【求助】梯度PCR有条带，恒温扩增无条带

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2010-09-09

问题描述：

扩增一个鸭的基因，PCR仪是Bio-Rad的mycycler系列，通过升级后可以做梯度（8个温度梯度）PCR。
近期老是出问题，梯度（47~53℃）扩增时共6个温度有较明亮的条带，确定恒温再次扩增，却无任何产物。
请教大家了，着急的很！

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yuyanjun1975

用户

myclcer机器在美国是学生机，稳定性不好，建议换机器。杯具

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count2

用户

要考虑一下在TD的时候能遇到那几个温度比如你是每个循环降一度那第二个循环的时候理论上是52度但是PCR仪的实际温度不一定是52度。而且可能跟你设计恒温的52度也会稍有差异建议你可以把温度在细分一下，然后多扩增几个循环有时候可能是丰度低的问题可以增加到40个循环另外可以尝试一下把变性的94°延长为45秒，虽然这个在理论上似乎没太大意义~但是我个人觉得还是很好用的~

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