也有以RNA为模板的DNA聚合酶和RNA聚合酶 （也就是反转录酶和RNA依赖的RNA聚合酶）,它们的结合位点在RNA上.
也就是说，模版是谁，结合位点就在谁上。
2.结合位点就是启动合成DNA或者RNA的碱基序列，如RNA聚合酶结合位点是转录起始位点,是一段特殊的位于编码基因上游的DNA序列.这段DNA序列可以结合RNA聚合酶,从而起始转录过程.经典的RNA聚合酶结合位点是TATA box.
TATA box是编码序列前的4个碱基.在大多数生物的基因前面都有TATA着4个碱基序列的存在,它就是一个RNA聚合酶结合位点.
解旋酶：在DNA复制、转录时，作用于DNA双链，将双链DNA解开形成单链。
RNA聚合酶：在转录过程中，作用于游离的核糖核苷酸，将它们连接形成mRNA链
再来说真核生物,真核生物的DNA聚合酶分为α,β,γ,δ,ε,.首先我来说三个和原核生物中的Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ功能相同的酶.ε类似于原核生物DNA聚合酶Ⅰ,β类似于原核生物DNA聚合酶Ⅱ,δ类似于原核生物DNA聚合酶Ⅲ.α具有引物酶活性,而γ则是作为复制真核生物线粒体内的DNA所需要的酶.
下面是六种不同耐热聚合酶的比较：
Taq：扩增效率最高的耐热DNA聚合酶，能很好的扩增6kb以下的DNA片段。扩增碱基出错率为10-5左右。
Pfu：目前保真度最高的耐热DNA聚合酶，碱基出错率为10-6，但扩增效率低于Taq酶，一般能很好的扩增2kb以下的片段。
TaqPlus：集扩增效率高和保真度好于一身。扩增效率比Pfu高，保真度比Taq好。能有效的扩增10kb以下的片段。
HotstartTaq：经过化学修饰的耐热DNA聚合酶。此酶在常温下，活性被化学基团封闭，要在94℃-95℃加热数分钟才能回复正常活力开始反应，避免了起始循环较低温度下的非特异性扩增，提高了反应的灵敏度和特异性。
LongTaq：具有3’-5’外切酶活性的耐热DNA聚合酶，它不但扩增效率高而且错配率低，对于简单模板可扩增长达40kb的模板，对复杂模板也可扩增长达15kb的片段。
TaqPlatinum：热启动高保真耐热DNA聚合酶。如果对保真度要求很高，而用Pfu扩增有难度，可选用TaqPlatinum，一般扩增长度可达4kb。
根据不同的实验目的选择最合适的酶，
克隆普通长度的目的DNA片段：Taq、TaqPlus
保真度要求较高，片段比较短，如点突变、基因筛选等：Pfu、TaqPlatinum
高保真长片段扩增，如构建基因图谱及分子遗传学研究等：LongTaq、TaqPlus
扩增基因组模板，需要降低背景：HotstartTaq、TaqPlatinum
扩增GC含量较高或二级结构较复杂的模板：TaqPlus、LongTaq、TaqPlatinum
实时荧光定量PCR反应：Taq、HotstartTaq、TaqPlatinum
从菌株或质粒模板，筛选鉴定目的克隆，扩增6kb以下的片段：Taq、TaqPlus、2×TaqPCRMasterMix
模板比较复杂或目的片段丰度低，用普通Taq酶扩增不出条带：2×TaqPCRMasterMix、2×PfuPCRMasterMix
