【求助】关于最近滚环扩增遇到的障碍
2021-07-29
问题描述：
各位大侠好！我最近在做滚环扩增的时候遇到问题了，来和大家讨论一下，希望各路高手不吝赐教！
我做的是用锁式探针来检测dna模板的ram，探针80base，其中杂交区40base，引物分别为16、18base，连接酶选取的T4 ligase和Taq DNA ligase两种，分别对应恒温和变温情况下的扩增。水解体系为EXO I和Exo Ⅲ的混合体系，参考的外文文献，应该没什么问题。聚合酶用的是Bst DNA大片段聚合酶。
一开始选择的探针浓度为200pmol/L，扩增效果挺好，当时用的DNA模板是质粒阳性标准品，但是后来在做敏感性的时候发现条带梯度差异几乎没有，而且阴性也出带，后来就没法做敏感性和特异性验证了，实验停滞了2个月一直也没进展。
按理说RAM借助锁式探针扩增的独特方式以及水解体系的存在可以有效防止污染才对，希望大家给点建议该如何解决。
万分感谢！！！！！！！！！！
附一张以前做敏感性的图（marker为2000的DNA ladder）以做参考
*请输入10-500个字符
已帮助
0人
0人
wt328739041
用户
你好 我最近也在做滚环扩增 方法跟你的一样 用的试剂也很相似 在做等温扩增的那步时 用清水居然也可以跑出条带 感觉跟你的问题差不多 师兄说滚环扩增 很容易被污染 可是我换了环境和试剂后 还是会出现条带 请教一下 你的问题解决了吗 怎么解决的？
已帮助
0人
0人
fyf_anna
用户我也刚开始做，同样的水对照出条带，如何解决啊？？
▍
相关分类
▍
相关文章
樟脑(camphor) | 化学空间 ChemStation
MolBridge 化工产品供应商：产品目录第 1 页
Cancer Res|蛋白组学 多组学 肝癌患者肿瘤 发生和转移机制研究...
氯化铬英国高端液体三价铬盐 药水/中间体/原材料/添加剂 ...
cDNA末端的快速扩增(RACE)
Rules of siRNA design for RNA interference (RNAi)_实验方法
全基因组扩增实现百分之九十七覆盖率中国科学院
酵母双杂交原理与应用
9成新二手ABI7500荧光定量PCR仪
前列腺素B1 | 13345512
为您找到 8 件台式高速冷冻型微量离心机d3024r 相关产品信息
WCX纳米磁珠联合MALDITOFMS研究正常人血清蛋白指纹图谱的...
▍
相关问答
