E.coliDNALigaseisaNAD+-dependentenzymethatcatalyzestheformationofphosphodiesterbondsbetweencomplementary3'-hydroxyland5'-phosphorylterminiofdsDNA.
Description:
E.coliDNALigaseisaNAD+-dependentenzymethatcatalyzestheformationofphosphodiesterbondsbetweencomplementary3'-hydroxyland5'-phosphorylterminiofdsDNA.TheenzymeworksbestwithcohesivedsDNAendsandisalsoactiveonnickedDNA.BluntendscanbeligatedinthepresenceofcondensingreagentssuchaspolyethyleneglycolorFicoll®.A10xReactionBufferisprovidedwiththeenzyme.
Source:
E.colistraincontaininganoverproducingcloneofE.coliDNALigase.
Application:
-Ligationforcloning
-OkayamaandBergCDNAcloning
UnitDefinition:
OneunitofE.coliDNALigaseisdefinedastheamountofenzymerequiredtoprovideligation(>50%)ofHindIIIdigestedphagelamBDaDNA(5'-DNAterminiconcentrationof0.12µM,300µg/ml)in30minutesat16°Cunderstandardassayconditions.
ReactionConditions:
10xE.coliDNALigaseReactionBuffer
Incubateat16°C
10xE.coliDNALigaseReactionBuffer:
300mMTris-HCl
40mMMgCl2
260µMNAD
10mMDTT
pH8.0@25°C SpecificActivity: 10,000Unit/mg
RecommendedStorageCondition:-20°C
References:
1.Zimmerman,S.B.andPheifer,B.H.(1983)Proc.Natl.Acad.Sci.,USA80,5852-5856.
2.Okayama,H.andBerg,P.(1982)Mol.Cell.Biol.2,161-170.
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所有产品都有正品保障,透析袋现货,为美国spectrumlabs、viskase、cellu.sep三大公司生产。 快速连接? 试剂盒 货号 规格 价格 库存 #M2200L 150 次反应 4,569.00...
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T4 DNA连接酶作为工具酶种重要的连接酶，本文将就其来源、用途和保存等方面对其进行详细介绍。一、简介 T4 DNA连接酶催化dsDNA平末端或粘性末端相邻核苷酸的5-磷酸和3-OH的连接反应。依赖ATP将ssRNA或ssDNA连接到ssRNA或ssDNA分子的5-P末端， 还能将 [5-32P]核苷酸、3，5-双（磷酸）加入到RNA上，但不能和全单链核苷酸连接。本公司所生产T4 DNA连接酶比一般T4 DNA连接酶连接效率要高2-4...
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上海樊克生物科技有限公司在发布的E3连接酶蛋白ARIH2抗体供应信息，浏览与E3连接酶蛋白ARIH2抗体相关的产品或在搜索更多与E3连接酶蛋白ARIH2抗体相关的内容。
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3.6.1 用 T4 DNA连接酶连接RNA分子的相关实验步骤、实验技巧、实验protocol、实验经验及常见问题。T4 DNA 连接酶可将双链复合物缺刻连接，其中包括 RNA-DNA 杂合链及 RNA-RNA 杂合链。
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C、T4连接酶 D、RNA酶 E、Klenow片段您可能感兴趣的试题 四肢静脉采血时,止血带结扎的时间不宜超过 A.2min B.3min C.4min D.5min E. 6min 答案解析 半...
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特性
高反应效率
粘性末端和平齐末端均可连接
限制性酶切片段的克隆
将 linker 或 adapter 连接到 DNA 片段的平齐末端
室温或 16℃ 均有活性
概述该酶催化契合的双链DNA或RNA的 5´-磷酸末端和 3´-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平滑末端或粘性末端 DNA 之间的连接，还可以修复双链 DNA、RNA 或 DNA/RNA 杂交双链中的单链切刻（1）。
来源纯化自 E. coli C600 pcl857 pPLc28 lig8（2）。
反应条件1 X
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连接酶链反应（Ligase Chain Reaction，LCR）是继PCR后，新出现的一种更加完善的DNA体外扩增和检测技术。在检测点突变等方面具有独特的优点。...
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特性
连接粘性末端接头
连接双链 RNA 中的切刻最佳用酶
可用于 DNA/RNA 杂交链中，RNA 3羟基与 DNA 5 磷酸基的连接
概述T4RNA连接酶 2 ，也被称为 T4Rnl-2 （ gp24.1 ），同时具有 RNA 链分子间和分子内连接活性 （1-3）。与 T4 RNA 连接酶1 （NEB #M0204） 不同的是，T4 RNA连接酶 2对双链 RNA切刻的连接活性要明显高于对单链 RNA的末端连接。该酶连接时需要相邻的 3´ 羟基与 5´磷酸基
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常见问题
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在使用NEB的T4DNA连接酶，想请问一下平末端连接的体系和反应温度、时间，因为之前用了10微升的体系，2微升buffer，1微升载体，6微升目的片段，1微升T4连接酶，没成功，有用过的同志们帮帮忙。
现有DNA双链，其中一条有缺口，用T4DNA
连接酶封闭缺口反应体系是什么？连接酶浓度有什么要求？
请问，用T4
连接酶连接以后，做转化时是否需要酒精纯化一下？还有一个问题，用T4聚合酶补平粘性末端以后，可以直接用来做连接吗？
泛素连接酶，又称为E3泛素连接酶，是一个能够将泛素分子连接到目的蛋白质的某个赖氨酸上的酶。向左转|向右转
各位大侠,我的目的基因大约1.7KB,
载体大约4.7KB,做了几次连接实验均为成功,不知哪个公司的T4
连接酶的连接效率较高.请大家帮忙,我很急.
