Paragon Genomics 推出与华大智造测序平台兼容产品 分析 ...
货号: | PC3201 |
数量: | 大量 |
供应商: | 上海超研生物科技有限公司 |
保质期: | 1年 |
规格: | 200次 |
保存条件:
Tail A 和 Tail B 室温(15–25℃)干燥条件下可保存 12 个月; 2× Taq MasterMix -20℃可长期保存,多次冻融不会影响活性,如需经常使用,可存放于 4℃。
产品介绍:
本试剂盒采用独特的缓冲体系,试剂盒包含了快速制备基因组 DNA 和 PCR 扩增的所有试剂,适用于从小鼠尾巴一步法提取基因组 DNA 并用于 PCR 扩增。整个提取过程无需有机溶剂抽提,简便、快捷,而且质量稳定可靠。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点。此试剂盒用于快速提取鼠尾 DNA。提取的DNA 仅适用于 PCR 反应,不能用于酶切。
注意事项:
1.裂解缓冲液应放置于室温保存,如放在低温(-20℃或4℃)保存时有沉淀析出,可在56℃水浴中重新溶
解沉淀,并摇匀溶液后使用。
2.样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA 片段较小且提取量也下降。
适用范围:
适用于从鼠尾组织中一步法提取基因组DNA并用于PCR扩增,适用于大量快速的基因检测和筛查。
操作步骤:
1.取材:用剪刀或刀片切取0.5cm长度的鼠尾置于0.2ml的PCR管中,往每管中加入100ul Tail A溶液.。(如实验室中有加热块装置(heat block)可以将鼠尾置于1.5ml离心管中进行相同操作); 注意:鼠尾的长度和最后溶解DNA的溶液量是实验的关键,应视具体条件而定,最好做预实验来确定这两个变量。
2.用200ul吸头将鼠尾捣几下。激烈程度最好使尾部皮肤和尾骨分离,皮肤破碎。(如果处理的是幼鼠尾巴,可以预先剪掉200ul吸头前部0.2-0.3cm,用这种变成宽口吸头可以很容易将鼠尾破碎);
- 置于PCR仪(或加热块装置)上98度保持10分钟以裂解细胞;
4.用200ul吸头轻轻吹吸几下,并将100ul裂解物转移到1.5ml离心管中,加入100ul Tail B溶液,混匀,此时可立刻看见白色沉淀出现;
5.12000离心5分钟,除掉沉淀物;
6.小心吸取150ul左右的上清转移到另一个干净的1.5ml离心管中;
7.补加500ul的冷乙醇(乙醇冻存于-20度至少2小时),颠倒混匀,置于室温5分钟;
8.12000离心10分钟,弃上清;
9.加入1ml 70%乙醇,12000离心1分钟,弃上清,(如果处理大量样本,倒掉上清后立刻将管口倒扣在干净的吸水纸上,吸水纸可最大程度的将下流的乙醇吸干,同时乙醇会慢慢挥发,一般这种干燥方法需要30-60分钟);
10.12000离心30秒,用干净吸头吸掉生育的乙醇,注意别吸掉沉淀物;
11.打开管口,室温放置10分钟,使乙醇完全挥发干净;
12.加入50ul TE缓冲液或无菌水,溶解DNA;
13.PCR扩增,一般取2-5ul用于PCR反应;
实验流程:
反应举例:
2x Taq MasterMix
模板DNA
正向引物(10mM)
灭菌水
PCR反应循环的设置:
94℃ 3min;94℃ 30sec,55℃ 30sec,72℃ 1min 30 循环;72℃ 5min;
结果检测:
反应结束后取5μl 反应产物,琼脂糖凝胶电泳检测。
注意:举例仅供参考,实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异,需根据实际情况设定最佳反应条件。
温馨提示:不可用于临床治疗。
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发布于 : 2021-07-29
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