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Boston Biochem/Recombinant Human His6-PolyUb WT Chains (2-7,K48-linked), CF/UCH-230-100
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Boston Biochem/Recombinant Human His6-PolyUb WT Chains (2-7,K48-linked), CF/UCH-230-100
品牌 / 
Boston Biochem
货号 / 
UCH-230-100
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Recombinant Human His6-PolyUb WT Chains (2-7,K48-linked), CF Summary

Purity
>95%, by SDS-PAGE under reducing conditions and visualized by Colloidal Coomassie® Blue stain
Activity
Ubiquitin chains vary in length, linkage, and function. K48-linked His6-Poly-Ubiquitin Chains (Ub2-7) are ideal for investigating Ubiquitin-binding proteins and as substrates for Ubiquitin-specific isopeptidases. Reaction conditions will need to be optimized for each specific application. IMPORTANT: Heating this product in SDS-PAGE buffer or terminating reactions containing this product with heated SDS-PAGE buffer could lead to unexpected, high apparent molecular weight banding or smearing on gels that is not representative of product purity. For optimal results, we recommend incubation in SDS-PAGE buffer + DTT at <40 °c="" for="" 20="" minutes="" prior="" to="" gel="">
Source
E. coli-derived human Poly-Ubiquitin proteinContains a 6-His tag
Predicted Molecular Mass

19 kDa (Ub2), 29 kDa (Ub3), 38 kDa (Ub4), 48 kDa (Ub5), 58 kDa (Ub6), and 67 kDa (Ub7)

Product Datasheets

Product Datasheet
COA

Carrier Free

What does CF mean?

CF stands for Carrier Free (CF). We typically add Bovine Serum Albumin (BSA) as a carrier protein to our recombinant proteins.Adding a carrier protein enhances protein stability, increases shelf-life, and allows the recombinant protein to be stored at a more dilute concentration.The carrier free version does not contain BSA.

What formulation is right for me?

In general, we advise purchasing the recombinant protein with BSA for use in cell or tissue culture, or as an ELISA standard.In contrast, the carrier free protein is recommended for applications, in which the presence of BSA could interfere.

UCH-230

FormulationLyophilized from a solution in deionized water.
ReconstitutionReconstitute atup to 5mg/mL in an aqueous solution.
ShippingThe product is shipped at ambient temperature. Upon receipt, store it immediately at the temperature recommended below.
Stability & Storage:Use a manual defrost freezer and avoid repeated freeze-thaw cycles.
  • 12 months from date of receipt, -20 to -70 °C as supplied.
  • 3 months, -20 to -70 °C under sterile conditions after reconstitution.
Reconstitution Calculator

Reconstitution Calculator

The reconstitution calculator allows you to quickly calculate the volume of a reagent to reconstitute your vial. Simply enter the mass of reagent and the target concentration and the calculator will determine the rest.

=
÷

Background: Poly-Ubiquitin

Poly-Ubiquitin chains are composed of Ubiquitin monomers that are covalently linked through isopeptide bonds, which typically form between a lysine residue of one Ubiquitin molecule and the C-terminal glycine residue of another Ubiquitin molecule (1). Each human Ubiquitin monomer is 76 amino acids (aa) in length and shares 96% and 100% aa identity with yeast and mouse Ubiquitin, respectively (2). Seven of the 76 aa in Ubiquitin are lysine residues that can participate in poly-Ubiquitin chain formation. Linkage through specific lysine residues is thought to serve as a signal that affects protein degradation, signaling, trafficking, and other cellular processes (3-8).

Linkage specific poly-Ubiquitin chains are used to investigate mechanisms of chain recognition, binding and hydrolysis by the proteasome, deubiquitinating enzymes, E3 ligases or other proteins that contain ubiquitin-associated domains (UBAs) or ubiquitin-interacting motifs (UIMs). Lys48-linked chains are abundant in vivo and act as a universal signal for proteasomal degradation. This product is formed with His6-tagged wild-type human recombinant Ubiquitin and linkage-specific enzymes. This mixture of poly-Ubiquitin chains contains di-Ubiquitin and higher MW species; mono-Ubiquitin has been removed. The His6-tag is convenient for metal chelate affinity purification and immuno-detection using His6-specific antibodies.

