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MOUSE ANTI-CANINE CORONAVIRUS NUCLEOPROTEIN ANTIBODY (M938)

Mouse anti canine coronavirus Nucleoprotein antibody (M938) is a monoclonal antibody that is specific for canine coronavirus (CCoV) nucleoprotein (nucleocapsid).

PRODUCT DETAILS – MOUSE ANTI-CANINE CORONAVIRUS NUCLEOPROTEIN ANTIBODY (M938)

  • Specific for canine coronavirus Nucleoprotein (nucleocapsid).
  • Isotype – Mouse IgG1.
  • Purified by Protein A column chromatography.
  • Suitable for use in immunoassay development or other applications.

BACKGROUND

Human coronaviruses such as SARs and MERs have raised concerns about coronaviruses as agents of serious infectious disease. Canine coronavirus (CCoV) causes a highly contagious disease of dogs that primarily attacks the intestinal tract. CCoV infection is difficult to identify and symptoms often resemble those of other viruses such as canine parvovirus and canine distemper virus.

CCoV are enveloped viruses with a large (27-32 kb) single-stranded, positive-sense RNA which is complexed with the highly basic nucleocapsid phosphoprotein (N) to form a helical capsid found within the viral envelope. This nucleoprotein packages the positive strand viral genome RNA into a helical ribonucleocapsid (RNP) and plays a fundamental role during virion assembly through its interactions with the viral genome and membrane protein M. It plays an important role in enhancing the efficiency of subgenomic viral RNA transcription as well as viral replication.

Coronavirus membranes contain at least three viral proteins: the spike (S), envelope (E), and membrane (M) proteins. The S glycoprotein mediates viral attachment to specific cell receptors and fusion between the envelope and plasma membrane and it is the main inducer of virus-neutralizing antibodies. Coronaviruses use a variety of coreceptors during entry, including DC-SIGN. The E protein plays an important role in viral envelope assembly, but it is not essential for virus propagation. The M protein, the most abundant structural component, is a type III glycoprotein (Le Poder, 2011).

REFERENCES

  • Le Poder, S (2011). Feline and Canine Coronaviruses: Common Genetic and Pathobiological Features, Advances in Virology, vol. 2011, Article ID 609465, 11 pages.

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RFLP法1)常规制备DNA盐析法1.用淋巴细胞分离液从抗凝血中分离出白细胞。2.每3ml细胞悬液加10ml红细胞裂解液溶解红细胞两次,再加2ml白细胞裂解液溶解白细胞。3.加50μl 10% SDS和70μl蛋白酶K消化蛋白质,37℃过夜或55℃ 3h。4.加0.25体积饱和醋酸钠溶液,剧烈摇动15s。5.2000 查看更多>
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定量PCR(即时聚合酶链锁反应,Real-time Polymerase Chain Reaction,简称 Real-time PCR、即时PCR),又称定量即时聚合酶链锁反应(Quantitative real time polymerase chain reaction,简称 Q-PCR/qPCR/rt-qPCR、定量即时PCR、即时定量PCR),是一种在DNA扩增反应中,以萤光染剂侦测每次聚合酶链锁反应(PCR)循环后产物总量的方法... 查看更多>
PCR-SSO(ASO)探针法1)常规提取DNA参见RFLP法2)PCR扩增参见PCR-RFLP法3)斑点杂交1.将5~20μl扩增产物,加变性液100~200μl室温处理5~15min。2.在尼龙滤膜(预先用2×SSC浸湿2min)上真空点样,每孔以10×SSPE 200μl冲洗,抽干,80℃干燥2h。3.标记探针 查看更多>
聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点;能在一个试管内将所要研究 的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断;可从一根毛发、一滴血、甚 查看更多>
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1 导言小RNA(miRNAs)是一种内源性非编码蛋白的小分子RNA,它们是许多基础的细胞过程中基因表达的主要调节因子,这些过程包括细胞增殖、细胞分化以及细胞凋亡等。miRNA在肿瘤生长过程中也发挥着重要作用。一般来说,miRNA通过控制翻译过程来 查看更多>
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  由上海东松医疗科技有限公司组织招标的《上海交通大学医学院附属仁济医院血流测量仪等设备》(招标编号:0811-DSITC170015)询价采购项目,于2017年1月12日在中国上发布招标信息。  经评审小组评议及用户确认,现将本次评审结果公告如下:  设备名称及数量:  第1包:血流测量仪/壹套  成交供应商:帕瑞医学科技(北京)有限公司  第2包:细胞钙成像系统/壹套  成交供应商:默瑞(上海)生物科技有限公司  第3包:荧光定量P... 查看更多>
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荧光定量pcr123
韦小西西2021-07-23
做了三个基因,一个是p38,第二个是glut,第三个是内参,分为四组,对照组,低中高组,每组四个副孔,这个扩增曲线怎么样?不太懂看曲线
实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
PCR(聚合酶链式反应)是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72°C左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。
恒温PCR和实时荧光定量PCR的不同,是不同在实时荧光定量PCR的系统中加入了荧光染料(SYBR Green 或Taqman 探针等等)。以SYBR Green为例,这种染料可以结合在双链的DNA上,当PCR不断进行时,每一次退火生成的双链DNA也在增加,荧光染料结合也越多,荧光也越强。在机器中有一个探测荧光的探头,可以定量检测荧光的强度,转换成数值。这样就可以实时记录反映体系中DNA的反应情况。
荧光PCR更有优势,因为荧光PCR灵敏度高于恒温PCR,同样价格也高一些。
你这个结论并不对。两步法,三步法并没有本质区别,信号的读取都是在每一个延长结束后读取。定量PCR一开始的时候也是三步法的。

