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RayBiotech/Human p53 Transcription Factor Activity Assay/1 Plate Kit/TFEH-p53-1
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Antigen Information
Accession Number:
- P04637
Gene ID:
- 7157
Gene Symbols:
- P53
- TP53
Protein Name & Synonyms:
Cellular tumor antigen p53 (Antigen NY-CO-13) (Phosphoprotein p53) (Tumor suppressor p53)
Target Species:
- Human
Assay Format
Pathway:
- Akt Signaling
- AMPK Signaling
- HER/ErbB Signaling
- HIF-1 alpha Signaling
- MAPK Signaling
- mTOR Signaling
- p53 Signaling
- PI3K-AKT Signaling
Specificity:
The olionucleotide/antibody pair provided in this kit recognizes human p53 in whole lysates and nuclear extracts.
Number of Targets Detected:
1
Species Detected:
- Human
Compatible Sample Types:
- Cell Lysates
- Nuclear Extracts
Design Principle:
- Sandwich-based
Method of Detection:
Colorimetric
Quantitative/Semi-Quantitative:
- Semi-Quantitative
Solid Support:
96-well Microplate
Product Specifications
Size:
1, 2, or 5 x 96-Well Strip Microplate Kit
Introduction
p53 is a master regulating transcription factor of cell fate that activates genes responsible for a cell-cycle checkpoint or apoptosis after exposure to ionizing radiation, UV light, or other DNA-damaging agents. To date over 125 protein-coding genes and noncoding RNAs have been shown to be a direct transcriptional target of p53. The p53 protein has features commonly associated with transcriptional regulators including an amino-terminal transactivation domain consisting of two transactivation subdomain TAD-I and TAD-II, a proline-rich region, a conserved core DNA-binding domain (DBD), a linker region, a tetramerization domain, and an unstructured basic domain in the carboxy-terminus. In normal cells where p53 is found at very low levels, p53 is present in a complex with MDM2, an E3 ubiquitin ligase, which targets p53 for degradation through the ubiquitin pathway. In response to stimuli, this inhibition is relieved and p53 is activated through a number of mechanisms which include phosphorylation, dephosphorylation by protein serine/threonine phoshatase-1, acetylation by the transcriptional coactivator p300/CBP, and induced conformational changes mediated by the prolyl isomerase Pin1. An increase in active p53 protein levels leads to multiple outcomes such as cell cycle arrest, apoptosis, senescence, autophagy, and others. Contrarily, the loss or inactivation of p53 due to damage or mutation, results in the loss of cell-cycle arrest or apoptosis after DNA damage or physiologic stresses. This loss, seen in many human cancers, is expected to lead to increased genetic instability, increased accumulation of mutations, and ultimately oncogenesis.
Product Features
- Specific transcription factor-DNA binding assay
- Perfect alternative to EMSA
- Easy to perform in an ELISA format
- Non-radioactive assay
- High throughput (96-well plate format)
- Assay can be completed within 5 hours
Application Notes
Kit Components
- 96-well Strip Microplate pre-coated with DNA probes
- DNA Binding Buffer
- Positive Control Sample
- Specific Competitor DNA probe
- Non-specific Competitor DNA probe
- Assay Reagent
- DTT
- Wash Buffer
- Primary Antibody
- HRP-conjugated Secondary Antibody
- Antibody Diluent Buffer
- TMB One-Step Substrate Reagent
- Stop Solution
Other Materials Required
- Distilled or deionized water
- 100 ml and 1 liter graduated cylinders
- Tubes to prepare sample dilutions
- Absorbent paper
- Precision pipettes to deliver 2 µl to 1 ml volumes
- Adjustable 1-25 ml pipettes for reagent preparation
- Microplate reader capable of measuring absorbance at 450 nm
Protocol Outline
- Prepare all reagents and samples as instructed in the manual.
- Add 100 µl of sample or positive control to each well.
- Incubate 2 h at RT or O/N at 4 °C.
- Add 100 µl of prepared primary antibody to each well.
- Incubate 1 h at RT.
- Add 100 µl of prepared HRP-secondary antibody to each well.
- Incubate 1 h at RT.
- Add 100 µl of TMB One-Step Substrate Reagent to each well.
- Incubate 30 min at RT.
- Add 50 µl of Stop Solution to each well.
- Read at 450 nm immediately.
Typical Data
Figure 1Transcription factor assay of p53 from nuclear extracts of HeLa cells or HeLa cells treated with NiCl2. After stimulation activated p53 binds with its corresponding DNA. A. Western-blot result of p53 from cytoplasm and nuclear fractions. B. Transcription factor assay of p53 from nuclear fractions with RayBio® p53 TF-Activity Assay Kit .
Figure 2Transcription factor assay of p53 from nuclear extracts of HeLa cells or HeLa cells treated with NiCl2 with the specific competitor or non-specific competitor. The result shows specific binding of p53 to the p53 DNA binding site.
