
The ApoAlert DNA Fragmentation Assay Kit detects nuclear DNA fragmentation, a hallmark of apoptosis. The kit can be used with tissue sections as well as cultured cells, and results can be visualized directly by fluorescence microscopy or quantified by flow cytometry. During apoptosis, cellular endonucleases cleave nuclear DNA between nucleosomes, producing a mix of DNA fragments that vary in length by multiples of 180 to 200 bp. The ApoAlert DNA fragmentation assay incorporates fluorescein-dUTP at the free 3"-hydroxyl ends of the fragmented DNA using the TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end-labeling) method. The fluorescein-labeled DNA can then be quantified using either fluorescence microscopy or flow cytometry.
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求有经验的大神指教,我的载体和目的基因连不上,转化不到大肠中,比例为1:3。另外,为啥胶回收后的载体浓度那么低,大约6ng/ul了,影响连接么?
连接酶通常是包括“连接酶”这个字,就如DNA连接酶是将脱氧核糖核酸(DNA)片段连接。其他普遍的名称包括“合成酶”,因为这些酶是用作合成新的分子,或当它们是将二氧化碳加入一个分子时则称为“羧化酶”。
菌体构建时,目的基因连接在T载体上,测序也正确,但是将目的基因还有载体分别双酶切后总是连接不上,将连接后产物跑核酸胶,什么也没有,不知道是什么原因?我的目的基因浓度为9ng/ul,载体回收后的浓度为6ng/ul,是因为浓度太低的原因吗?还有就是连接有目的基因的T载体双酶切后出现了三条带,这个又是什么原因呢?希望得到解答
DNA连接酶主要是连接DNA片段之间的磷酸二酯键最初从原核生物(大肠杆菌)分离得到的.现在生物基因工程主要是从T4噬菌体中分离得到的,
大家有用过Invitrogen的T4连接酶吗?说明书上是23-26度连接,一般的连接酶不都是16度吗?应该用多少度呢?另外,说明书上还说连接后为了达到更好的转化效率,应将连接反应液至少稀释5倍再转化,是这样吗?谢谢大家帮忙啊
DNA连接酶:可以连接被限制酶切割开磷酸二酯键
产生这一现象的原因在于 DNA合成酶只能沿5'-3'的方向合成DNA 而DNA本身的两条链又是反向分布的 所以就造成了只有一条链合成可以连续地进行下去(以它为模板的子链生成方向正好是DNA聚合酶可以直接提供的) 而后随链要盘绕成回环 反扭过来 才能合成
再合成起始的时候 DNA聚合酶是需要一段RNA引物的 在原核生物中这一引物是由dnaQ(一种酶)在已解旋的单链5'端合成,真核生物中也有对应的酶 由于后随链的合成不连续 所以每个片段都要有引物 在DNA合成结束的时候 这些引物要被切除 因而留下缺口 这时又要特定的酶去填补缺口(比如 大肠杆菌中的DNA聚合酶I)可是填补序列和周围序列间会有缺刻 也就是说他们交界处的3'-5'磷酸二脂键是断开的 这时需要DNA连接酶发挥作用 将其连好
所以 后随链上的缺刻多 还真够DNA连接酶忙一阵的 前导链上只有一开始有RNA引物 因此 最后也基本只有这个地方会用到连接酶