References
  1. Scheffner, M. et al. (1995) Nature 373:81.
  2. Sharp, P.M. & W.-H. Li (1987) Trends Ecol. Evol. 2:328.
  3. Behrends, C. & J.W. Harper (2011) Nat. Struct. Mol. Biol. 18:520.
  4. Greene, W. et al. (2012) PLoS Pathog. 8:e1002703.
  5. Henry, A.G. et al. (2012) Dev. Cell 23:519.
  6. Tong, X. et al. (2012) J. Biol. Chem. 287:25280.
  7. Wei, W. et al. (2004) Nature 428:194.
  8. Zhang, J. et al. (2012) J. Biol. Chem. 287:28646.
Alternate Names
CEP80; HEL112; PolyUbiquitin; Poly-Ubiquitin; ribosomal protein S27a; RPS27A; S27A; UBA80; UBC; UBCEP1; UBCEP80

FAQs

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Reconstitution Buffers

Reconstitution Buffer 1 (PBS)

RB01
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参考文献: 凯氏法原理:样品在浓硫酸和催化剂硫酸铜、硫酸钾高温硝化反应,把有机的氮结构转化成无机的硫酸氮形式的氮,(为了使得样品消化时不产生挂壁,必须采用样品孔间温差小和带程序升温功能的消化炉,否则会产生挂壁现象,导致消化失败)消化完成后,需要将样品冷却到40℃左右,再把消化管放入定氮仪上。仪器对消化管内自动添加稀释液、碱,反应杯内自动添加硼酸和显色剂。对消化管内样品加热蒸馏,产生氨气和水蒸气结合形成氨水,氨水通过冷凝管冷却流到反应杯 查看更多>
Steve HahnLast Modified December 1997This method works well when transforming with a plasmid and is rapid. (for highest efficiency transformation, see DMSO tra 查看更多>
标准品,对照品,生物试剂,科研抗体,细胞株等,生物耗材等,还代理了sigma,R&D,ScienCell,ATCC,wak0,omega,Worthington、MBI、Bioworld、Calendon等国外各类知名公司的... 查看更多>
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Double dye filling (using DiO and di-4 ANEPPS)(Krista Williams) Dye Filling Label 15 ml centrifuge (c/f) tubes with strain name. Squirt ~1-2 ml M9 onto plate w 查看更多>
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用不同荧光染料标记的抗体,分别与小鼠细胞和人细胞的细胞膜上的一种抗原结合,两类细胞则分别产生绿色荧光和红色荧光.将两类细胞融合成一个细胞时,其一半呈绿色,一半呈红色.在37℃下保温40min后,细胞上两种荧光点呈均匀分布(如图所示),试问:(1)人...
请教一下大家,这些生化厂商,他们的生化检测项目,各项目分别溯源到什么标准品或者什么参考方法?写一份资料急用,请大家赐教,谢谢。可以贴上来,提供可靠的出处链接更佳。以前出去开会到处都是这些宣传资料,拿了......

1.取10mg荧光微球液体置于合适大小的离心管中,加入4mlMES缓冲液,混匀,离心(12000r/min),倾倒上清。

2.加入1mlMES缓冲液,超声重悬。

3.在装有1.5mgEDC和3mgNHS的离心管中分别加入300μl和600μlMES缓冲液,都配制成浓度5mg/ml,混匀。

4.加入配置好的NHS溶液0.2ml,EDC溶液0.1ml,混匀。

5.离心(12000r/min),得不到稳定沉淀。

想请教各位高手,为什么我加EDC和NHS活化之后离心得不到沉淀,所用荧光微球粒径196nm



经常对对照品与标准品的概念不清楚,有何区别,查了一下,得到如下结果:
对照品系指用于鉴别、检查、含量测定和校正检定仪器性能的标准物质,而标准品系指用于生物检定、抗生素或生物药品中含量或效价测定的标准物质,以效价单位(U)表示。
还是感觉不甚明了,是否标准品只用于生物方面?是否化学方面只能称对照品?标准品有什么要求?对照品有什么要求?

From:http://www.cdda.gov.cn/index/zcfg_detail.asp?ID=62a
国家药品标准品、对照品系指国家药品标准中用于鉴别、检查、含量测定、杂质和有关物质检查等标准物质,它是国家药品标准不可分割的组成部分。国家药品标准物质是国家药品标准的物质基础,它是用来检查药品质量的一种特殊的专用量具;是测量药品质量的基准;也是做为校正测试仪器与方法的物质标准;在药品检验中,它是确定药品真伪优劣的对照,是控制药品质量必不可少的工具。
目前,中国药品生物制品检定所已能提供各类国家标准物质1242种,其中中药化学对照品288种,对照药材400种,两者占总数的一半以上,

from:http://www.chp.org.cn/2005gs/swfl/swfl.htm
国家标准品及生物参考品系指用于鉴别、检查含量或效价测定的标准物质,其制备与标定应符合“生物制品国家标准物质制备和标定规程”要求,并由国务院药品监督管理部门指定的机构分发。企业工作标准品或参考品必须经国家标准品或参考品标化后方能使用。
对照品系指用于生物制品理化等方面测定的特定物质,由生产单位采用与制品生产工艺相同的方法制备。对照品应尽可能与制品原液配方一致,稳定性较差的,可加不含对测定有干扰物质的适宜的稳定剂。对照品由国家药品检定机构审查认可,其标准应不低于制品的质量标准。

