实验材料 肌组织试剂、试剂盒 Hanks胰蛋白酶血清胎汁仪器、耗材 纱布实验步骤 动物胚或幼体的大腿肌组织为最好的培养材料。取材常用生后1~2 天的乳鼠(Wistar 大鼠更好)。1. 杀死动物,无菌取大腿肌组织,切成0.3~0.5 厘米小块;2. 用不含钙镁离子的Hanks液配的0.25 %胰蛋白酶消化,无菌纱网或纱布滤过,合成培养基加10 %小牛(或马)血清培养,为促进分分蘖节经可加1 %的胎汁;3. 细胞接各量为2×106 /皿;接种在胶原或明胶的底物上能促进细胞分化。明胶制备比较简单,常用Hanks液配的0.01 %明胶。细胞接种率约为50 %;细胞生长开始呈纺锤形,培养50~52 小时后将出现融合形成肌细胞状多核纤维。数日后融合停止,此时能观察到横纹。一般在融合后二三天内能见到收缩现象;因收缩运动有时可导致细胞从底物脱离。在初代培养时,如发现成肌细胞(Myoblast)所占比......阅读全文
样品总RNA的提取
实验概要本实验介绍了样品总RNA的提取方法。完整RNA的提取和纯化,是进行RNA方面的研究工作,如Nothern杂交、mRNA分离、RT-PCR、定量PCR、cDNA合成及体外翻译等的前提。所有RNA的提取过程中都有五个关键点,即:样品细胞或组织的有效破碎;有效地使核蛋白复合体变性;对内源RNA酶的
Science新研究解析细胞融合机制
来自约翰霍普金斯大学的研究人员成功建立了一个高效的细胞融合系统,为研究细胞融合机制提供了一种新模型。科学家们发现,两细胞融合并非如某些人所推测的那样,是相等及相互的,而是由融合伙伴其中一个启动及驱动。他们认为,这一研究发现有可能促成改善肌营养不良症的治疗,因为肌肉再生依赖于细胞融合,才能生成包含
从成年骨骼肌分离和培养成肌细胞
实验方法原理 在添加 20 %(fetal bovine serum,FBS)的 Ham’s F12 培养中,原代细胞容易生长。在不改变培养条件的情况下,这些细胞增殖和分化,融合形成多个细胞核的肌管。这证明培养的细胞具有成肌性。实验材料 D-PBSA试剂、试剂盒 转运培养液生长培养液链酶菌蛋白酶液仪
常用的分子生物学基本技术
核酸分子杂交技术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性,它已成为分子生物学中最常用的基本技术,被广泛应用于基因克隆的筛选,酶切图谱的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下(适宜的温室度及离子强度等)可按碱基互补原成双链。杂交的
从成年骨骼肌分离和培养成肌细胞实验
实验方法原理 在添加 20%(fetal bovine serum, FBS) 的 Ham s F12 培养中,原代细胞容易生长。在不改变培养条件的情况下,这些细胞增殖和分化,融合形成多个细胞核的肌管。这证明培养的细胞具有成肌性。试剂、试剂盒 Ham F12FBSD-PBSA仪器、耗材 手术
细胞培养技术-3
◇水解乳蛋白 水解乳蛋白为淡黄色粉末,虽易潮解结块,但不影响使用。 不同批号和牌号质量有差异。水解乳蛋白是乳白蛋白经蛋白酶和肽酶水解后的产物,含有丰富的氨基酸。开始时它是专为猴肾细胞培养设计的,而实际上它对许多细胞系(株),如Hela细胞和原代细胞都是一种优良培养基。使用时用Hanks液配制成0
免疫细胞化学在神经科学中的应用-2
七、个体和种族发育的研究 神经系统是一个历史发展的产物,有种族发育和个体发育的历史。在种系发生方面,有不同的发育规律,如一些神经肽自腔肠动物已经发生,而VIP自鱼类才开始发生。免疫反应的强弱和神经肽的含量亦因种属不同而异,如笔者对输精管的神经支配的研究表明,在大鼠、豚鼠和猫等动物,输精管管壁内有丰
肌组织细胞培养实验——骨骼肌细胞培养实验
