
Description
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TransfectionReagentfor ASPC-1Cells(PancreaticBetaCells,CRL-1682)
- Ananoparticle-basedliposomeformulation
- Transfectionprotocolsprovidedfortransfectionofproteins,DNA,mRNA,siRNA,shRNAandmicroRNA
- TransfectionEnhancerreagentprovidedwiththekit
- Producehigherlevelofrecombinantproteinexpressionwithminimaldisruptionofnormalcellfunction
- Generatephysiologicallyrelevantdatayoucantrust
- EffectiveforplasmidDNA/siRNAco-transfection
- Easy-to-usetransfectionprotocolwithreproducIBLeresults
- Lowcytotoxicity
- DownloadinvitroASPC-1transfectionprotocol:[PDF]
- Download ASPC-1CRISPR/Cas9transfectionprotocol:[PDF]
- DownloadPowerPointpresentationforASPC-1cellstransfectionkit:[PPT]
- DevelopedandmanufacturedbyAltogenBiosystems
TransfectionEfficiency:
Reagentexhibitsatleast70%transfectionefficiencyofsiRNAdelivery.Transfectionefficiencywasdeterminedby qRT-PCR.
TransfectionProtocolandMSDS:
DownloadAltogenBiosystemsASPC-1TransfectionProtocol:[PDF]
DownloadMSDS:[PDF]
ASPC-1 CellLine:
Pancreaticcancerisoneofthemostchallengingcancerstodiagnose,astherenospecificandreliablescreeningtestsonthemarketthatcanhelpdetectthediseaseinearlystages.AccordingtotheAmericanCancerSociety,ifcaughtinitsearlystages,the5-yearsurvivalrateis27%,butifcancermetastasizesthenthisnumbergoesdownto11%.TheAsPC-1celllinecomprisingpancreaticbetacellsandisaninvaluabletoolforpancreaticcancerresearchaswellascommonlyemployedforstudyinghumaninfectionsrelatedtothepancreas.TheAsPC-1celllinewasreestablishedvianudemousexenograftsinitiatedwithcellsfromtheascitesofa62-year-oldCaucasianwomanwithmetastaticpancreaticadenocarcinoma.Thereestablishedepithelialcellsretainedtheiroriginalmorphology.Thistumorrepresentsanewmodelforhumanpancreaticcancer.AsPC-1cellsareusedinstudiesseekingpossibletreatmentsforpancreaticcancer,whichhasafive-yearsurvivalrateoflessthanonepercent.Forexamples,researchhasshownthattheplantalkaloidsanguinarineinducedapoptosisofAsPC-1cells.Inanotherstudy,immunoprecipitationandELISAusinghumanpancreaticcancercellsrevealedthepresenceofhighlevelsofDcR3proteininAsPC-1cells.ReducingendogenousDcR3levelsincreasesFasL-inducedapoptosisofhumanpancreaticcancercells.Anotherintriguingstudyindicatedthatdeuteriumoxide(D2O),alsocalledheavywater,inducedapoptosisofAsPC-1,andisconsideredapossiblefuturetreatmentagainstAsPC-1.
Data:
Figure1.CyclophilinBsilencingefficiencywasdeterminedbyqRT-PCRintheAsPC-1cellstransfectedbyCyclophilinBsiRNAornon-silencingsiRNAcontrolfollowingtherecommendedtransfectionprotocol.CyclophilinmRNAexpressionlevelsweremeasured48hourspost-transfection.18SrRNAlevelswereusedtonormalizetheCyclophilinBdata.Valuesarenormalizedtountreatedsample.Dataarepresentedasmeans±SD(n=3).
Figure2.ProteinexpressionofCyclophilinBinAsPC-1cells.DNAplasmidexpressingCyclophilinBorsiRNAtargetingCyclophilinBweretransfectedintoAsPC-1cellsfollowingAltogenBiosystemstransfectionprotocol.At72hourspost-transfectionthecellswereanalyzedbyWesternBlotforproteinexpressionlevels(normalizedbytotalprotein,10µgoftotalproteinloadedpereachwell).Untreatedcellsusedasanegativecontrol.
