FDA批准来那度胺治疗套细胞淋巴瘤
| 实验材料 | 肝脏 试剂、试剂盒 | NKM 仪器、耗材 | 粗孔滤纸Teflon-玻璃匀浆器 实验步骤 | 1.制备溶液： NKM：0.13mol/LNaCl，5mmol/LKCl，8mmol/LMgCl2 0.34mol/L蔗糖，3mmol/LMgCl2 2.3mol/L蔗糖，10mmol/LMgCl2 0.34mol/L蔗糖，0.05mmol/LMgCl2 0.88mol/L蔗糖 2.（可选）用冰冷的NKM溶液灌注肝脏。 3.称组织重量，用剃刀或剪刀切成非常小的碎块，或者用组织压挤器进行压挤。 4.每克组织加10倍体积的含0.34mol/L蔗糖和3mmol/LMgCl2的溶液进行匀浆破碎细胞。 5.匀浆通过4层粗孔滤纸以去除结缔組织。 6.4℃，500g离心10分钟。 7.用紧密结合的Teflon-玻璃匀浆器匀浆使细胞核粗品重悬浮于10倍体枳（每克起始组织）的含2.3mol/L蔗糖，10mmol/LMgCl2的溶液中。 8.40000g离心1小时沉淀细胞核。 9.(可选）温和地将细胞核沉淀重悬浮于0.5倍体积的含0.34mol/L蔗糖，0.25%(w/v)TritonX-100和5mmol/LMgCl2的溶液中，500g离心10分钟得到沉淀。 10.将细胞核重悬浮于0.16倍体积的含0.34mol/L蔗糖和0.05mmol/LMgCl2的溶液中。 11.超声处理细胞核悬液4次，每次大约10秒钟。 12.在超声处理过的细胞核下面加一层含0.88mol/L蔗糖和0.05mmol/LMgCl2的溶液，2000g离心30分钟。 13.收集核仁沉淀。 |
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发布于 ： 2018-08-06
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