实验材料肌组织试剂、试剂盒Hanks胰蛋白酶血清胎汁仪器、耗材纱布实验步骤动物胚或幼体的大腿肌组织为最好的培养材料。取材常用生后1~2 天的乳鼠(Wistar 大鼠更好)。1. 杀死动物,无菌取大腿肌组织,切成0.3~0.5 厘米小块;2. 用不含钙镁离子的Hanks液配的0
胎牛血清培养血管平滑肌细胞常用的方法
胎牛血清培养血管平滑肌细胞常用的方法有贴块法(explant)和酶解离法(enzyme disperse)。下面一起来看下这两种方法。1、贴块法方法:动物经颈动脉放血后,在无菌操作下迅速取出胸腹主动脉段,置于含Hank s液的平皿中漂洗3次,将凝块洗干净后剥除外膜的纤维脂肪层,然后纵行切开血
总RNA的提取
完整RNA的提取和纯化,是进行RNA方面的研究工作,如Nothern杂交、mRNA分离、RT-PCR、定量PCR、cDNA合成及体外翻译等的前提。所有RNA的提取过程中都有五个关键点,即1):样品细胞或组织的有效破碎;2),有效地使核蛋白复合体变性;3),对内源RNA酶的有效抑制;4)有
世界首例生物肢体:实验室里“种”出的大鼠前肢
猜猜上图中的物体是什么?这看起来像是一截被砍断的老鼠爪子,不过正确答案可能比你想象的更加振奋人心:这截大鼠前肢其实是科学家们在实验室中用活体细胞培育出来的人工产物。尽管尚不完美,但这一技术可能会在未来帮助人们研制出真正具有生物学功能的义肢。 “我们目前将研究的重点放在前臂与手掌上,用于模型系统
原代心肌细胞培养方法探讨
摘要 探讨培养Wister新生大鼠心肌细胞的可靠方法。采用心肌组织块差别消化结合化学纯化的培养方法,通过倒置显微镜、HE染色、透射电镜、台盼篮、免疫细胞化学,鉴定心肌细胞生长情况及纯度。结果细胞生长迅速、自行搏动,细胞形态完整,细胞内肌丝、线粒体清晰;细胞成活率达94.6%;肌动蛋白(HHF35)经
新生大鼠心肌细胞原代培养实验——原代培养技术
新生大鼠心肌细胞原代培养可应用于:(1)细胞保种;(2)用于细胞形态研究;(3)应用于临床研究。实验方法原理将大鼠的心肌细胞从机体中取出,经胰酶、螯合剂(常用EDTA)处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖。实验材料SD 乳鼠试剂、试剂盒低糖 DMEM、胰酶EDTA青链
总RNA提取实验
实验方法原理 GTC和N-十二烷基肌氨酸钠的联合使用,将促使核蛋白复合体的解离,使RNA 与蛋白质分离,并将RNA 释放到溶液中。而进一步从复合体中纯化RNA ,则根据Chomc zynski和Sacchi的一步快速抽提法进行,采用酸性酚-氯仿混合液抽提。低pH值的酚将使RNA 进入水相
正常大鼠原代主动脉平滑肌细胞培养
一、实验试剂1、培养基: PriCells Medium + 10% FBS + 1% P/S + PriCells Supplement2、冻存液: PriCells Medium + 20% FBS + 10% DMSO3、洗涤液: 1 × PBS (pH 7.4 )+ 1% P/S
干细胞的分类和不同功能
干细胞(stem-cell)即为起源细胞,是指尚未发育成熟的细胞,它具有多分化潜能和自我复制的功能,在特定条件下,可以分化成不同的功能细胞,形成多种组织和器官。这是继药物治疗和手术治疗后有又一场医疗革命,被称之为医学上的奇迹。根据其分化潜能不同,可分为全能干细胞、多能干细胞、单能干细胞。1、全能干细
总RNA提取实验
实验方法原理 一些公司推出的总RNA 提取试剂盒,可以用来制备高质量的可用于建库的RNA 。该总RNA 纯化系统采用两种著名的RNA 酶抑制剂,异硫氰酸弧(GTC)和β-巯基乙醇
癌症免疫细胞治疗知识:CAR-T与TCR-T的区别在哪里?
