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RayBiotech/Human CART EIA/1 Plate Kit/EIA-CART-1
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RayBiotech/Human CART EIA/1 Plate Kit/EIA-CART-1
品牌 / 
RayBiotech
货号 / 
EIA-CART-1
美元价:
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数    量:
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4000-520-616

Antigen Information

Accession Number:
  • Q16568
Gene ID:
  • 9607
Gene Symbols:
  • CART
  • CARTPT
Protein Name & Synonyms:
Cocaine- and amphetamine-regulated transcript protein [Cleaved into: CART(1-39) CART(42-89)]

Assay Format

Detection Range:
1-10,000 ng/ml
Recommended Dilution (serum & plasma):
Human: 16X / Mouse: 8X / Rat: 16X
Sensitivity:
7.2 pg/ml
Specificity:
Cross Reactivity: This EIA kit shows no cross-reactivity with any of the cytokines tested: Ghrelin, Nesfatin, Angiotensin II, NPY and APC.
Number of Targets Detected:
1
Species Detected:
  • Human
  • Mouse
  • Rat
Compatible Sample Types:
  • Cell Culture Supernatants
  • Serum
Design Principle:
  • Competition-based
Method of Detection:
Colorimetric
Quantitative/Semi-Quantitative:
  • Quantitative
Solid Support:
96-well Microplate

Product Specifications

Size:
1, 2, or 5 x 96-Well Strip Microplate Kit

Introduction

Cocaine-and amphetamine-regulated transcript (CART) codes for a neuropeptide system with a number of biological roles. The high conservation of CART across species suggests that it has an important role in mammalian physiology. CART is widely expressed in the central nervous system and the periphery, but is particularly concentrated in the hypothalamus. CART peptides appear to have an important function in the regulation of energy homeostasis. CART interacts with a number of central appetite circuits. Hypothalamic CART expression is regulated by a number of peripheral factors, including the adipose hormone leptin. Several research groups have shown that intracerebroventricular administration of CART (55-102) reduces appetite and stimulates energy expenditure. Animal studies show that CART knockout mice demonstrate small but significant increases in weekly food consumption, body weight and fat mass compared with their wild-type littermates when on a high-fat diet. These reports suggest that CART peptide acts as an endogenous inhibitor of food intake. On the other hand, hypothalamic CART may also play an orexigenic role under specific circumstances, as injection of CART (55-102) into specific hypothalamic nuclei increases food intake.The CART system demonstrates multiple roles in energy homeostasis, depending on the internal and external milieu. The development of specific CART antagonists would be very useful in dissecting these multiple roles.

Product Features

  • Strip plates and additional reagents allow for use in multiple experiments
  • Quantitative protein detection
  • Establishes normal range
  • The best products for confirmation of antibody array data

Application Notes

Kit Components
  • Pre-Coated 96-well Strip Microplate
  • Wash Buffer
  • Standard Peptide
  • Assay Diluent(s)
  • Biotinylated Peptide
  • HRP-Streptavidin
  • TMB One-Step Substrate
  • Stop Solution
  • Assay Diagram
  • Positive Control Sample
  • Capture Antibody
  • User Manual
Other Materials Required
  • Distilled or deionized water
  • Precision pipettes to deliver 2 µl to 1 ml volumes
  • Adjustable 1-25 ml pipettes for reagent preparation
  • 100 ml and 1 liter graduated cylinders
  • Tubes to prepare standard and sample dilutions
  • Orbital shaker
  • Aluminum foil
  • Saran Wrap
  • Absorbent paper
  • Microplate reader capable of measuring absorbance at 450nm
  • SigmaPlot software (or other software that can perform four-parameter logistic regression models)
Protocol Outline
  • Prepare all reagents, samples and standards as instructed.
  • Add 100 µl detection antibody to each well.
  • Incubate 1.5 h at RT or O/N at 4°C.
  • Add 100 µl standard or sample to each well.
  • Incubate 2.5 h at RT.
  • Add 100 µl prepared streptavidin solution.
  • Incubate 45 min at RT.
  • Add 100 µl TMB One-Step Substrate Reagent to each well.
  • Incubate 30 min at RT.
  • Add 50 µl Stop Solution to each well.
  • Read plate at 450 nm immediately.