From:http://www.pharm.sdu.edu.cn/peiyang/jiaoan/yaowufenxihx.doc
(3)标准品、对照品:是指用于鉴别、检查、含量测定的标准物质,均由国务院药品监督管理部门指定的单位制备、标定和供应。标准品系指用于生物测定、抗生素或生化药品中含量或效价测定的标准物质,一国际标准品进行标定;对照品出另有规定外,按干燥进行计算后使用。
标准品和对照品均附有使用说明书,质量要求,有效期和装量等。

From:http://www.chp.org.cn/2005gs/swfl/swbz.htm
1定义
生物制品标准物质系指用于生物制品效价、活性或含量测定的或其特性鉴别、检查的生物标准品或生物参考物质。
2标准物质的种类
生物制品标准物质分为二类。
国家生物标准品系指用国际标准品标定的,或我国自行研制的(尚无国际生物标准品者)用于定量测定某一制品效价或毒性的标准物质,其生物活性以国际单位(IU)或以单位(U)表示。
国家生物参考品系指用国际参考品标定的,或我国自行研制的(尚无国际参考品者)用于微生物(或其产物)的定性鉴定或疾病诊断的生物试剂、生物材料或特异性抗血清;或指用于定量检测某些制品的生物效价的参考物质,如用于麻疹活疫苗滴度或类毒素絮状单位测定的参考品,其效价以特定活性单位表示,不以(IU)表示。

From:http://www.proteomics.com.cn/msl/papers/Notice1.html
1 对照品与标准品概念不清
对照品与标准品是2个不同的概念,中国药典凡例中已有明确的定义:对照品系指用于鉴别、检查、含量测定和校正检定仪器性能的标准物质,而标准品系指用于生物检定、抗生素或生物药品中含量或效价测定的标准物质,以效价单位(U)表示。文献中常将2种概念混淆,认为对照品就是标准品,是1种物质2种提法而已[1,2],造成错误的原因,可能是有的药品既有对照品,又有标准品。例如,当用微生物法测定头孢克罗效价时,用头孢克罗标准品,用HPLC或UV法测定时,则用对照品;非那西丁当用作熔点校准物质时,用熔点标准品,测定含量时,用对照品。即使是同一种物质的标准品和对照品,它们的规格、标定方法以及用途都可能是不同的。
2 对照品或标准品混用
对照品或标准品混用,即将对照品或标准品用于不是其标定方法的含量测定,是药品检验中经常出现但未引起重视的一个问题[3]。尽管同一批对照品不同标定方法的含量有很好的相关性,但并不完全相同,有时差别会很大。如英国Glaxo公司提供的头孢呋肟酯对照品,HPLC标定为96.9%,供含量测定用;UV为98.8%,供溶出度测定。虽然中国药典凡例明确规定卫生部所发对照品仅用于正文中所规定的分析方法。但由于:(1)卫生部提供的对照品使用说明书不够详尽,大多无对照品质量要求及标定方法;(2)对对照品或标准品的正确使用缺乏认识;(3)日常科研中极难找到相应的对照品;(4)中国药典正文中也常存在对照品混用的问题,如常将含量测定用的标准品或对照品用于溶出度检查,而含量测定方法与溶出度分析方法又不同,故极易引起混用。
1、不同物品要求含荧光剂量是不一样的。2、“荧光剂作为一种添加剂或者染料等,在具体的使用上有法律规定,不同的用途和产品,规定肯定不一样。”