肿瘤免疫治疗,实际上分为两大类。一种把肿瘤的特征“告诉”免疫细胞,让它们去定位,并造成杀伤;另一种是解除肿瘤对免疫的耐受/屏蔽作用,让免疫细胞重新认识肿瘤细胞,对肿瘤产生攻击(一般来说,肿瘤细胞会巧妙伪装,逃脱免疫的监视)。 第一种情况,因为要利用机体自身的免疫细胞,因此,目前多为免疫细胞治疗
浅谈一般的细胞传代方法
开始细胞传代前,仔细检查细胞传代所需的仪器和试剂是否齐全。 细胞与试剂方面: 1、细胞(单层细胞,镜检适合) 2、培养液(MEM-0.2%LH 培养液或MEM 培养液或199 等适合细胞有要求的培养液) 3、灭活小牛血清、庆大霉素溶液(1 万单位) 4、7.5%NaHC03 溶液 5、0.25%胰
连缀转录分析实验
实验方法原理 离心机和转头,沸腾的水浴锅, Dounce 匀浆器,晶型塑料或超明亮型吊桶式离心管,聚丙烯管,刀片,预设到 30°C 的振荡水浴,预设到 4°C 和 65°C 的水浴
检测细胞凋亡的实验方法比较-2
二、细胞凋亡的细胞化学测定细胞凋亡的细胞化学测定包括细胞表面(细胞膜)的结构和通透性改变的测定和细胞核DNA改变的测定。根据应用的范围,又可分为细胞群休和单个细胞测定两种,以下仅介绍其中几种较为常用的方法。碘化丙啶(propidium iodide,PI)检测早期死亡细胞膜通透性状态的不同是区分细胞
脉冲场凝胶电泳制备DNA(哺乳动物细胞和组织DNA的分离)
本方案叙述了从培养细胞和组织制备 DNA 样品的方法。病人或动物来源的白细胞也能用作 PFGE 的高分子质量 DNA 样品。如果确有必要,DNA 也可以从哺乳动物细胞分离出的胞核制备。经验表明:从胞核制备 DNA 没有优点,因为从完整细胞制备的 DNA 同样易于酶切。本实验来源「分子克隆实验指南第三
PNAS:细胞的自然之力
如果将特定类型的活细胞涂布在显微镜载玻片上,细胞会在玻片上缓缓移动,找到它们的邻居,自组装成为简单原始的组织。斯坦福大学的新研究能解释这一现象,并能帮助人们理解复杂生物体的机械力结构和行为。 化学工程师Alexander Dunn博士和斯坦福大学的一个跨学科研究团队,对活细胞内和细胞间
总RNA提取实验——试剂盒快速提取法
总RNA提取可以:(1)获得高纯度、高质量的总RNA;(2)可以满足生物学下游实验Northern Blot、核酸酶保护实验、RT-PCR、qRT-PCR 和阵列分析所需。实验方法原理一些公司推出的总RNA 提取试剂盒,可以用来制备高质量的可用于建库的RNA 。该总RNA 纯化系统采用两种著名的RN
通过高等真核生物无细胞提取物分析mRNA的降解实验
实验方法原理
细胞的环境、复制周期的状态和分化状态的改变会引起一些 mRNA 半衰期的改变。
通过高等真核生物无细胞提取物分析mRNA的降解实验
实验方法原理 细胞的环境、复制周期的状态和分化状态的改变会引起一些 mRNA 半衰期的改变。实验材料 DEPC细胞多聚核糖体RNA底物试剂、试剂盒 乙酸钾乙酸镁DTTTris-乙酸组织培养液无菌去离子水磷酸肌酸ATPGTP乙酸钾精胺RNase 抑制剂仪器、耗材 高温烤箱匀浆器研杵低速离心机超速离心机