Storage/Stability
Upon receipt, the positive control should be removed and stored at -20° or -80°C. The remainder of the kit can be stored for up to 6 months at 2-8°C from the date of shipment. Opened Microplate Wells or reagents may be stored for up to 1 month at 2° to 8°C. Return unused wells to the pouch containing desiccant pack, reseal along entire edge. Note: The kit can be used within one year if the whole kit is stored at -20°C upon receipt. Avoid repeated freeze-thaw cycles.
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蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
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运输到中国口岸，最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
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2021-08-15
METHOD 1:Formaldehyde preservative – 2% formaldehyde solution in protein-free phosphate-buffered saline (PBS).Prepare as follows:Add 2 g paraformaldehyde powde 查看更多
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2021-09-05
1. Obtain the last 2mm of tail and place directly into 200ul 1X PCR Bufferwith Nonionic Detergents (PBND) in a 1.5ml microfuge tube. (Tails can bestored at fro 查看更多
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Dye Filling to Stain Amphid and Phasmid Neurons by Michael Koelle, from Beth Sawin 4/6/94 1. Buy DiO from Molecular Probes, catalog # D-275. DiO fluorescesces 查看更多
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2021-09-09
Exalpha Biologicals produces and sells products for Life Science Research, including monoclonal and polyclonal antibodies, for use in immunohistochemistry, wes 查看更多
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2021-09-02
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2021-09-15
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LacZ-cell Staining Materials: 1) 0.5% glutaraldehyde in PBS 2) 20mM K4Fe(CN)6o3H2O 0.44g into 50 ml PBS 3) 20mM K3Fe(CN)6 0.33g into 50 ml PBS 4) X-gal 2% in D 查看更多
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2021-08-31
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2021-08-12
1. 注意事项：1.1. 欲冷冻保存之细胞应在生长良好(log phase) 且存活率高之状态，约为80 – 90 ％致密度。1.2. 冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质，例如hybridoma 应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。不宜将冻存细胞放置在0℃～-60℃这一温度范围内过久，低温损伤主要发生在这一温 查看更多
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2021-08-25
Double dye filling (using DiO and di-4 ANEPPS)(Krista Williams) Dye Filling Label 15 ml centrifuge (c/f) tubes with strain name. Squirt ~1-2 ml M9 onto plate w 查看更多
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Vital Staining of Chromosomes with Hoechst 332581. Hoechst 33258, 10 mg/ml stock in DMSO. 2. Culture medium. 3. 15 ml sterile conical tube. 1. In a 15 ml conic 查看更多
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2021-08-30
Steve HahnLast Modified December 1997This method works well when transforming with a plasmid and is rapid. (for highest efficiency transformation, see DMSO tra 查看更多