Storage/Stability

Standard, Biotinylated CART peptide, and Positive Control should be stored at -20°C after arrival. Avoid multiple freeze-thaws. The remaining kit components may be stored at 4°C. Opened Microplate Wells and antibody (Item N) may be stored for up to 1 month at 2° to 8°C. Return unused wells to the pouch containing desiccant pack and reseal along entire edge.
  1. McGee-Lawrence M., Buckendahl P., Carpenter C., et al. Suppressed bone remodeling in black bears conserves energy and bone mass during hibernation. J Exp Biol. 2015 Jul;218(Pt 13):2067-74. doi: 10.1242/jeb.120725. Species: Black BearSample type: Serum
  2. Wysokinski A., et al. Blood serum levels of CART peptide in patients with schizophrenia. Psychiatry Research. 2014 August, epub ahead of print. DOI: 10.1016/j.psychres.2014.08.017on clozapinemonotherapySpecies: HumanSample type: Serum
  3. Hehir MP. Laursen H,Higgins MF, Brennan DJ, O'Connor DP, McAullife FM. Maternal and fetal cocaine- and amphetamine-regulated transcript in diabetic and non-diabetic pregnancy. Gynecol Endocrinol. 2012;28(9):682-685.Species: HumanSample type: Serum
  4. Hehir M., Laursen H., Higgins M., et al. Maternal and fetal cocaine- and amphetamine-regulated transcript in diabetic and non-diabetic pregnancy. Gynecol Endocrinol. 2012 Sep;28(9):682-5. doi: 10.3109/09513590.2011.652245.Species: HumanSample type: Serum

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TaqDNA聚合酶是Mg2+依赖性酶,该酶的催化活性对Mg2+浓度非常敏感。以活性程度很低的鲑鱼精子DNA为模板,dNTP的浓度为0.7~0.8mmol/L时,用不同浓度Mg2+进行PCR反应10min,测定结果为Mgcl2浓度在2.0mmol/L时该酶催化活性最高,此浓度能最大限度地激活TaqDNA聚合酶的活性,Mg2+过高就抑制酶活性,当Mgcl2浓度在10mmol/L时可抑制40~50%的酶活性。由于Mg2+能与dNTP结合而影响PCR反应液中游离的Mg2+浓度,因而Mgcl2的浓度在不同的反应体系中应适当调整,优化浓度。一般反应中Mg2+浓度至少应比dNTP总浓度高0.5~1.0mmol/L。适当浓度的KCl能使Taq DNA聚合酶的催化活性提高50~60%,其最适浓度为50mmol/L,高于75mmol/L时明显抑制该酶的活性。
二者的区别在于作用的底物:DNA连接酶与DNA聚合酶都是形成磷酸二酯键。但DNA连接酶连接的是DNA片段(比如冈崎片段);DNA聚合酶是将单个脱氧核糖核苷酸按顺序连接到DNA链上。向左转|向右转
DNA聚合酶作用于DNA复制时,用于连接两个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键以及碱基互补配对时的氢键。
DNA连接酶作用于基因工程,用于连接两个DNA片段间的磷酸二酯键。
一般来说,以DNA为模板的DNA聚合酶和RNA聚合酶都的结合位点都在DNA上。
但是也有以RNA为模板的DNA聚合酶和RNA聚合酶 (也就是反转录酶和RNA依赖的RNA聚合酶),它们的结合位点在RNA上.
也就是说,模版是谁,结合位点就在谁上。
2.结合位点就是启动合成DNA或者RNA的碱基序列,如RNA聚合酶结合位点是转录起始位点,是一段特殊的位于编码基因上游的DNA序列.这段DNA序列可以结合RNA聚合酶,从而起始转录过程.经典的RNA聚合酶结合位点是TATA box.
TATA box是编码序列前的4个碱基.在大多数生物的基因前面都有TATA着4个碱基序列的存在,它就是一个RNA聚合酶结合位点.
我要P一个3kb左右的目的基因,需要一个保真性高的酶,因为后面要测序,而且我的两个引物的GC含量相差也很大,还需要一个载体连接去进行筛选,这个载体要4kb以上的,因为要和我的目的基因大小相差大一点的,而且这个载体上还要有多个切割位点,好让我切割下来,与最终的质粒相连。
最近,我看了很多这方面的资料,但是我对这个方面不是很了解,所以现在搞得头昏眼花的,不知道该选什么酶和载体,希望大家多多帮忙
在此十分感谢
哪里能买到BstDNA聚合酶!哪里的更好用一点?请大家帮忙!
首先,原核生物DNA聚合酶分为Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ.Ⅰ主要是起修复的作用(比如光修复),还有就是把RNA引物切除后的空隙填补起来,Ⅱ是参与原核生物SOS修复的酶,Ⅲ是原核生物在DNA延长中起主要作用的酶.
再来说真核生物,真核生物的DNA聚合酶分为α,β,γ,δ,ε,.首先我来说三个和原核生物中的Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ功能相同的酶.ε类似于原核生物DNA聚合酶Ⅰ,β类似于原核生物DNA聚合酶Ⅱ,δ类似于原核生物DNA聚合酶Ⅲ.α具有引物酶活性,而γ则是作为复制真核生物线粒体内的DNA所需要的酶.
合理选择耐热DNA聚合酶是PCR成败与否的一个关键因素。选择最合适的耐热聚合酶,是进行PCR实验首先要考虑的问题。许多耐热DNA聚合酶的主要区别在于特异性、保真性、耐热性、扩增速率、扩增片段长度等几个指标。
下面是六种不同耐热聚合酶的比较:
Taq:扩增效率最高的耐热DNA聚合酶,能很好的扩增6kb以下的DNA片段。扩增碱基出错率为10-5左右。
Pfu:目前保真度最高的耐热DNA聚合酶,碱基出错率为10-6,但扩增效率低于Taq酶,一般能很好的扩增2kb以下的片段。
TaqPlus:集扩增效率高和保真度好于一身。扩增效率比Pfu高,保真度比Taq好。能有效的扩增10kb以下的片段。
HotstartTaq:经过化学修饰的耐热DNA聚合酶。此酶在常温下,活性被化学基团封闭,要在94℃-95℃加热数分钟才能回复正常活力开始反应,避免了起始循环较低温度下的非特异性扩增,提高了反应的灵敏度和特异性。
LongTaq:具有3’-5’外切酶活性的耐热DNA聚合酶,它不但扩增效率高而且错配率低,对于简单模板可扩增长达40kb的模板,对复杂模板也可扩增长达15kb的片段。
TaqPlatinum:热启动高保真耐热DNA聚合酶。如果对保真度要求很高,而用Pfu扩增有难度,可选用TaqPlatinum,一般扩增长度可达4kb。
根据不同的实验目的选择最合适的酶,