Selected invivo transfectionproductcitations(ALTOGEN® INVIVO TransfectionKits usedinthefollowingpublications):
- Nature.2008454(7203):523-7.Innateimmunityinducedbycomposition-dependentRIG-I…Saitoetal[PDF]
- Am JPathology.2010177(4):1870-80.RoleofocularcomplementfactorHinamurinemodel…Lyzogubovetal[PDF]
- NatureBiotechnology.201129(4):341-5.DeliveryofsiRNAtothemousebrainby…Alvarez-Ervitietal [PDF]
- CancerResearch.201171(15):5144-53.InhibitionofmiR-193aexpressionby…Iliopoulosetal[PDF]
- RNA.201016(11):2108-19.RNaseLreleasesasmallRNAfromHCVRNAthatrefolds…Malathietal[PDF]
- Diabetologia.201255(7):2069-79.Thep47phox-andNADPHoxidaseorganiser1…Younetal [PDF]
- BritishJournalofCancer.2012 107(3):516-26.TIGARinducesp53-mediatedcell-cycle…Madanetal[PDF]
- Hypertension.201463(2):353-61.Tissuetransglutaminasecontributesto…Liuetal[PDF]
- Circulation Research.201015;107(8).Kruppel-likefactor-4transcriptionallyregulates…Cowanetal[PDF]
- Hypertension.201259(1):158-66.Roleofuncoupledendothelialnitricoxidesynthase…Gaoetal[PDF]
- JounalofBIOLOGicalChemistry.2012287(4):2907.Chaperoningofmutantp53protein…Gognaetal [PDF]
- PLoSPathogens.20128(8)Uridinecompositionofthepoly-U/UCtractofHCVRNA…Schnelletal[PDF]
AsPC-1TransfectionReagent
AltogenBiosystems:
AltogenBiosystemsprovidespreoptimizedtransfectionproductsforlifescienceresearchapplications.Transfectionprotocolsareoptimizedforindividualcancercelllines.AltogenBiosystemsdevelopedtwotypesofinvivodeliverykitsforanimalresearch:Tissue-targetedreagents(deliverytoliver,pancreas,andkidneytissues),andbroadrangeinvivodeliveryreagents(PEG-Liposome,Nanoparticle-based,Lipid-based,andPolymer-basedkits).Advancedformulationofreagentsandoptimizedtransfectionprotocolsprovideefficientintracellulardeliveryofproteins,DNA,RNA,andanyothernegativelychargedmoleculesinvitroandinvivo.Readmore abouttransfectiontechnologyatAltogen’sTransfectionResource.
AltogenLabsResearchServices:
AltogenLabsprovidesGLP-compliantcontractresearchstudiesforpre-clinicalresearch,INDapplications,anddrugdevelopment.BiologyCROservices include:Xenograftmodels(30+),developmentofstablecelllines,ELISAassaydevelopment,cell-basedandtissuetargetedRNAistudies,safetypharm/toxassays,andotherstudies(visitAltogenLabs.com).
VolumeOptions:
- 0.5ml(Catalog#1709)
- 1.5ml(Catalog#1710)
- 1.5mlCRISPR(Catalog#2109)
- 8.0ml(Catalog#7023)
