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cDNA末端的快速扩增(RACE)

来自 : mayitao

在通过杂交、CDNA文库构建等方法筛选到一段非全长的cDNA序列后，我们可以通过RACE(RapidAmplificationofcDNAEnds)实验进一步扩增此cDNA的5’末端或3’末端，从而得到全长的cDNA。
RACE实验是获取目的基因未知序列的一种经济、有效、有针对性的方法。研究人员可通过获得的RACE序列信息进一步分析研究研究目的基因序列情况，也可继续进行后续实验操作，例如以总RNA为模板RT-PCR扩增目的基因、基因突变及修复、基因亚克隆至表达载体直至蛋白表达等。

服务内容

◇TotalRNA提取：不同实验材料，选择不同的试剂进行RNA提取

例如，使用RNAisoPlus(CodeNo.:9108)、TaKaRaMiniBESTUniversalRNAExtractionKit(CodeNo.:9767)等试剂。并对提取的TotalRNA进一步精制处理、质量验证，以确保实验结果的可靠性。

◇已知序列验证

根据客户提供的已知序列设计引物，RT-PCR扩增目的序列，以验证已知序列在样品中的存在情况。

◇3’RACE实验：根据目的基因情况，选择合适方法进行3’RACE。

例如，使用3’-FullRACECoreSetwithPrimeScript™RTase(CodeNo.:6106)，该试剂盒中独特设计的Adaptor和NestedPCR提高了PCR的特异性和灵敏度，从而轻松获得cDNA3’端的序列。

◇5’RACE实验：根据目的基因情况，选择合适方法进行5’RACE。

例如，使用5’RACEKitwithTAP(CodeNo.:6107)，该试剂盒中的TobaccoAcidPyrophosphatase能有效识别mRNA5’末端的帽子位点，从而得到cDNA5’端全长序列。

◇RACE获得序列的验证

RACE获得序列后，将分别在已知序列和RACE获得的未知序列上设计引物进行PCR扩增，以电泳检测方式验证获取的RACE序列来源于已知序列。

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