克隆普通长度的目的DNA片段:Taq、TaqPlus
保真度要求较高,片段比较短,如点突变、基因筛选等:Pfu、TaqPlatinum
高保真长片段扩增,如构建基因图谱及分子遗传学研究等:LongTaq、TaqPlus
扩增基因组模板,需要降低背景:HotstartTaq、TaqPlatinum
扩增GC含量较高或二级结构较复杂的模板:TaqPlus、LongTaq、TaqPlatinum
实时荧光定量PCR反应:Taq、HotstartTaq、TaqPlatinum
从菌株或质粒模板,筛选鉴定目的克隆,扩增6kb以下的片段:Taq、TaqPlus、2×TaqPCRMasterMix
模板比较复杂或目的片段丰度低,用普通Taq酶扩增不出条带:2×TaqPCRMasterMix、2×PfuPCRMasterMix
大家谁用过Invitrogen的platinumpfxDNA聚合酶?保真性是否如宣传的那样
我用来扩增一个1.1kb的基因,用TAKARA的EXtaq和其他的总是出现突变不知道这个酶能不能完全保真,另外末端是否加A
连结酶是最后把dna粘起来
聚合酶就是多功能的dna的制作机器
我以质粒为模板进行定点突变,质粒加目的片段一共6.5kb,不知道选用那种高保真聚合酶比较好,想选PfuDNA聚合酶,查了查比较好的公司Promega生产的了,现在又查到TaKaRa生产的PyrobestDNA聚合酶,不知道这两种酶哪个比较好一些。请哪位高手指点一下。


问一个弱弱的问题,本人现在打算用直接测序方法来检测SNP,那么PCR体系中DNA聚合酶有特殊要求吗?比如要精确的pfu酶,如果需要那么哪个厂家的酶比较可靠,成功率高呢?谢谢
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