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商品咨询
手把手教你荧光定量PCR(一)123
xuef_qi2021-08-07
我是定量PCR的新手，有很多问题要请教大家。
我做的病毒的普通PCR结果还可以。我现在要做该病毒的定量。用的是ICycler定量PCR仪器。有那位高手能告诉我怎样操作该仪器。
我还要重新设计目的基因片段的因物吗？如果不用重新设计，那我下一步应该为做定量PCR做哪些准备呐？还需要设计参照模板吗？
这种实验的把握性有多大？
大家有什么更好的建议吗？
我做的病毒的普通PCR结果还可以。我现在要做该病毒的定量。用的是ICycler定量PCR仪器。有那位高手能告诉我怎样操作该仪器。
我还要重新设计目的基因片段的因物吗？如果不用重新设计，那我下一步应该为做定量PCR做哪些准备呐？还需要设计参照模板吗？
这种实验的把握性有多大？
大家有什么更好的建议吗？
【求助】real time PCR 标准曲线结果分析 PCR技术讨论版...123
preciousun2021-07-20
常用荧光染料及应用领域 123
zishuyu2018-01-17
还可以标记细胞内的某些蛋白吧
【求助】甲基化荧光定量pcr PCR技术讨论版123
莫莫惜2021-08-13
【doc】流式细胞术在精子（精液）检查中的应用123
ww7012212021-08-18
因外用杀精避孕药机理研究的需要，求助目前较新的有关精子流式细胞检测的实验资料，请各位大侠不吝赐教！
凝胶层析法分离蛋白质 实验方法123
2018-01-17
带荧光的染料含不含重金属
荧光染料与多少dna结合肉眼可见颜色变化123
伤逝_JaynE羣2018-01-17
碘化丙啶(propiolium iodide，PI)能嵌入DNA双螺旋中，可使荧光强度增加约20倍，以488nm波长激发，DNA/PI复合物最大的发射波长约为615nm。小鼠Lewis肺癌细胞DNA含量测定方法(1).从C57BL/6小鼠上切除肿块，在培养皿内用PBS冲洗。(2).去除结缔组织及，剪碎肿块。(3).小碎片移入1.20×38mm针,加压使其通过,于4℃条件下重悬细胞于HBSS中。(4).将200～300μL细胞悬液(5×105细胞/mL)中加入3mL PI(50μg/mL)，染色3LL细胞，于4℃存放20～30分钟。(5).测定580～750nm之间的发射荧光，以去除末结合PI产生的激发光与发射光谱线之间的重叠部分。注：PI染色液：0.1%柠檬酸钠1000mL+PI 5mg + 1% Nonide P40水。2. 培养细胞DNA的流式细胞仪分析(1).从培养皿中吸去培养基，以HBSS冲洗二次。(2).加入PI5mL于培养皿中，在4℃放10分钟。(3).用吸管反复次打细胞，使细胞破坏，胞核释放出来，再行流式细胞仪分析。3. 完整细胞DNA的PI染色(1).70%乙醇固定的细胞悬液，离心，去固定液。(2).室温条件下加入PI染色一批细胞（105～106细胞/mL），时间为30分钟，然后行流式细胞仪分析。（二）吖啶橙染色1. DNA和RNA的鉴别染色利用吖啶橙的变色特性可鉴别DNA和RNA。吖啶橙作为一种荧光染料已被用于染色固定，非固定细胞核酸，或作溶酶体的一种标记。观察死亡细胞荧光变色性变化以及区别分裂细胞和静止细胞群体。虽然测定DNA和RNA含量时较难获得好的重复性结果，但该方法已被许多实验室广泛采用。方法如下：1）试剂：（1）溶液A：低温保存，稳定期约2周。Triton X-100(0.1%) 0.1mL，1mol/L HCL 8mL1mol/L NaCL 15ml蒸馏水76mL，P
【求助】紧急求助。关于TD20/20光度计标准曲线的制作 制剂技术...123
winne_jin2021-07-24
如何去除荧光定量pcr 中的背景值123
vhgp5032018-01-17
背景校正程序测量定量PCR仪所使用的反应管和水的空白荧光强度。在运行校正程序期间，定量PCR仪在10分钟内连续读取背景校正板的荧光强度，信号收集的温度为60°C。随后，SDS软件计算所收集到的荧光强度的平均值，提取结果并保存到校正文件中。软件在今后的分析中将自动调用此校正文件，从实验数据中扣除背景信号。
什么是纯荧光校正，多长时间校正一次：
纯荧光校正是测定各种纯荧光染料标准品的波长和信号强度，通俗地说是让仪器“认识”各种荧光染料。软件收集并储存各种纯荧光染料标准品的荧光信息。以后每次定量实验运行过程中，SDS软件收集样品的原始光谱信号，并将此原始光谱与纯荧光文件中的数据进行比较，精确扣除不同染料的信号重叠部分，从而确定样品中的荧光染料种类和信号强度。
推荐每半年进行一次纯荧光校正。在运行光谱校正之前，请先进行背景校正和ROI校正。
什么是纯荧光校正，多长时间校正一次：
纯荧光校正是测定各种纯荧光染料标准品的波长和信号强度，通俗地说是让仪器“认识”各种荧光染料。软件收集并储存各种纯荧光染料标准品的荧光信息。以后每次定量实验运行过程中，SDS软件收集样品的原始光谱信号，并将此原始光谱与纯荧光文件中的数据进行比较，精确扣除不同染料的信号重叠部分，从而确定样品中的荧光染料种类和信号强度。
推荐每半年进行一次纯荧光校正。在运行光谱校正之前，请先进行背景校正和ROI校正。
荧光染料按照化学架构分属于什么染料123
jffrain742021-08-14
荧光染料按照化学架构分属于什么染料
这些染料的结构式基本是保密的。有些地方能查到,象维基上就有SYBR Green的结果式,但谁也不能肯定是否是正确的。
这些染料的结构式基本是保密的。有些地方能查到,象维基上就有SYBR Green的结果式,但谁也不能肯定是否是正确的。
大豆抗营养因子定量检测试剂盒 农林牧渔123
田鼠20102021-08-15
这个么…染色一般用新亚甲蓝枸橼酸钠，全血涂片可用瑞氏染液或新亚甲枸橼酸钠，
紧急！关于realtimePCR条件如何摸索的问题？？_问答详情_蚂蚁淘,...123
2021-08-20
最近在看文献时，看到realtime－PCR做相对定量的时候，要求目标序列和内参序列的扩增效率必须相等。我现在要做一些基因的相对定量，所以有几个问题想问问主任和各位高手。
1.怎么看两个反应－即目标基因和内参基因是否具有相同的扩增效率？
2.每次PCR反应的扩增情况都有差异，多次反应的扩增效率岂不是都不一样了吗？
3.如何设计才能让相对定量更可行？
由于对定量PCR的接触不多，希望各位高手多多帮助！谢谢！
1.怎么看两个反应－即目标基因和内参基因是否具有相同的扩增效率？
2.每次PCR反应的扩增情况都有差异，多次反应的扩增效率岂不是都不一样了吗？
3.如何设计才能让相对定量更可行？
由于对定量PCR的接触不多，希望各位高手多多帮助！谢谢！
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