两步法,是因为设计引物的时候把退火温度设为酶的工作温度,而且定量PCR的产物都很短,需要的时候都短,所以两步法更方便。三步法的话,花的时间长,不利于快速实验。
第一次做这方面的实验,这张图的右半个不会选,希望大家帮帮忙

本人之前尝试过用普通的Taq酶扩增2kb的条带,但是老是扩不出来。:(我想问一下各位老师有没有试过用普通的Taq酶扩长片断呢?另外还有个问题就是要是我用PrimeSTARTMHSDNApolymerase可以扩出长片断吗?谢谢。

求助各位大侠,最近做的荧光定量PCR,标准曲线稀释一直不好,请教各位,

采用的标准品是自己提的细胞基因组,浓度最高从125ng/uL,5倍稀释,到最低0.2ng/uL,问题如下:

1.最后一个浓度做出来的扩增曲线重复性非常差,而且与前一个浓度梯度CT值差值约为5左右,稀释过程与前几个浓度时操作一致。

2.待测样品中目标基因若含量高,则重复性尚可,若含量略低,Ct值在30及以上,重复性也很差。


说明,

1、每个标准曲线浓度的稀释操作均一致,涡旋混匀时间>15s

2、所用移液枪无问题,枪头为低吸附枪头

3、操作移液枪无问题

实验不顺,甚是不爽,各位大侠出手解救


所谓Ct值,就是最先出现超过阈值信号的那个循环数。或者说是到了第几个循环才出现超过阈值的信号。

C代表的是cycle,循环数目,T代表的是threshold,阈值。

所以表达量越少的话,需要越多的循环才能扩增出来。也就是CT值越高
最近要做realtimePCR,taqman探针法,没有买市场上的产品,可否先用普通taq酶试试?
这样设想的前提是因为,普通Taq酶也具有5‘-3’外切酶活性,如果可以的话,与普通PCR相比,反应体系需要做什么样的改动呢?
用的是ABI的机器。
实时荧光定量PCR123
小镜a浣溪沙2017-10-03
实时荧光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR,RTFQ PCR) 是1996 年由美国Applied Biosystems 公司推出的一种新定量试验技术,它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。

检测指标是:各样品的目的基因和管家基因分别进行Realtime PCR反应。PCR产物与 DNA Ladder在2%琼脂糖凝胶电泳,GoldView染色,检测PCR产物是否为单一特异性扩增条带。

原理:

PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;刚开始时, 探针结合在DNA任意一条单链上;PCR扩增时,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。
普通的PCR大多数是定性实验,而实时荧光定量PCR则定量和定性都可以做。应用领域也不一样,普通PCR一般应用于基因组克隆、DNA测序、RNA反转录等,而实时荧光定量PCR一般应用于mRNA表达量分析、绝对定量、蛋白表达、SNP分析、阴阳性解析等领域。不是定量PCR比PCR好,而是两者应用与不同的领域,起到了不同的作用。
荧光定量PCR较普通PCR不同的一点就是可以实时检测PCR扩增产物,从而可进行绝对定量或者相对定量。

请教园友:

一般做mRNA表达的时候,需要注意提取的RNA中是否有DNA污染,或者通过设计跨内含子的引物来解决。那么,检测MmiRNA的时候,需要注意RNA中DNA污染的问题么?

用已知浓度的DNA样本(通常是质粒)梯度稀释成一系列的样本。做实验的时候,这些标准品和待测样本加在同样一块96孔盘的不同孔内。一起做PCR。

标准品的荧光强度和已知的浓度作图,可以得到一条标准曲线。而待测样本的荧光强度测出以后,就可以在标准曲线上算出样本浓度了。
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