一、荧光剂又名荧光增白剂,是一种荧光染料,或称为白色染料,也是一种复杂的有机化合物。它的特性是能吸收入射光线产生荧光,使所染物质获得类似荧石的闪闪发光的效应,使肉眼看到的物质很白,达到增白的效果。二、用途介绍1、荧光增白剂BC性能及用途 外观为淡黄色粉末。色光以与标准近似,溶于水呈蓝色荧光,不溶于水杂质含量0.5%,强度为标准品的1005,细度(通过100目筛残余物含量)5%,泛黄点5%,水分含量5%。本品主要用于棉纤维、人造丝、人造棉和纸浆等中性染浴增白处理。2、荧光增白剂JD-3 性能及用途 外观为淡黄色粉末,能溶于热水。本品在中性或微碱性条件下,用于合成洗涤剂、肥皂、造纸和纺织品的增白。3、荧光增白剂挺进31#性能及用途 外观为淡黄色粉末,具有一般二苯乙烯三嗪型增白剂性能。荧光色调为青光,呈阴离子型。可溶于100℃或1000倍25℃水中。水分含量5%,不溶于水的杂质含量0.5%。本品主要用于合成洗涤剂、肥皂、香皂、纸张的增白,也用于棉织物、锦纶、人造丝等的增白,可使被增白物增白发亮。4、荧光增白剂BR(增白剂BL)成 分 DSD酸钠盐与异氰酸苯酯的缩合物性能及用途 外观为淡黄色粉末,属阴离子型,微带红紫色。2%水溶液澄清,95%以上通过60目筛。5、荧光增白剂EBF成 分 邻氨基苯酚与2,5-二羧酸噻吩的缩合物性能及用途 外观为细微黄白色悬浮液。有鲜艳的蓝色荧光。含有效荧光物质10%,属非离子型,呈中性,可与水以任何比例稀释分散。耐硬水、耐酸、耐碱、耐晒,氧化漂白稳定。增白强度与标准品相似,能与大多数施用于白色织物的整理剂和染色载体共用。酸碱度为10g/L,分散液pH6。本品主要用于涤纶、锦纶和醋纤的增白,也可用于合纤与棉、毛混纺织物的增白。6、荧光增白剂R成 分 DSD酸钠盐与异氰酸苯酯的缩俣物性能及用途 外观为白色至淡黄色粉末。阴离子型。95%以上通过60目筛。0.2%水溶液澄清。本品主要用于纤维、纸张、白地印染增白和浅色纤维增艳。7、 荧光增白剂AD(荧光增白剂CA)成 分 对氯代--吗啉基丙酰苯盐酸盐与对甲磺酰苯肼盐酸盐的缩合性能及用途 外观为带绿光的淡黄色细针状结晶。本品主要用作合成纤维的增白剂。8、荧光增白剂ER(增白剂PS-1)性能及用途 强度为标准品的1003,色光与标准品近似,非离子型,在水中均匀分散。本品用于涤纶、涤/棉混纺织物的增白。用其处理的织物白度高、色光纯。具有优异的耐洗、耐晒和耐升华牢度。二、实验证明(1)对皮肤无刺激经过多年的动物及人体试验表明:即使是皮肤直接接触荧光增白剂CBS纯品,对皮肤也无刺激性,不会导致皮肤过敏。沈永嘉教授等编写的《荧光增白剂》一书中指出:荧光增白剂不会被皮肤吸收。即使荧光增白剂CBS在使用过程中可能有少量粘附在皮肤上,也不会和人体皮肤发生反应,而且通过日常的洗涤活动(例如洗手、洗澡等)很容易被完全的洗掉,不会经皮吸收[1] 。因此,皮肤直接与添加CBS的洗衣液接触不会造成伤害。(2)对伤口愈合无不良影响发表于1994年《德国皮肤病学》杂志上的《荧光增白剂的毒理学性质》一文中指出,即使是用含有荧光增白剂的纺织材料直接接触伤口,也不会对伤口愈合产生不良影响,且不会对人体皮肤造成病理性变化。(3)代谢:荧光增白剂CBS是水溶性的,通过正常代谢可很快完全排出体外德国Georg Thieme出版社出版的《环境质量和安全》增补第四卷《荧光增白剂》(`Environmental Quality and Safety` Supplement Volume IV `Fluorescent Whitening Agents`)一书中指出,通过小鼠代谢研究表明,在大剂量喂食洗涤剂用荧光增白剂CBS后,绝大部分增白剂都会迅速通过肠道排出,不被肠道吸收。其血、肝、肾、脑、肌肉和脂肪中均无荧光增白剂残留,即不会造成体内蓄积。所以日常生活中即使有少量荧光增白剂CBS进入人体,也会通过正常代谢过程很快排出体外。(4)荧光增白剂CBS无致畸性,无致癌性通过对多种动物的急性毒性研究和长达两年的小鼠慢性毒理实验研究证明:CBS属于无毒性物质,无致畸、无致癌、无致突变性。三、结论总之,在正常使用剂量下,含有荧光剂都是安全的。参考资料荧光剂:https://baike.baidu.com/item/%E8%8D%A7%E5%85%89%E5%89%82/6185591?fr=aladdin#2
这个么…染色一般用新亚甲蓝枸橼酸钠,全血涂片可用瑞氏染液或新亚甲枸橼酸钠,
各位好!
附件中是我的标准曲线结果,标准品按照10x稀释,荧光染料是SYBR,可是在荧光强度与CT值的关系图中,曲线间的行距还可以接受,但是在LOG荧光值与CT值的关系曲线中,曲线怎么那么难看呢?为什么他们之间的行距不是相等的呢?我以前做的曲线很漂亮的,这是什么原因呢?影响定量的结果吗?并且在样品中也出现这么难看的曲线,就是指数增长期曲线不平滑,是什么原因呢?