它是一种封闭DNA链上缺口酶，借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5'-PO4与另一DNA链的3'-OH生成磷酸二酯键。但这两条链必须是与同一条互补链配对结合的(T4DNA连接酶除外)，而且必须是两条紧邻DNA链才能被DNA连接酶催化成磷酸二酯键。
连接酶有T4噬菌体DNA连接酶、T4噬菌体RNA连接酶、大肠埃希菌DNA连接酶等。DNA连接酶可连接平端，也连接粘端。反应需有Mg2+和ATP存在，pH7.5-7.6。最适温度37℃，30℃以下活性明显下降，但考虑到被连接DNa 的稳定性和粘性末端的退火温度，一般平端连接用20-25℃，粘端连接用12℃左右。
聚合酶有DNA聚合酶（以DNA为模板合成DNA大肠埃希菌DNA聚合酶Ⅰ，大肠埃希菌DNA聚合酶Ⅰ大片段（Klenow大片段），T4或T7噬菌体DNA聚合酶等）；RNA聚合酶（以DNA为模板合成RNA，T7或T3噬菌体RNA聚合酶）；逆转录酶（以RNA为模板合成DNA，除RNA病毒中发现外，发现大肠埃希菌DNA聚合酶Ⅰ和Taq DNA聚合酶都有逆转录活性）。
大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ具有5′→3′聚合酶活性和5′→3′，3′→5′外切酶活性。Klenow片段是DNA聚合酶Ⅰ被枯草杆菌酶作用产生的一个大片段，有5′→3′聚合酶和3′→5′外切酶活性，无5′→3′外切酶活性。可用于缺口翻译（Nick translation）法标记核酸，也可用于DNA序列测定，修补DNA链等。向左转|向右转
所有的DNA连接酶都具有专一性
酶对所作用的底物有严格的选择性。一种酶仅能作用于一种物质，或一类分子结构相似的物质，促其进行一定的化学反应，产生一定的反应产物，这种选择性作用称为酶的专一性。
限制性内切酶:可以切割磷酸二酯键
DNA连接酶:可以连接被限制酶切割开磷酸二酯键
有没有人用过NEB的Blunt/TALigaseMasterMix和InstantSticky-endLigaseMasterMix？
有没有人用过NEB的Blunt/TALigaseMasterMix和InstantSticky-endLigaseMasterMix？
有没有人用过NEB的Blunt/TALigaseMasterMix和InstantSticky-endLigaseMasterMix？
.....它说连得又快又好，想问问有木有小白鼠试过它家的这两个产品呢。。如果用过能不能请教下效果咋样呢。。我之前用Thermo的T4，属于又便宜又慢效果还可以的那类型的。。（虽然说thermo也说室温30min就ok，但是还是4度过夜了，室温30min不靠谱）
DNA的复制事实上是半不连续复制 即只有一条链的合成是连续的 这听起来很神奇 但确实是这样 连续合成的链叫做前导链 另一条链称为后随链 它的合成是不连续的 以它为模板的合成 需要一段一段地进行 所合成的片段叫做冈崎片段
产生这一现象的原因在于 DNA合成酶只能沿5'-3'的方向合成DNA 而DNA本身的两条链又是反向分布的 所以就造成了只有一条链合成可以连续地进行下去（以它为模板的子链生成方向正好是DNA聚合酶可以直接提供的） 而后随链要盘绕成回环 反扭过来 才能合成
再合成起始的时候 DNA聚合酶是需要一段RNA引物的 在原核生物中这一引物是由dnaQ(一种酶)在已解旋的单链5'端合成，真核生物中也有对应的酶 由于后随链的合成不连续 所以每个片段都要有引物 在DNA合成结束的时候 这些引物要被切除 因而留下缺口 这时又要特定的酶去填补缺口（比如 大肠杆菌中的DNA聚合酶I）可是填补序列和周围序列间会有缺刻 也就是说他们交界处的3'-5'磷酸二脂键是断开的 这时需要DNA连接酶发挥作用 将其连好
所以 后随链上的缺刻多 还真够DNA连接酶忙一阵的 前导链上只有一开始有RNA引物 因此 最后也基本只有这个地方会用到连接酶
求有经验的大神指教，我的载体和目的基因连不上，转化不到大肠中，比例为1:3。另外，为啥胶回收后的载体浓度那么低，大约6ng/ul了，影响连接么？
