주문정보
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| 선택 | Cat.No. | 제품명 | 가격(VAT별도) | 수량 |
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제품특징
*PAGEr Gold Gels은 주문 후 제작되는 제품으로 약 4-5주 정도 소요됨을 안내드립니다.
□ 제품설명
PAGEr Gold Gel은 4% stacking gel을 포함한 Tris-Glycine(Tris-HCl) gel이다. Gel엔 SDS를 첨가하지 않았기 때문에 native gel로 전기영동하거나 샘플이나 running buffer에 SDS를 첨가하여 denaturing 조건으로 전기영동 할 수도 있다. 본 제품 사용시엔 PAGEr Minigel Chamber와 함께 사용하면 편리하다.
□ 특징
- 겔을 제작할 필요가 없이 직접 전기영동 장치에 세팅- 전기 영동 후에 카셋트로부터 겔 분리가 간단- 높은 분리능과 재현성- 인체에 유해성이 있는 acrylamide monomer를 사용하지 않아 안전함- 단일 농도의 겔, gradient 겔도 준비되어 있어 용도에 따라 선택 가능
□ 제품 사양
- 카셋트 사이즈： 10 cm x 10 cm 또는 9 cm x 10 cm- well 수：2D well, 10 well, 12 well, 16 well, 17 well, 8＋1 well
Gel사이즈 | ||
CassetteDimensions | Thickness | Gel Dimensions(LxWxD) |
9 cm x 10 cm L x W | 0.49 cm | 7.1 cm x 8.3 cm x0.1 cm |
10 cm x 10 cm L x W | 0.55 cm | 8.1 cm x 8.3 cm x0.1 cm |
Well LoadingVolumes | ||
Well LoadingVolumes | Number of Wells | Well Volume |
8+1 | ≤30μl | |
10 | ≤32μl | |
12 | ≤20μl | |
16 | ≤14μl | |
17 | ≤14μl | |
2D | ≤550μl | |
□ PAGEr Precast Gel Selection Guide
□ PAGEr Precast Gel Size separation
□ 보존
2℃~8℃
□ 유효기간
제조 후 3개월
ebiomall.com
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需要在片段5‘端和3’端分别设计引物去扩增。
所以，对应的上游5‘端，我们习惯叫做”上游引物“，即forward primer，简称for；
对应序列的3’端，我们叫做下游引物，reverse primer，简称rev。
我们在设计pcr引物的时候，经常需要将设计好的正反向引物与基因组DNA序列进行比对验证，但是因为反向引物是反向互补的，所以有些麻烦。因此，在这里介绍两个非常的小工具，一个是在线的模拟PCR，一个是本地运行的程序包，我会以附件形式上传，不需要蚁豆即可下载。两个都写得非常详细，相信大家都能看懂。不知道这个帖子能不能加分？希望版主看到后给予加分奖励
方法一：UCSC中的In-SilicoPCR
1、登录UCSC，网址链接http://www.genome.ucsc.edu/index.html，点击右侧工具的In-SilicoPCR，或者在Tools下拉框中点击In-SilicoPCR，如下所示：
2、点击In-SilicoPCR后，出现如下界面，我们需要将自己设计好的正向引物和反向引物分别粘贴至各自空白框，点击submit。对其它几个参数做点说明吧，MaxProductSize是指被放大区域的最大长度，MinPerfectMatch是指和引物的3‘末端PerfectMatch的最小碱基数目，MinGoodMatch:是指和引物的3‘末端GoodMatch的最小碱基数目，GoodMatch是3个碱基里最少匹配2个，FlipReversePrimer:反向引物反向互补。
3、我用自己设计的基因举例说明：HNF-1α的EXON2，参考序列：NM_000545，正向引物5’-3‘：CAGCCCTTGCTGAGCAGATCC，反向引物5’-3‘：CCACTGACTTCCTTTCCATCTACC。正向引物和反向引物分别粘贴至各自空白框，点击submit。出现如下结果，其中第一个红色标记指染色体位置，第二个红色标记指长度，第三个红色标记是我们输入的正反向引物，第四个标记可以直接链接至Primer3在线设计引物，网址http://primer3.ut.ee/。比对染色体位置就可以知道我们设计的引物是否包括HNF-1α的EXON2。
方法二：Reverse程序
这个程序是一位程序员朋友专门为我们编写的，操作非常简单，输入反向互补的引物序列后，就可以得到原始碱基序列。文件夹内一共才3个文件。
举例说明，HNF-1α的EXON2，参考序列：NM_000545，正向引物5’-3‘：CAGCCCTTGCTGAGCAGATCC，反向引物5’-3‘：CCACTGACTTCCTTTCCATCTACC。
1、点击target，粘贴反向引物序列。
2、点击右上角关闭键，这时候会弹出对话框，点击保存。
3、打开文件夹中的reverse_complement应用程度，按任意键即可自动关闭。
4、打开文件夹中的result，就可以得到反向互补引物序列对应的原始序列。
5、这时候就可以将正向序列和刚刚得到的原始序列一起代入HNF-1α的EXON2中检验我们设计的引物是否覆盖了目标片段。
好了，就这两个小工具了，非常实用，希望大家有所收获。有什么疑问可以给我留言或者私信我，支持我的战友就请给我投票吧。版主能给予我加分奖励吗？
reverse_complement.rar(95.82k)
非要说差别，可能就在测序引物是让片段线性增加，PCR引物是让片段指数增加。
帮忙设计这段DNA序列的2个引物，forwardprimer还有reverseprimer，要只含有6个bp
麻烦写详细3端和5端，可以的话写下设计方法，感激不尽啊
刚开始学很是困惑，老师也没详细讲。。。
在这里我向大家隆重推荐一个在线的引物设计软件，是斯坦福大学的，我认为是最好的在线引物设计软件，我用它设计接近100多对引物，可以说是屡试不爽。它用起来也很简单，最重要的是效果非常好，考虑的因素也非常的多。
先不说那么多了：网址：http://www.yeastgenome.org/cgi-bin/web-primer
下面我继续图示。
帖子发表之后很多战友PM我，让我帮设计引物，其实这很让我失望的，我的本意是让大家掌握这种方法，而不是告诉大家我是一个专家，其实我水平也有限，所以我不会帮大家设计引物，我认为这是科研工作的一部分、基本功，祝大家好运、实验顺利。