切盼高手指点!!!

standardcurve.doc(49.0k)
生化分析仪50问 123
hunterddh2015-08-24
进站很久了,每天都回来转转,却很少发帖,今天就说说我上班来碰到的问题吧,前辈们多多指导。我实习的时候在上海,实习医院不论是设备还有管理都比较规范,在那里也学到不少知识,在那里呆了一年时间也形成很多......
大家好,我有个问题,非常迷惑,而且一直没得到确定答案。那就是我们试剂盒内配的标准品,分装后的保存条件,以及确切的保存时间有多长。我就发现一个问题,由于我们用的是半自动生化,每次定标后,用了几天后,质控......
标准品主要用于比色分析吗?标准品溶解了待测物质的纯水?校准品是个纠正值,什么时候要校准?质控品是已知浓度的标本。好乱,求老师理顺一下。
最近有两位战友发信询问我的荧光微球吞噬实验的Protocol。

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LatexBeadsPhagocytosisassay

---Materials

*Fluorescencelabeledlatexbeads(1umdiameter),2.5%aqueoussUSPension
*3%BSAcontaining25mMNa2HPO4,pH6.0
*0,3%(w/v)azide
*Culturemediumcontaining5%FBS
*Distilledwater,PBS
*Bathsonication,6(12)-wellplates

---Cellcultureandtreatment

1,Inoculateplateswith7,0104cells/cm2perwell.Incubateat37℃,5%CO2for24hr,bestuntil50-70%confluenceisreached

2,Removeculturemediumandexposethecellstotestmaterial.Incubateat37℃,5%CO2for24hr.

---Preparationofcoatedlatexbeads

1,Washlatexbeadswithdistilledwaterandpelletat10,000gfor8minatRT.

2,Resuspendlatexbeadsin3%BSAcontaining25mMNa3PO4(pH6.0)andincubateatRTfor15minwithbathsonication.
*CoatingbeadsinBSAinsuresbeadsremaininamonodispersestate.

3,Washthebeadsoncewithculturemediumcontaining5%FBS.

4,Resuspendthebeadsinculturemediumatconcentration2.0%.Thisisbeadsstock.Storedindarknessat4℃.

---Assay

1,Controlsandsamples:Intactcontrol(Nostaining)1well
-Negativecontrol(azidetreated)1well
-Normalcontrol1well
-sample5wells

*Inordertodifferentiatebetweenphagocytosedbeadsandbeadsnonspecificallyadheretothecellsurface,controlcellsareexposedto0,3%(w/v)azidefor10minpriortotheadditionofcoatedbeads.Thistreatmentcompromisesmicroglialenergeticprocessesandfewbeadswereinternalizedasobservedbyfluorescentmicroscopy.Meanfluorescenceofazide-treatedmicrogliawasusedasthenegativecontrolandwassubtractedfromvaluesobtainedinexperimentalsamples.

2,Forexperimentsusing6well-plates,15μlbeadsstockin1mlculturemediumisappliedtoeachwell.Votexthebeadsstockwellandtakeout105μlandaddinto7mlculturemedium.Bathsonificatefor10minatRTindarkness.Thisisbeadsworkingsolution.

Forexperimentsusing12well-plates,6μlbeadsstockin0.4mlculturemediumisappliedtoeachwell.

3,WasheachwelltwicewithPBSandreplacewithbeadsworkingsolution,1ml/wellfor6-wellplate,0.4ml/wellfor12well-plate.Incubateinthedarkat37℃for80-120min.

4,Removebeadsworkingsolutionandwash3timeswithPBStoremoveexcessbeads.

5,LiftthecellsbyscrappingortrypsinizationandwashthecellswishPBS.

6,StainwithPI(4ug/mlfinalconcentration)andrunforFACS.
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