AltogenBiosystems是一家开发和制造用于生命科学研究,药物发现和开发的转染试剂盒的生物技术公司。转染试剂盒针对特定癌细胞系和原代细胞培养进行了优化,可将生物分子有效递送到靶组织中。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现体外(癌细胞系)和体内(动物组织靶向试剂、癌细胞系)递送货物分子,包括质粒DNA,各种类型的RNA(mRNA,siRNA,shRNA,microRNA),蛋白质和小分子研究。
Altogen生命科学公司致力于研发,生产和销售特定细胞系的转染试剂,用于细胞间生物分子的传递,并通过对转染试剂类型的设计将siRNA和质粒DNA有效地转入不同的细胞系和原代细胞内。Altogen公司开发的聚合物,脂质体,纳米粒子为基础的转染技术分别针对分子生物学,组合化学,和细胞生物学而分别应用。Altogen定制服务提供符合GLP要求定制研究服务,包括代稳定的细胞系,细胞银行和冷冻保存,焦磷酸测序,克隆,RNA干扰(RNAi)和基因沉默服务,发展分析,siRNA文库筛选,并转染服务。稳定的肿瘤细胞株和原代细胞的产生,可以是非常昂贵和费时。该公司的细胞培养科学家的细胞株的选择,无论是利息或shRNA表达载体的稳定表达的基因改造。标准的RNAi技术服务,包括设计与合成的siRNA的利益,验证siRNA的沉默效率,siRNA转染条件的优化,使高效的基因沉默细胞系或原代培养细胞的靶基因。转染培养细胞的瞬时或稳定的引入外源性分子和遗传物质(即RNA或DNA),通常是在生物实验室用来研究基因功能,基因表达的调节,生化映射,突变分析,和蛋白质的生产。科学家利用各种载体分子,这种分子,使质粒DNA(PDNA),信使RNA(mRNA),短干扰RNA(siRNA),小分子RNA(miRNA)的,并进入肿瘤细胞株和原代细胞的蛋白质的基因交付。不幸的是,无单提货的方法或转染试剂,可以适用于所有类型的细胞,细胞的细胞毒性和转染效率显着不同,取决于试剂,协议,并正在利用细胞类型。Altogen生物系统公司提供超过60种类型的细胞的预优化转染试剂盒。纳米粒子,脂质和聚合物基ALTOGEN®在体内转染试剂,使交付功能的RNA和DNA分子在体内。PEG脂质体在体内输送系统减少由于PEG修饰的先天免疫反应,并提供高效的siRNA转染的DNA,并在体内的蛋白质。由科学“杂志(2010年12月17日):PEG脂质体在体内转染试剂盒siRNA的特色Altogen生物系统功能的特定细胞系转染试剂盒
120+细胞转染试剂和活体组织靶向试剂盒制造商AltogenBiosystems是一家生物技术公司,开发和制造用于生命科学研究、药物发现和开发的转染试剂盒。Altogen®体内转染试剂可有效地将生物分子导入靶组织。细胞转染试剂盒针对特定的癌细胞系和原代细胞进行了优化。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现货物分子(DNA、RNA、蛋白质)的高效传递。AltogenBiosystems利用高分子化学、分子和细胞生物学的专业知识,开发了新的体内外给药技术。转染是将外源分子导入培养细胞中,常用于研究基因功能、基因表达调控、生化定位和蛋白质生产。不幸的是,由于细胞毒性和转染效率的差异很大,并且取决于所使用的试剂、方案和细胞类型,因此没有一种单一的传递方法或转染试剂可应用于所有类型的细胞。AltogenBiosystems为120多个癌细胞系和原代细胞类型提供优化的转染试剂盒和电穿孔产品。体内转染试剂可实现组织靶向给药。Altogen的转染试剂盒包括用于体外(癌细胞系)和体内(用于动物研究的组织靶向试剂)转染的转染增强剂试剂和转染复合物冷凝器。Altogen实验室提供符合GLP的实验室合同研究服务。我们的生物CRO服务包括异种移植物的疗效、IND应用的pharm/tox研究和安全性测试、分析开发(ELISA、IC-50、qPCR)、90多个异种移植物动物模型、RNAi和基因沉默服务。Altogen的细胞培养科学家通过在28天内培育出稳定的细胞系,将选择的细胞系转化为稳定表达感兴趣的基因。
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最近开始做TUNEL染色,第一次按罗氏protocol做的,阴性对照是没有显色的。没做阳性对照。第二次、第三次做出来背景都很深,肾小管每个细胞核上都染上了棕黄色,DAB染色很快,几秒就变一片黄。具体步骤是:1烤片脱蜡至水2.蛋白酶K20ug/ML37℃10分钟3.tunel液冰上配置后加组织上,37度1h。4.pod液37℃30min5.DAB显色。在蚂蚁淘中检索后,优化了实验条件,在蛋白酶K前加了3%H2O2封闭10min,缩短了tunel液至40min。这是第三次的结果大家帮我看看
这是对照组
这是模型组
Bone Mesenchymal Stem Cells 作为一个细胞群体,还没有发现有特定细胞表面marker. 对于那些可以代表自我更新和分化的marker, 也不清楚到底要发现哪一个的表达才能确定该细胞就是BMSC。
目前常用的方法,就是采用培养,colony-forming unit-fibroblasts (CFU-F)这个方法。一般BMSC可以24-48小时贴壁。
流式细胞计数,比如STRO-1,但是一般认为STRO-1阳性的细胞更趋向于造血干细胞,和BMSC简单区别还不是很清楚。
这里有个培养分化的产品
http://www.rndsystems.com/pdf/SC020.pdf

